Суббота , 25 сентября 2021
Главная / Разное / Вайпер электронные: Электронные сигареты, купить электронную сигарету в Москве и по России

Вайпер электронные: Электронные сигареты, купить электронную сигарету в Москве и по России

Содержание

Ученые рассказали, как на самом деле действуют электронные сигареты

https://ria.ru/20190531/1555110559.html

Ученые рассказали, как на самом деле действуют электронные сигареты

Ученые рассказали, как на самом деле действуют электронные сигареты — РИА Новости, 09.03.2021

Ученые рассказали, как на самом деле действуют электронные сигареты

На днях Мосгордума единогласно поддержала предложение приравнять электронные сигареты и кальяны к обычным табачным изделиям. Теперь законопроект рассмотрят в… РИА Новости, 09.03.2021

2019-05-31T08:00

2019-05-31T08:00

2021-03-09T18:50

всемирный день без табака

рак

воз

московская городская дума

наука

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdn25.img.ria.ru/images/155513/85/1555138570_0:71:1152:719_1920x0_80_0_0_54101a87745f2db821b54886b60c3195.jpg

МОСКВА, 31 мая — РИА Новости, Татьяна Пичугина. На днях Мосгордума единогласно поддержала предложение приравнять электронные сигареты и кальяны к обычным табачным изделиям. Теперь законопроект рассмотрят в Государственной думе. О том, насколько опасны для здоровья электронные сигареты и помогают ли они, как утверждает реклама, бросить курить — в материале РИА Новости.Слабое звеноЭлектронные сигареты изобрели в Китае в 2003 году. В отличие от обычных, где практически в открытом огне сгорает табак, в устройствах нового типа нагревается жидкость, а курильщик вдыхает не дым, а пар. По-английски — vapor. Отсюда другое название системы — вейп, сам процесс курения часто называют вейпингом.Производители утверждают, что электронные сигареты помогают бросить курить и менее вредны для здоровья, чем обычные. Однако научных доказательств этому нет.»С вопросами по поводу электронных сигарет к нам иногда обращаются. Согласно докладу ВОЗ, их нельзя считать безвредными и врачи не должны их рекомендовать как средство отказа от курения. Они содержат ароматизаторы, пропиленгликоль, различные добавки. Кроме того, там есть никотин, который вызывает зависимость», — отмечает в беседе с РИА Новости Ольга Суховская, руководитель Консультативного телефонного центра помощи в отказе от потребления табака при Санкт-Петербургском научно-исследовательском институте фтизиопульмонологии.Эксперт подчеркивает, что вейпы способствуют приобщению подростков к курению, молодежь — целевая аудитория производителей. «К электронным сигаретам прилагаются различные вкусовые добавки, чтобы молодые люди пробовали, экспериментировали. Таким образом потребителей делают зависимыми, потому что никотин — это психоактивное вещество», — подчеркивает Ольга Суховская.Рынок растет, ученые волнуютсяСпециалисты продолжают изучать влияние электронных сигарет на здоровье человека и популяции в целом, на формирование никотиновой зависимости.Работ, посвященных этим вопросам, огромное количество во всем мире, но данных, чтобы сделать однозначные выводы, недостаточно. Требуется собирать статистику еще лет пятнадцать.ВОЗ рекомендует вводить ограничения на продажу электронных сигарет и других систем доставки никотина. Вейпы запрещены только в 27 странах. В остальном мире этот рынок регулируется слабо или вообще никак.Пока электронные сигареты занимают не больше десятой доли рынка табачных изделий, но ситуация быстро меняется. Особенно много пользователей в богатых странах, где продажи вейпов недостаточно контролируются, как, например, в Великобритании, Новой Зеландии, США. Это показала международная группа ученых, проводившая опросы в 14 странах. Согласно исследованию, вейпы используют в основном курильщики либо те, кто недавно бросил. В бедных странах они менее популярны, поскольку люди просто не могут себе позволить электронные устройства.По данным Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, в стране сейчас больше трех с половиной миллионов пользователей различных электронных средств доставки никотина. Среди старшеклассников их доля выросла с 2017 года на 78 процентов.»Та же зависимость от табака»В России, так же как и в Европе, электронные сигареты появились в 2008 году. Сейчас они занимают около двух процентов рынка обычных табачных изделий, но доля растет. Это вызывает беспокойство властей, учитывая потенциальный вред здоровью и дурное влияние на молодежь.Еще больше опасения внушают новые средства доставки никотина — например, системы нагреваемого табака, изобретенные в США и Японии. Они используют электрический подогрев до 350 градусов, что в два раза ниже температуры горения табака в сигарете. Соответственно, образуется аэрозоль, где содержится высокоактивный никотин. Его и вдыхает курильщик.ВОЗ настаивает, что все виды табачных изделий вредны, включая нагреваемые системы.»Вейперы считают: лучше «парить», чем курить, то есть электронным сигаретам приписывают меньший вред в сравнении с традиционными. Однако разумнее не «парить» и не курить. Медики объясняют — неважно, каким образом никотин поступает в организм: посредством вдыхания дыма от тлеющей сигареты, пара либо иного варианта ингаляции, — это вредно, потому что никотин вызывает привыкание, иными словами, это та же зависимость от табака, только завернутая в инновационную упаковку. Я как медик больших отличий не вижу», — говорит Мария Винникова, доктор медицинских наук, психиатр-нарколог, профессор Сеченовского университета.Пока еще неясно, насколько выраженный вред здоровью несет употребление электронных сигарет, так как они сравнительно недавно массово используются. Однако пилотные когортные исследования, которые проводятся в разных странах, позволяют сделать выводы о том, что негативное влияние на организм электронных сигарет сравнимо с обычным курением: это различные заболевания ротовой полости, сердечно-сосудистые и легочные недуги, в том числе и онкологические.»В обоих случаях основное психоактивное вещество — никотин. Неважно, в каких количествах он вдыхается, вред одинаков. Кроме того, с паром в организм попадают токсические вещества типа диэтиленгликоля или нитрозамина, которые обладают канцерогенным действием и при постоянном вдыхании оказывают не только местное негативное действие, например на слизистую рта, но и системное влияние на организм через дыхательную, сердечно-сосудистую и другие тесно с ними связанные системы», — подчеркивает профессор.Включайте логикуСреди любителей широко распространено мнение, что вейпы используют при лечении табачной зависимости. Однако это глубокое заблуждение. Если раньше ученые спорили, можно ли их применять в лечебном процессе, то теперь вопрос закрыт. «ВОЗ категорически против внедрения вейпов в лечебный процесс, их использование нельзя считать частью лечебной программы. Этой же позиции придерживаются специалисты в большинстве стран Европы, Америки. Россия не исключение», — говорит Мария Винникова. Она приводит результаты широкомасштабного исследования двух десятков картриджей для электронных сигарет различных производителей, опубликованные Управлением по контролю качества продуктов и лекарств США (FDA). Выводы неутешительные: в подавляющем большинстве картриджей обнаружены табак-специфичные канцерогенные вещества, такие как нитрозамин, гликолевые производные.Исследование выявило более высокое содержание никотина в жидкостях вопреки заявленному. Его нашли даже в тех картриджах, которые относились к безникотиновым. В результате FDA также заняло жесткую позицию: использовать электронные сигареты недопустимо, особенно подростками, поскольку они способствуют формированию никотиновой зависимости, развитию легочных и других заболеваний.Согласно отчету ученых из Национального центра по предотвращению хронических болезней и пропаганде здорового образа жизни США, примерно семь процентов женщин во время беременности, до и сразу после используют электронные сигареты, причем 38 процентов из них — никотинсодержащие. Опрос проходил в 2015 году в двух американских штатах, но он показывает общую тенденцию.Половина опрошенных женщин полагает, что электронные сигареты менее вредны, поэтому их допустимо использовать при вынашивании ребенка. Однако ученые настаивают, что беременным вейпы в любом виде противопоказаны. Они далеко не безвредны для организма матери и плода. Никотин в любом количестве токсичен, также как и другие содержащиеся в аэрозоле вещества.Ошибочно и другое расхожее убеждение — что с помощью вейпов можно контролировать вес. «В основе лежит миф о том, что курение способно снижать аппетит. Никотин действительно притупляет чувство голода, в основе этого лежат довольно сложные нейрохимические и психологические механизмы. Если бросить курить, то прекращается действие никотина на мозг, растет аппетит. Так как слизистая желудка начинает функционировать нормально, всасываемость пищи улучшается, еда усваивается лучше, в связи с чем на первых порах происходит набор веса. Но важно понимать, что после нормализации метаболизма масса тела должна вернуться к норме. Простая логика говорит, что вред от вейпинга или курения будет во много раз большим по сравнению с любым другим результатом», — заключает Винникова.

https://ria.ru/20180921/1529018054.html

https://ria.ru/20190520/1553638188.html

https://ria.ru/20181024/1531315518.html

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2019

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn25.img.ria.ru/images/155513/85/1555138570_56:0:1141:814_1920x0_80_0_0_90f61a60edb3863a66d3a92d2552d665.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

всемирный день без табака, рак, воз, московская городская дума

МОСКВА, 31 мая — РИА Новости, Татьяна Пичугина. На днях Мосгордума единогласно поддержала предложение приравнять электронные сигареты и кальяны к обычным табачным изделиям. Теперь законопроект рассмотрят в Государственной думе. О том, насколько опасны для здоровья электронные сигареты и помогают ли они, как утверждает реклама, бросить курить — в материале РИА Новости.

Слабое звено

Электронные сигареты изобрели в Китае в 2003 году. В отличие от обычных, где практически в открытом огне сгорает табак, в устройствах нового типа нагревается жидкость, а курильщик вдыхает не дым, а пар. По-английски — vapor. Отсюда другое название системы — вейп, сам процесс курения часто называют вейпингом.

Производители утверждают, что электронные сигареты помогают бросить курить и менее вредны для здоровья, чем обычные. Однако научных доказательств этому нет.

«С вопросами по поводу электронных сигарет к нам иногда обращаются. Согласно докладу ВОЗ, их нельзя считать безвредными и врачи не должны их рекомендовать как средство отказа от курения. Они содержат ароматизаторы, пропиленгликоль, различные добавки. Кроме того, там есть никотин, который вызывает зависимость», — отмечает в беседе с РИА Новости Ольга Суховская, руководитель Консультативного телефонного центра помощи в отказе от потребления табака при Санкт-Петербургском научно-исследовательском институте фтизиопульмонологии.

Эксперт подчеркивает, что вейпы способствуют приобщению подростков к курению, молодежь — целевая аудитория производителей.

«К электронным сигаретам прилагаются различные вкусовые добавки, чтобы молодые люди пробовали, экспериментировали. Таким образом потребителей делают зависимыми, потому что никотин — это психоактивное вещество», — подчеркивает Ольга Суховская.

Рынок растет, ученые волнуются

Специалисты продолжают изучать влияние электронных сигарет на здоровье человека и популяции в целом, на формирование никотиновой зависимости.

Работ, посвященных этим вопросам, огромное количество во всем мире, но данных, чтобы сделать однозначные выводы, недостаточно. Требуется собирать статистику еще лет пятнадцать.

ВОЗ рекомендует вводить ограничения на продажу электронных сигарет и других систем доставки никотина. Вейпы запрещены только в 27 странах. В остальном мире этот рынок регулируется слабо или вообще никак.

Пока электронные сигареты занимают не больше десятой доли рынка табачных изделий, но ситуация быстро меняется. Особенно много пользователей в богатых странах, где продажи вейпов недостаточно контролируются, как, например, в Великобритании, Новой Зеландии, США. Это показала международная группа ученых, проводившая опросы в 14 странах.

Согласно исследованию, вейпы используют в основном курильщики либо те, кто недавно бросил. В бедных странах они менее популярны, поскольку люди просто не могут себе позволить электронные устройства.

По данным Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, в стране сейчас больше трех с половиной миллионов пользователей различных электронных средств доставки никотина. Среди старшеклассников их доля выросла с 2017 года на 78 процентов.

«Та же зависимость от табака»

В России, так же как и в Европе, электронные сигареты появились в 2008 году. Сейчас они занимают около двух процентов рынка обычных табачных изделий, но доля растет. Это вызывает беспокойство властей, учитывая потенциальный вред здоровью и дурное влияние на молодежь.

Еще больше опасения внушают новые средства доставки никотина — например, системы нагреваемого табака, изобретенные в США и Японии. Они используют электрический подогрев до 350 градусов, что в два раза ниже температуры горения табака в сигарете. Соответственно, образуется аэрозоль, где содержится высокоактивный никотин. Его и вдыхает курильщик.

ВОЗ настаивает, что все виды табачных изделий вредны, включая нагреваемые системы.

«Вейперы считают: лучше «парить», чем курить, то есть электронным сигаретам приписывают меньший вред в сравнении с традиционными. Однако разумнее не «парить» и не курить. Медики объясняют — неважно, каким образом никотин поступает в организм: посредством вдыхания дыма от тлеющей сигареты, пара либо иного варианта ингаляции, — это вредно, потому что никотин вызывает привыкание, иными словами, это та же зависимость от табака, только завернутая в инновационную упаковку. Я как медик больших отличий не вижу», — говорит Мария Винникова, доктор медицинских наук, психиатр-нарколог, профессор Сеченовского университета.

Пока еще неясно, насколько выраженный вред здоровью несет употребление электронных сигарет, так как они сравнительно недавно массово используются. Однако пилотные когортные исследования, которые проводятся в разных странах, позволяют сделать выводы о том, что негативное влияние на организм электронных сигарет сравнимо с обычным курением: это различные заболевания ротовой полости, сердечно-сосудистые и легочные недуги, в том числе и онкологические.

«В обоих случаях основное психоактивное вещество — никотин. Неважно, в каких количествах он вдыхается, вред одинаков. Кроме того, с паром в организм попадают токсические вещества типа диэтиленгликоля или нитрозамина, которые обладают канцерогенным действием и при постоянном вдыхании оказывают не только местное негативное действие, например на слизистую рта, но и системное влияние на организм через дыхательную, сердечно-сосудистую и другие тесно с ними связанные системы», — подчеркивает профессор.

21 сентября 2018, 08:00НаукаУченые объяснили, почему вейпы окажутся вне закона

Включайте логику

Среди любителей широко распространено мнение, что вейпы используют при лечении табачной зависимости. Однако это глубокое заблуждение. Если раньше ученые спорили, можно ли их применять в лечебном процессе, то теперь вопрос закрыт.

«ВОЗ категорически против внедрения вейпов в лечебный процесс, их использование нельзя считать частью лечебной программы. Этой же позиции придерживаются специалисты в большинстве стран Европы, Америки. Россия не исключение», — говорит Мария Винникова.

Она приводит результаты широкомасштабного исследования двух десятков картриджей для электронных сигарет различных производителей, опубликованные Управлением по контролю качества продуктов и лекарств США (FDA). Выводы неутешительные: в подавляющем большинстве картриджей обнаружены табак-специфичные канцерогенные вещества, такие как нитрозамин, гликолевые производные.

20 мая 2019, 14:17

Комиссия МГД одобрила проект о запрете вейпов в общественных местах

Исследование выявило более высокое содержание никотина в жидкостях вопреки заявленному. Его нашли даже в тех картриджах, которые относились к безникотиновым. В результате FDA также заняло жесткую позицию: использовать электронные сигареты недопустимо, особенно подростками, поскольку они способствуют формированию никотиновой зависимости, развитию легочных и других заболеваний.

Согласно отчету ученых из Национального центра по предотвращению хронических болезней и пропаганде здорового образа жизни США, примерно семь процентов женщин во время беременности, до и сразу после используют электронные сигареты, причем 38 процентов из них — никотинсодержащие. Опрос проходил в 2015 году в двух американских штатах, но он показывает общую тенденцию.

Половина опрошенных женщин полагает, что электронные сигареты менее вредны, поэтому их допустимо использовать при вынашивании ребенка. Однако ученые настаивают, что беременным вейпы в любом виде противопоказаны. Они далеко не безвредны для организма матери и плода. Никотин в любом количестве токсичен, также как и другие содержащиеся в аэрозоле вещества.

Ошибочно и другое расхожее убеждение — что с помощью вейпов можно контролировать вес. «В основе лежит миф о том, что курение способно снижать аппетит. Никотин действительно притупляет чувство голода, в основе этого лежат довольно сложные нейрохимические и психологические механизмы. Если бросить курить, то прекращается действие никотина на мозг, растет аппетит. Так как слизистая желудка начинает функционировать нормально, всасываемость пищи улучшается, еда усваивается лучше, в связи с чем на первых порах происходит набор веса. Но важно понимать, что после нормализации метаболизма масса тела должна вернуться к норме. Простая логика говорит, что вред от вейпинга или курения будет во много раз большим по сравнению с любым другим результатом», — заключает Винникова.24 октября 2018, 08:00НаукаУченые назвали самый эффективный способ бросить курить

Шесть вейперов в США умерли, сотни заболели. Что об этом известно?

  • Николай Воронин
  • Корреспондент по вопросам науки

Автор фото, Getty Images

В США число погибших от загадочной болезни легких, вызванной курением электронных сигарет, достигло шести человек. Еще почти 400 вейперов с аналогичными симптомами находятся под наблюдением врачей, 60 из них — в Нью-Йорке.

В воскресенье губернатор штата Нью-Йорк Эндрю Куомо экстренным распоряжением запретил продажу на территории штата ароматизированных электронных сигарет. Ранее аналогичный запрет был введен в Мичигане, на очереди — Калифорния и Массачусетс.

На прошлой неделе проблему обсуждали в Белом доме. Министр здравоохранения Алекс Азар пообещал в ближайшее время разработать план по полному выводу из продажи ароматизированных жидкостей для вейпов — на рынке должны остаться только электронные сигареты со вкусом табака.

При этом изначально вейпинг позиционировали как более безопасную альтернативу традиционному курению. В электронных сигаретах нет табака, и даже никотин — совсем не обязательный ингредиент курительной жидкости.

Как развивались события?

Первые сообщения о вспышке тяжелой болезни легких среди вейперов появились в начале августа, хотя позже выяснилось, что у некоторых пациентов симптомы начали проявляться еще в апреле.

Курильщики электронных сигарет — в основном молодые люди в возрасте около 20 лет — начали обращаться к врачу с жалобами на затрудненное дыхание, кашель и боли в груди, причем симптомы с каждым днем ухудшались. У некоторых болезнь сопровождалась повышенной температурой, тошнотой, рвотой или болью в животе.

К середине месяца в 14 штатах было госпитализировано уже в общей сложности почти 100 человек. Некоторых из них пришлось поместить в реанимацию и даже подключить к аппарату искусственного дыхания.

23 августа власти Иллинойса сообщили о первом погибшем пациенте.

«Тяжесть болезни, от которой страдают люди, настораживает, — заявила тогда глава департамента здравоохранения штата. — Мы должны рассказать всем, что вейпинг может быть опасен».

Автор фото, Getty Images

По последним данным, американские власти подтвердили 380 случаев тяжелого легочного заболевания, вызванного курением электронных сигарет, в 36 штатах.

Шесть пациентов, доставленных в больницы, погибли. О них информации немного, однако известно, что по меньшей мере трое из них — люди не молодые, а среднего и пожилого возраста.

Что именно вызывает болезнь?

Наверняка мы этого не знаем, хотя у медиков есть несколько весьма правдоподобных предположений.

Центры по контролю за заболеваниями США подчеркивают: «Мы пока не знаем, что именно вызвало эти случаи заболевания. Проводимое расследование не смогло указать на конкретные электронные сигареты или другие продукты, используемые для вейпинга (устройства, жидкости, сменные капсулы и/или картриджи), или конкретные вещества, которые бы связывали все случаи».

При этом многие эксперты полагают, что легочная недостаточность может быть вызвана вдыханием паров витамина Е в масляной форме. Он содержится в различных добавках, используемых при приготовлении жидкостей для электронных сигарет.

При наружном применении и даже употреблении в пищу витамин Е безопасен (если не превышать дозировку), но при попадании в легкие он вполне может нарушать нормальный дыхательный процесс.

То же касается и некоторых ароматизаторов, которые могут разлагаться при нагревании, образуя новые вещества, отсутствующие в оригинальной отдушке.

Кроме того, воспалительную реакцию в легких могут вызывать и сами базовые компоненты курительной жидкости — обычно это смесь глицерина и пропиленгликоля.

Действительно ли вейпинг менее вреден, чем курение?

Простой ответ на этот вопрос — мы не знаем.

Первые электронные сигареты появились в продаже только в 2006 году — и, несмотря на огромную популярность вейпинга по всему миру, особенно в молодежной среде, о его влиянии на организм в долгосрочной перспективе известно крайне мало.

При этом многие курильщики переключились на них с обычных сигарет именно потому, что производители вейпов позиционировали их как более безопасную альтернативу вредной привычке.

С одной стороны, курильщики электронных сигарет вдыхают густой пар закипевшей жидкости, а не табачный дым, содержащий тысячи вредных для здоровья химических соединений (хотя никотин опасен вне зависимости от формы употребления).

Автор фото, EPA

С другой, считать пар вейпа безопасным тоже никак нельзя. Помимо упомянутых выше компонентов, там содержится масса «потенциально вредных» соединений (их список американский минздрав начал вести только в прошлом году) и немало хорошо известных токсичных примесей, включая канцерогены и отравляющие вещества. Это не говоря уже о дешевых наполнителях кустарного производства.

Кроме того, есть убедительные доказательства того, что пар электронных сигарет содержит следы металлов — либо от нагревательного элемента, либо от других частей курительного устройства.

Ученые продолжают изучать влияние вейпинга на здоровье.

Буквально месяц назад была опубликована очередная статья, авторы которой обнаружили в легких вейперов повышенное содержание ферментов протеазы — как и у обычных курильщиков. При этом известно, что у «табачников» это может привести к развитию эмфиземы.

«Наши результаты показывают, что вейпинг может быть ничуть не менее опасен, чем курение», — утверждает профессор клеточной биологии в Университете Северной Каролины и основной автор работы Роберт Таран.

Вредна ли электронная сигарета (вейп)? Чем вредна электронная сигарета?

О вреде или пользе любой электронной сигареты можно спорить бесконечно. Электронная сигарета, конечно, не комплекс витаминов, но в то же время и не табачная сигарета. Это к тому, что она имеет как плюсы, так и минусы. Мы будем предельно честны и попытаемся предоставить настолько правдивую информацию, насколько мы можем доверять самим себе.
Итак, давайте разберемся, вредна ли электронная сигарета?

Буквально со дня изобретения подобная новинка вызывает
споры среди медиков, курильщиков и тех, кто решил
попробовать вайпинг впервые.

Врачи

Некоторые врачи утверждают, что она нагревается и выделяет вместе с паром еще дополнительные вредные вещества.

Курильщики

Некоторые курильщики сетуют на то, что новомодная электронная сигарета им не заменит любимые табачные, другие же говорят про удобство и улучшение самочувствия.

Некурящие

Некурящее окружение также разделилось: некоторым нравится отсутствие запаха и дыма, а другие склонны полагать, что курильщик меняет «одну гадость на другую»

Стоит сказать, что основные споры ведутся именно вокруг пара. Ведь само изобретение не нанесет никакого вреда: током не ударит и в руках не загорится. Хотя неоригинальные сигареты, приобретенные с рук, еще и не такое могут.

Большинство слухов относительно вреда пара от вейпа возникает именно из-за того, что люди ничего не знают о составе жидкости, из которой он получается. А если и знают, то неверно понимают свойства тех или иных составляющих. Разберемся в этом вопросе

Состав жидкости

Она состоит всего из пяти, а то и из четырех компонентов. Никотин в ее составе не всегда присутствует — существуют и безникотиновые жидкости. Свойства каждого вещества в составе хорошо известны, в отличие от тех, что присутствуют в табачном дыме.

Для некоторых аллергиков электронные сигареты вредны именно из-за ароматизатора. Поэтому перед тем, как попробовать какую-либо жидкость, рекомендуем убедиться в том, что у вас нет аллергии на ее компоненты.

Пропиленгликоль, глицерин и ароматизаторы к тому же активно используются и в пищевой промышленности. Таким образом, пар, который выпускает курильщик, абсолютно безопасен для окружающих, потому что он не содержит никаких продуктов горения, канцерогенов и всем известных вредных смол. Никотин же полностью поглощается курильщиком при затяжке. Выдыхаемый остаток быстро рассеивается вместе с паром и образует незначительные концентрации даже в небольших помещениях.

Кстати, о канцерогенах…

Вредны или нет электронные сигареты, пытались понять и ученые из Новой Зеландии. Они проводили исследование (http://www.healthnz.co.nz/cancerrisk.htm) на предмет влияния модного изобретения на возникновение предраковых состояний. В итоге ученым удалось установить, что пар не является причиной рака, т.к. он не содержит никаких канцерогенов. А, как известно, дым табачных сигарет заключает в себе около 4000 вредных веществ, в том числе и те, что вызывают рак.

Поэтому курильщикам рекомендуется полностью перейти на электронное курение, ведь если вы будете одновременно с электронной сигаретой за сутки выкуривать хотя бы одну табачную, риск преждевременной смерти увеличится вдвое!

Но не стоит думать, что новомодное устройство не принесет вреда вашему организму. Электронные сигареты вредны, если в жидкости присутствует никотин. Этот стимулятор — причина возникновения сердечных заболеваний. Никотин является угрозой для здоровья. А вот жидкость без никотина сводит вред электронных сигарет к минимуму.

Для кого и чем вредны электронные сигареты?

Электронная сигарета — это вещь, которая при всех своих плюсах может быть противопоказана некоторым людям. Так, мы категорически не рекомендуем использовать электронные сигареты:
Лицам до 18 лет

Во избежание задержек в развитии организма и привыкания к курению. В юном возрасте человек особо восприимчив к приобретению новых привычек.

Беременным и кормящим

женщинам. Если даже такая серьезная мотивация, как ожидание появления ребенка, не может заставить женщину окончательно отказаться от привычки, то замена табачной сигареты электронной — выбор хоть и более безопасный, но все равно приносящий вред малышу.

Некурящие

Использование даже безникотиновой жидкости может стать отправной точкой для, того чтобы впоследствии пристраститься к курению с никотином. Не стоит начинать, если вы никогда не брали сигарету в рот. Никотин — яд, он вызывает сильнейшую зависимость, а электронная сигарета, в первую очередь, — проводник для поступления в организм никотина!

Курильщикам с аллергией на компоненты жидкости

Вред электронных сигарет для них заключается непосредственно в составе жидкости для курения. Поэтому употребление такого «раздражителя» может привести к серьезным проблемам со здоровьем.

А вредна ли электронная сигарета (вейп) для любого другого курильщика со стажем? Если человек не имеет отношения ко всем перечисленным выше пунктам, то использование электронного устройства обернется для него только положительными моментами:

  • не будет запаха табака и дыма;
  • постепенно уйдет желтизна зубов и пальцев;
  • со временем полностью исчезнет одышка;
  • цвет лица значительно улучшится;
  • десны перестанут кровоточить;
  • возвратятся более яркие вкусовые ощущения.

Как видите, польза и вред электронных сигарет достаточно относительны и неотделимы от человека.

Электронная сигарета — вред или польза при отказе от курения

Те, кто уже долгое время безуспешно пытаются отказаться от привычки курить, знают, что резко раз и навсегда бросить сигареты сложно. Нужно проходить ряд мучительных стадий, прятаться и покуривать, либо «облепливаться» никотиновыми пластырями. К тому же близкие люди зачастую настаивают на том, что «раз бросать, так бросать!» и заменители искать не надо, а то получится, что одну привычку на другую меняешь.

Для того, чтобы отказаться раз и навсегда от привычки, нужны сильные мотивация и воля, никотиновые пластыри и леденцы тут ни при чем. Резкие перемены в жизни — это стресс, а в такой ситуации человеку сложно принимать обдуманные и последовательные решения. Именно это зачастую становится причиной рецидива: не отказ от потребления никотина как такового, а смена образа жизни, которая сопровождает этот отказ. Хотя если вы сильный волей человек и сдержали обещание, что эта сигарета будет последней в жизни, то это достойно уважения.

Сила воли!

Риск рецидива и возврата к обычным сигаретам особенно высок в первый год отказа от табака.

Те, кто уже долгое время не может бросить курить, могут попробовать отказаться от табакокурения с помощью электронной сигареты. Для этого с периодичностью в несколько месяцев необходимо снижать крепость жидкости для курения, чтобы в последствии перейти на безникотиновую. А иногда помогает и обратное — резкое увеличение крепости жидкости. Тогда курильщик не испытывает дискомфорт при курении электронной сигареты, что побуждает его к полному отказу (т.к. обычные сигареты не переносит на дух уже после месяца вайпинга).

Постепенный отказ от никотина

С помощью электронной сигареты вы можете дозировать содержание никотина или вовсе перейти на безникотиновые жидкости.

По результатам исследования итальянских ученых г. Катания после перехода на использование электронной сигареты вайпер в редких случаях возвращается к курению табака. Исследование производилось следующим образом: 40 человек в течение полугода использовали только электронные сигареты. По завершении эксперимента четверть из них перестала покупать табачные изделия, остальные сократили их потребление минимум в 4 раза либо вовсе от них отказались.

Ваш результат наверняка вдохновит и ваших друзей. Тогда всего одна электронная сигарета принесет пользу и вам, и окружающим!

Закажите электронную сигарету прямо сейчас в нашем интернет-магазине!
Бесплатная консультация по подбору устройства и жидкости!

Перейти к выбору Бесплатная доставка от 30 BYN по всей Беларуси. Реальная гарантия от 3х месяцев (свой сервисный центр)!

Вреден ли пар от электронной сигареты?

Достаточно узнать о составе жидкости, которую используют для сигареты — никотин, глицерин, пропиленгликоль и различные армотизаторы. Самые безвредные и из всех названных компонентов — пропиленгликоль и глицерин. Первый в организме человека преобразуется в молочную кислоту. Этот компонент широко используется в косметике и разрешён во всех странах мира. Глицерин, кроме того, что его используют в косметике, можно найти и в пищевой продукции.

Тем не менее, преобразовываясь в пару, эти компоненты никак не могут оказать положительного результата, а как раз наоборот. Поэтому стоит говорить о вреде пара, как для парильщика, так и для окружающих.

Про никотин и говорить много не приходится. Его оправдать никак нельзя. Никотин — это чистое зло, а слово «безвредный» здесь точно неуместно. Он вызывает привыкание и пагубно влияет на организм.

Даже если вы используете «самозамес» для электронной сигареты, не думайте, что эта субстанция будет менее вредна. Наличие в жидкости никотина и других добавок — это не повод услышать «спасибо» от вашего организма. Поэтому лучше отказаться вовсе от сигаретных изделий. Помните: если курение вызывает зависимость, то электронные сигареты ее поддерживают!

Кроме того, случается и такое, что аккумулятор сигарет перегревается. Следовательно, жижа в девайсе нагревается свыше нормы и её вред на организм парильщика и окружающих значительно увеличивается. Более того, перегрев может быть причиной взрыва сигареты.

Любители девайсов должны помнить, что vape — это  вредно еще и для здоровья окружающих. Не смотря на то, что пар не содержит окиси углерода и канцерогенных веществ, которые содержатся в дыме обычной сигареты, существует вред пара от электронных сигарет с другими компонентами.

При выпаривании содержавшиеся в жидкости никотин, глицерин, пропиленгликоль, а также ароматизаторы полностью не поглощаются вайпером и большая часть компонентов растворяется в воздухе. Поэтому люди, которые находятся рядом с парильщиком, невольно становятся участниками всего процесса. Неудивительно, что такие никотиновые ингаляции вредны для окружающих, а особенно для детей и беременных.

Не забывайте, что если вместо дыма от электронной сигареты исходит пар без запаха или он совершенно невидим, это не явный признак того, что пар не отравляет воздух ядовитыми веществами. Поэтому у пассивного парильщика может возникнуть зависимость. Если же курить такие сигареты в помещениях, никотиновые пары обязательно осядут на стенах, окнах и на других поверхностях, а это уже не безопасно для окружающих.

Как мы уже говорили, в электронной сигарете не происходит горения, поэтому про дым говорить не приходится. Привычней и правильно будет говорить, что результат процесса курения этого девайса — пар. От этого пара можно получить удар по горлу в любой момент процесса употребления электронной сигареты. Получается он за счёт вдыхаемого горячего пара. Результат сильного удара — кашель.

В электронных сигаретах фактором, влияющим на количество выделяемого пара, является напряжение. Следовательно, чем выше напряжение, тем больше и горячее пар, а значит и удар.

Сильный удар по горлу может прийтись, если пар не задерживать во рту, а вдыхать сразу лёгкими. Это часто делают курильщики. Неудивительно, что результатами таких воздействий становятся различные заболевания.

Современные врачи и сотрудники ВОЗ активно изучают вред, оказываемый парами электронных сигарет на организм человека. Регулярные исследования проводятся во всём мире, и до сих пор единогласного ответа нет. Да и будет ли оно, когда прогнозы и результаты совсем не утешают?!

Что именно изучают учёные медики? Влияние пара на организм человека. Проблема усугубляется тем, что на современном рынке существует более 400 брэндов и более 7 тысяч уникальных ароматов, что делает проведение исследований и их учёт сложным процессом.

Один из ведущих исследователей в этой области, Мацей Гониевич, обнаружил, что в паре содержится значительно меньше, по сравнению с обычными сигаретами, канцерогенов и токсичных веществ. Хотя дал понять, что не смотря на то, что пропиленгликоль и глицерин принято считать безопасными, никто не возьмётся сказать об их безопасности, если вдыхать их ежедневно продолжительный промежуток времени.

Профессор и доктор медицинских наук Г.М. Сахарова напоминает, что электронные сигареты содержат никотин, а никотин имеет свойство не просто влиять на здоровье и вызывать рак, но и повреждает ДНК, а это уже намёк на патологию у будущего потомства. Кроме того, содержащиеся вещества в сигарете, синтезируют при нагревании формальдегид и другие карбониды. Другими словами — в канцерогены. Поэтому говорить о безопасности электронных сигарет не приходится.

Помните, что медицинский никотин — это тот же никотин, но который применяют в медицинских целях. Он также опасен для здоровья, как и известный нам никотин. Поэтому не обманывайте себя покупкой, а точнее его названием.

Запрет на курение распространят на вейпы, кальяны и электронные сигареты — Российская газета

Ограничительные меры в отношении сигарет будут распространены на все иные способы потребления никотина: электронные сигареты, вейпы, кальяны. Это зафиксировано в новой антитабачной концепции, утвержденной правительством в прошлую пятницу. Документ определит политику в отношении потребления сигарет и других никотиносодержащих продуктов до 2035 года.

То, что электронные средства приравняют к табаку, в минздраве считают ключевым моментом документа — дискуссии по его поводу шли нешуточные. Кроме того, в концепции выделено еще несколько важных направлений: начинать бороться с возможным возникновением пристрастия людей к табаку нужно по принципу «чем раньше, тем лучше» — то есть еще в школе. А в отношении взрослых предлагается активнее подключать работодателей.

Как отметила министр здравоохранения Вероника Скворцова, комментируя утверждение антитабачной концепции, в стране многое сделано и потребление табака реально сократилось, но «в целом пока еще в России курят много».

«К 2035 году предстоит выйти на показатель не более 21 процента курильщиков в структуре численности взрослого населения. В 2006 году, напомню, это было почти 40 процентов, сейчас 29 процентов», — пояснила Скворцова.

«Важно, что документ распространяет меры противодействия на новые виды табачных изделий и всю остальную никотинсодержащую продукцию, которая беспрепятственно распространяется у нас на рынке, — сообщил «РГ» исполнительный директор Совета по общественному здоровью и демографии Виктор Зыков. — Это касается нагреваемого табака — курительного изделия, которое за счет агрессивного маркетинга приобретает популярность, в том числе среди молодежи. Это касается и электронных средств доставки никотина, с которыми ситуация вообще катастрофическая: в отношении их надо срочно вводить жесткое регулирование. В США более двух тысяч человек попали в больницу, 47 человек погибли по причине использования электронных сигарет».

Действие на организм этого относительно нового для рынка продукта пока плохо изучено, хотя исследований проводится много. Но в основном заказывают их компании, производящие эти продукты.

Действие электронных сигарет и вейпов на человеческий организм изучено пока довольно плохо

«Установлено, что один из ингредиентов курительной смеси, используемой в электронных сигаретах, полностью не испаряется и попадает в легкие в виде жидкости, — поясняет Зыков. — Это приводит к их серьезному повреждению, в один момент люди просто начинают задыхаться. Этот ингредиент — витамин E в масляной форме — может содержаться не только в смесях с марихуаной, но и в никотинсодержащих жидкостях. Он зарегистрирован как пищевая добавка и его можно принимать внутрь вместе с едой, однако вдыхать категорически нельзя».

Тем не менее вейпы их производители позиционируют как одно из средств, которое помогает освободиться от никотиновой зависимости для курильщиков, которые хотят, но не могут бросить курить. По мнению эксперта, производители лукавят, они вводят потребителей в заблуждение, делая такие заявления.

Viper | OMRON, Россия

Robot Integrated Controller 16 motion axis, up to 8 robots control NJ501-R300
32 motion axis, up to 8 robots control NJ501-R400
64 motion axis, up to 8 robots control NJ501-R500
Robot Controller SmartController EX 19200-000
SmartController EX + Front Panel 19300-000
Pendant T20 Pendant with 10 m Cable 10046-010
T20 Pendant-Jumper Plug 10048-000
T20 Pendant Wall Bracket 10079-000
T20 Adapter Cable, 3 m 10051-003
Vision Controller IPC Application Controller AC1-152000
Camera GigE PoE, 1602 x 1202 pixels, 60 fps, Monochrome, CMOS (1/1.8-inch equivalent), camera cables included (10 m) 24114-250
GigE PoE, 1602 x 1202 pixels, 60 fps, Color, CMOS (1/1.8-inch equivalent), camera cables included (10 m) 24114-251
GigE PoE, 2048 x 2048 pixels, 25 fps, Monochrome, CMOS (1-inch equivalent), camera cables included (10 m) 24114-300
GigE PoE, 2048 x 2048 pixels, 25 fps, Color, CMOS (1-inch equivalent), camera cables included (10 m) 24114-301
Belt Encoder
(Conveyor-Tracking)
Encoder Kit IP65 09742-001
Y-Adapter Cable, 3 m 09443-000
Encoder Extension Cable, 5 m 09446-050
SCEX-BELT,Y-Adapter Cable, 0.5 m 09550-000
XBELTIO Cable, 0.6 m 13463-000
Additional I/O Options IO Blox (connect to robot), 8 inputs/8 outputs, cables included (0.3 m) 90356-30200
IO Block (connect to previous IO Blox), 8 inputs/8 outputs, cables included (0.3 m) 90356-30100
IO Blox-to-robot Cable, 3 m 04677-030
IO Blox-to-IO Blox Cable, 3 m 04679-030
IO Blox-to-IO Blox Cable, 0.3 m 04679-003
XIO Termination Block, 12 inputs/8 outputs, cables included (1.8 m) 90356-40100
XDIO Termination Block, 50 pin, cables included (2 m) 09747-000
Front Panel Front Panel with 3 m cable 90356-10358
Front Panel Cable, 3 m 10356-10500
Power Supply/Cable AC Power Cable, 5 m 04118-000
24 VDC Power Cable, 5 m 04120-000
24 VDC, 6.5 A, 150 W (Front Mounting), Power Supply S8FS-G15024C
24 VDC, 6.5 A, 150 W (DIN-Rail Mounting), Power Supply S8FS-G15024CD
1394 Cable, 4.5 m 13632-045
eAIB XSYSTEM Cable Assembly, 1.8 m 13323-000
DB9 Splitter, 0.3 m 00411-000
eAIB XSYS Cable, 4.5 m 11585-000
Ethernet Cable XS6W-6LSZH8SS⬜⬜⬜CM-Y
Industrial Switching Hubs W4S1-05C
Solenoid Valve Kit eCobra robots (600, 800, 800 Inverted) 02853-000
Cable Seal Kit Hornet 565 IP65/67, Quattro 650HS IP65/67, Quattro 800HS IP65/67 08765-000
Quattro 650HS Standard, Quattro 800HS Standard 09564-000
eCobra 800 IP65/67 04813-000
eCobra 800 Inverted IP65 09073-000
ACE License Automation Control Environment (for ACE 4.x) Please download it from following URL:
http://www.adept.com/Robots-Tool
ACE PackXpert (for ACE 4.x) 20409-000
ACE Sight Vision Software (for ACE 4.x) 20410-000
ACE PackXpert with ACE Sight Vision (for ACE 4.x)
This license contains an ACE PackXpert license and an ACE Sight license.
20433-000
Related Products Machine Automation Controller NX/NY/NJ Series NX/NY/NJ
Automation Software Sysmac Studio SYSMAC-SE2⬜⬜⬜
Collection of software functional componentsSysmac LibraryAdept Robot Control Library SYSMAC-XR009
Sysmac Studio 3D Simulation option SYSMAC-SA4⬜⬜L-64

Tridonic — TE VIPER, with cable

Рекомендованное решение

Выбранные параметры системы

Количество модулей:

Luminous flux: lm

Режим работы: mA

Параметры модуля

Номер товара:

Цветовая температура:

Luminous flux: lm


Параметры устройства управления

Номер товара:

Тип монтажа:

Диапазон значений тока: mA

Bыходная мощность: W

каналы:


Важное указание: Не гарантируем правильность указанных данных. Возможны изменения. Пожалуйста, обратитесь в компанию «Tridonic» за дополнительной информацией. При параллельном подключении может возникнуть обусловленная допусками разница в мощности (термическая нагрузка на модуль) и, как следствие, разница в яркости. При выходе из строя одного модуля возможна перегрузка остальных модулей

Распечатать страницу Отправить страницу по электронной почте Вернуться к выбору устройства управления

Продукты Viper — Продукты GLD

Показаны результаты 1-48 из 1174

Сортировать по Рекомендуемым Сортировать по лучшим продажам Сортировать по алфавиту, от A до Z Сортировать по алфавиту, Z-A Сортировать по цене, от низкой к высокой Сортировать по цене, от высокой к низкой Сортировать по дате, от новых к старым Сортировать по дате, от старых к новым Все 0,75 дюйма1 грамм1,25 дюйма1,5 дюйма1,75 дюйма1 / 4 дюйма 100 микрон100% натуральная кожа13 граммов13 мм15,5 дюйма150 микрон1616 граммов16 унций16-18 унций17 граммов17.75 дюймов18 граммов18 унций18-21 унций180 микронов19 или 20 унций19 унций1×12 граммов2 дюймов20 граммов20 унций2020продажа21 грамм21 унция22 грамма23 грамма24 грамма25 граммов26 граммов28 граммов2ba3 дартс3 грамма36 дюймов 44,5 грамма бильярдный комплектЛучшие продажи комплект дартсЛучшие продажи комплект дартсБильярдные аксессуарыБильярдный кийБильярдный кийБильярдЧерныйЧерный рисунокСинийОбаБандлЧекеры Значение ClearCloseoutDart accessoriesDart casesDart flightsDart shaftsDart tipsDartboard accessoriesDartboard bundleDartboard cabinetsDartsDarts bundleDimplexFalseFantailFlightFlight packFlightsFoosball аксессуарыДль herFor himFor kidsGame tableGift ideasGoldGraphicGrayGreenIrish linenKiteLeatheretteMiniMoldedNewNickel silverNon-adjustableNon-scufferNoneNoveltyNylonOne pieceOne sizeOrangeOtherPartsPentathlonPinkPnkPurpleRedRiptexScufferShieldSilicone придает Dura-фитиль clothSilverSlimSoft наконечник Мишень bundleSoft кончик dartboardSoft кончик dartsSoft кончик дартс bundleSpiral rubberflexStandardSteel наконечник Мишень bundleSteel-наконечник Дартс Дартс со стальным наконечником Комплект дротиков со стальным наконечникомАксессуары для настольного тенниса Настольный теннисный столTealTeardropTrueTungstenДва штукиV-100V-150V-75V-luxДень святого ВалентинаVeltexVortexWhiteWishYellow

Вид сетки Посмотреть список

Viper Neptune Electronic Dartboard and Cabinet Hybrid, 15.Регулирование 5 «- GLD Products

Если вы ищете полноценную доску для дартса с мягким наконечником, то обратите внимание на электронную доску для дартса Viper Neptune. Эта 15.5-дюймовая регулируемая электронная доска для дартса встраивается прямо в шкаф, так что вы сразу получаете полную настройку. В Viper Neptune 57 игр, в том числе 01 и Cricket, а также более 300 вариантов подсчета очков, так что вы можете играть, как хотите. Эта электронная доска для дартса также поддерживает многопользовательскую игру до 16 игроков, так что каждый может присоединиться к веселью! ЖК-дисплей с подсветкой на этой доске для дартса расширен, поэтому вы можете играть в специальные игры, такие как «Миннесота» и «Испанский крикет». ВНИМАНИЕ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!Эта доска для дротиков с мягким наконечником включает в себя шесть стартовых дротиков с мягким наконечником и питается от прилагаемого адаптера переменного тока.

  • Сегменты высшего качества — Целевая зона для электронной доски для дартса с диагональю 15,5 дюйма невероятно прочная и рассчитана на то, чтобы справиться с любым ударом.
  • Встроенный шкаф и место для хранения — Дартс с мягким наконечником встраивается непосредственно в шкаф; гладкие дверцы шкафа со встроенным ящиком для хранения сохраняют порядок и хорошо выглядят
  • 57 игр для 16 игроков — включает популярные игры, такие как 01, крикет и другие; с более чем 300 вариантами подсчета очков и многопользовательской игрой до 16 игроков
  • Расширенный дисплей — Большой дисплей позволяет легко играть в специальные игры, такие как «Миннесота» и «Испанский крикет»
  • Принадлежности в комплекте — Поставляется с шестью дротиками с мягким наконечником, леской, измерительной лентой и адаптером переменного тока
  • Гарантия — Ограниченная 1 год

Подробнее о продукте

Длина: 27.0 в
Ширина: 21,35 дюйм
Высота: 3,4 дюйма
Вес: 20,3 фунта
Диаметр мишени: 15,5 дюймов

Загрузить руководство по продукту

Внимание! Опасность удушья: этот продукт включает в себя небольшие предметы, не подходящие для детей младше 3 лет.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: Этот продукт может подвергнуть вас воздействию таких химических веществ, как свинец, который, как известно в штате Калифорния, вызывает рак, врожденные дефекты и / или другие нарушения репродуктивной системы.Для получения дополнительной информации перейдите по адресу P65Warnings.ca.gov

Есть вопросы по этому предупреждению? Посетите нашу информационную страницу Prop 65.


Viper VTooth 1000 Электронная доска для дартс Bluetooth

С электронной доской Vtooth 1000 вы больше никогда не будете так же играть в дартс! Впервые с помощью технологии Bluetooth Smart вы можете подключить доску для дартса по беспроводной сети к смартфону, планшету или другому устройству через приложение Viper Darts Linkup. Это революционное бесплатное новое приложение позволит вам отслеживать все свои результаты с помощью настраиваемого профиля, который сохранит ваш прогресс и измерит вашу статистику дартс.Никогда раньше вам не удавалось так ясно видеть крикет и ’01 на одном табло. Бесплатное приложение Viper Dart Linkup запускается с 16 доступными играми, и многие другие игры появятся в будущем. Приложение табло может использовать функцию быстрой игры, чтобы вы сразу же начали играть в свои любимые игры. Целевая поверхность Vtooth составляет 15.5 дюймов, поэтому вы можете тренироваться на доске того же размера, что и профессионалы. В стильной цветовой гамме используются четкие красный и синий на глубоком черном и ярко-белом, чтобы выделить вашу доску среди конкурентов.Vtooth имеет сегменты Target Tested Tough, которые выдержат самые суровые наказания, а также ультратонкий паук для минимизации отскоков. Кроме того, Vtooth имеет вогнутые сегментные отверстия, которые фиксируют ваши выстрелы. Многопользовательская игра поддерживает до 4 игроков, поэтому никто не останется позади. Примите новую технологическую революцию в дартс с Viper Vtooth!

  • Новейшие технологии впервые включают в себя табло для мобильных приложений.
  • Подключайтесь к своему телефону, планшету или другому устройству напрямую к Vtooth через технологию Bluetooth.
  • Доступно 16+ игр, и другие будут в ближайшее время.
  • Настройте свой профиль игрока, чтобы отслеживать свою статистику и измерять свой прогресс.
  • Следите за своими счетами, как никогда раньше, с помощью специальных табло для ’01 и крикета.
  • Регламент качества турниров Целевая поверхность 15.5 ”.
  • Отверстия для вогнутых сегментов уменьшают отскок.
  • Target Tested. Прочные сегменты раз за разом выдерживают самые сложные броски.
  • Многопользовательская игра до 4 игроков.
  • Встроенное хранилище позволяет вам отслеживать свои дротики и дополнительные подсказки.
  • Работает от четырех батареек АА, что дает возможность работать без проводов.
  • Включает монтажное оборудование для быстрой настройки.
  • Включает 6 дротиков с мягким наконечником и годовую гарантию.

Viper Shield ™ AN / ALQ-254 (V) 1 Полностью цифровой комплект средств электронной войны

Система РЭБ нового поколения

В партнерстве с Lockheed Martin и U.S. Air Force, L3Harris разрабатывает новый AN / ALQ-254 (V) 1 Viper Shield, чтобы предоставить союзникам США передовые средства противодействия сложным, постоянно меняющимся угрозам. Эта передовая система РЭБ обеспечит виртуальный электронный щит вокруг самолета, позволяя истребителям безопасно выполнять миссии во все более сложных сценариях боевого пространства. Его современная полностью цифровая архитектура с использованием готовой коммерческой технологии (COTS) обеспечивает повышенную производительность системы, меньший форм-фактор, меньший вес и упрощение будущих обновлений.

Продуманный и интегрированный

Программно-определяемые технологические компоненты

Viper Shield обеспечивают беспрецедентное цифровое радиолокационное предупреждение об угрозах и надежные возможности цифрового противодействия в полностью интегрированной внутренней системе. Его передовая технология цифрового радиолокационного приемника предупреждения (DRWR) легко интегрируется с новым бортовым радаром APG-83 с активной электронно-сканируемой антенной решеткой (AESA) для обеспечения большей ситуационной осведомленности. Система подавления на основе цифровой радиочастотной памяти (DRFM) обеспечивает расширенные возможности противодействия продвинутым угрозам.

Конструкция открытой системы позволяет легко добавлять проверенные в боевых действиях приложения РЭБ, обеспечивая современные возможности для борьбы с возникающими и будущими угрозами. Повышенная производительность системы обеспечивает повышенную вероятность перехвата от гибких угроз. Новый интерфейс пилота и транспортного средства обеспечивает пилоту полную ситуационную осведомленность и упрощает взаимодействие с системой. Новая сложная технология предотвращает любые помехи РЭБ ведомому и от ведомого.

Снижение затрат в течение жизненного цикла, простота обновления

Viper Shield разработан с меньшим количеством критических компонентов, чем системы РЭБ предыдущего поколения.Это приводит не только к меньшему форм-фактору и уменьшенному весу, но также к увеличению среднего времени наработки на отказ и снижению затрат на жизненный цикл. Модульная конструкция поддерживает заменяемые блоки линии (LRU) в полевых условиях. Дизайн также ориентирован на будущее, поскольку предусматривает возможность будущего роста и усовершенствований. Его технология COTS 3U и программно-определяемая архитектура упростят будущие обновления, позволяя истребителю по доступной цене модернизироваться с использованием новых возможностей и технологий, сводя к минимуму устаревание.

L3 Наследие Harris EW

L3Harris поставляет системы РЭБ на F-16 более 30 лет, а наши существующие системы защищают флот многих стран по всему миру. Несколько международных военно-воздушных сил уже взяли на себя обязательства по использованию Viper Shield на основании его эксплуатационных возможностей, передовых технологий и доступности. Это продолжает наше более чем 60-летнее наследие разработки передовых технологий РЭБ для обеспечения превосходства во всем спектре. Наши решения РЭБ развернуты во всех сферах — на суше, на море, в воздухе и в космосе — для устранения угроз на всех уровнях взаимодействия.

Viper 850 Электронная доска для дартса с 450 вариантами подсчета очков — Магазин игровой комнаты

Время выполнения

Мы работаем и стремимся предоставить вам индивидуальную поддержку клиентов в режиме реального времени, которую вы заслуживаете во время пандемии Covid-19. Мы неустанно работаем с нашими поставщиками, чтобы предоставить вам продукты, которые сделают вас и ваш дом максимально комфортными и безопасными.Мы хотели, чтобы вы знали несколько вещей.

  • Все размещенные заказы будут обработаны нашими поставщиками в тот же день. Доставка осуществляется максимально быстро.
    • Продукция поставляется напрямую от производителя и может потребоваться более длительное время выполнения из-за продолжающихся задержек в цепочке поставок и ограниченного персонала.
    • К числу наиболее пострадавших поставщиков / продуктов относятся:
      • Brunswick (отдельные позиции)
      • RAM Игровая комната
      • Imperial (выберите аксессуары)
      • Долина-Динамо (отдельные позиции)
    • Сроки выполнения оценки .Хотя мы изо всех сил стараемся предоставлять обновления, их качество зависит от информации, полученной от наших поставщиков. Приносим извинения за любые неточности во время пандемии, поскольку оценки могут измениться из-за факторов, не зависящих от нас.
    • Если есть какие-либо сомнения относительно времени выполнения заказа, пожалуйста, свяжитесь с нами перед покупкой, и мы подтвердим текущую оценку.
  • Мы по-прежнему обещаем предлагать 5-звездочный сервис, которым мы известны.
  • Если вы позвоните нам или пообщаетесь, вы поговорите с живым человеком.
  • Если вы звоните в нерабочее время или в периоды большого количества звонков, мы просим вас оставить сообщение, и вам перезвонят как можно скорее.
Нашим главным приоритетом является и всегда будет наша команда, сообщества, которые мы обслуживаем, и, конечно же, YOU .

Доставка

Заказы обрабатываются в день их получения. Заказы на складе обычно доставляются в течение 1-7 рабочих дней. Доставка товаров, сделанных на заказ, и индивидуальных заказов может занять от 2 до 4 недель, в зависимости от производителя.Сроки выполнения заказа и доставки зависят от производителя. Указанные сроки доставки являются приблизительными и не гарантируются.

Большинство крупных предметов и столов в игровых комнатах, включая, помимо прочего, бильярд, шаффлборды, настольный теннис, настольный футбол, хоккей с пузырями и столы для покера — фрахт судов. Вам нужно будет явиться по адресу доставки, когда приедет водитель, чтобы принять посылку и осмотреть ее на предмет повреждений.

Выберите способ доставки

Делая заказ в магазине Game Room и выбирая любой из приведенных ниже способов доставки, вы подтверждаете, что продукт может пройти через ваши дверные проемы. Если продукт прибывает и слишком велик для того, чтобы его можно было доставить в выбранную вами комнату, вы несете ответственность за любые расходы, связанные с его разборкой / сборкой или возвратом. . Для большинства проданных товаров доступны следующие варианты доставки. (Исключения см. В разделе «Варианты доставки для конкретных брендов» ниже).

Бесплатная доставка по обочине: $ 0 (в течение ограниченного времени)

В настоящее время мы предлагаем бесплатную доставку по тротуару для большинства грузовых заказов. Как это звучит, развозчик подъедет к тротуару снаружи.Вы сами должны вынуть предмет из грузовика. От водителя не требуется, чтобы он сам помогал снимать предмет. Он может выбрать (или нет) по своему усмотрению. Мы настоятельно рекомендуем сервисный центр Liftgate и иметь вторую пару рабочих, которые помогут вам. . Вы можете выбрать этот вариант при оформлении заказа.

Примечание. Если вы не можете вытащить товар из грузовика, за ваш счет может взиматься плата за хранение и / или плата за обратную доставку.

Поставка подъемной двери тротуара: $ 89

Вы можете заказать услугу подъемной двери во время покупки или после , нажав здесь .Водитель снимет за вас предмет с грузовика и поместит его на бордюр. После этого вы должны переместить предмет внутрь. Мы рекомендуем иметь тележку и друга в помощь.

Входная дверь / Гараж Доставка: $ 174

Водитель снимет предмет с грузовика и поместит его у вашей входной двери или в вашем гараже. После этого вы должны переместить предмет внутрь.

Доставка белых перчаток: 500 $ +

С помощью этой услуги водитель снимет предмет с грузовика и принесет его в определенную комнату по вашему выбору.Если адрес доставки труднодоступен, если существует более одного лестничного пролета или если возникает другое препятствие, может взиматься дополнительная плата.

Примечание. Доставка белых перчаток может включать / не включать настройку. Это зависит от приобретенного товара. Пожалуйста, свяжитесь с нами для цитаты.

График поставки Дата

Как только вы разместите заказ, мы отправим вам электронное письмо с подтверждением заказа. Вы обязаны просмотреть это электронное письмо и убедиться, что все правильно.Особенно проверьте товар, выставление счетов, доставку, доставку и контактную информацию.

Вы также получите напоминание о необходимости добавить услугу подъемной двери к вашему заказу. Если вы уже выбрали услугу подъемной двери или если приобретенный вами товар не доставляется грузовым транспортом, вы можете проигнорировать это предложение. Если вы хотите добавить услугу подъемной двери в то время — мы настоятельно рекомендуем вам это сделать — немедленно сообщите нам об этом.

Как только ваш заказ покинет склад, вы получите электронное письмо со всей необходимой информацией для отслеживания.

После этого грузовой перевозчик свяжется с вами по номеру телефона, который вы указали при покупке, чтобы назначить желаемую дату доставки и временное окно.

Может взиматься дополнительная плата, если место доставки определено как недоступное или труднодоступное для большого грузового автомобиля. Мы рекомендуем вам обсудить любые предполагаемые препятствия с транспортной компанией до доставки.

Если возникнет проблема, мы сделаем все возможное, чтобы помочь вам ее решить . Но обратите внимание, что любые задержки или сбои в процессе доставки выходят за рамки компетенции Game Room Shop .

Проверить перед приемкой

Не расписывайтесь о доставке, пока не проведете тщательный визуальный осмотр упаковки. Если на коробке есть дыры или разрывы, сделайте снимок и отметьте это на счете, когда подпишете.

Водитель ДОЛЖЕН отметить любые повреждения в «коносаменте», прежде чем вы подпишетесь на них . В противном случае нет доказательств того, что повреждение произошло во время транспортировки, и транспортная компания освобождается от всякой ответственности.

Если вы заметили повреждение предмета после открытия коробки, свяжитесь с нами по телефону 240-244-6642.

Доставка

Чрезвычайно важно, чтобы кто-то присутствовал для проверки заказа на предмет повреждений или недостающих частей ПЕРЕД ПОДТВЕРЖДЕНИЕМ ДОСТАВКИ ВОДИТЕЛЕМ. По прибытии убедитесь, что посылка находится в хорошем состоянии и что количество коробок в накладной соответствует количеству коробок, полученных вами.Если вы заметили какие-либо повреждения или подозреваете, что товар в коробке для доставки может быть поврежден, отметьте это в квитанции о доставке. В противном случае страхование не может быть оформлено, а возмещение / замена не могут быть произведены.

Если вы подпишете квитанцию ​​о доставке и позже заметите повреждение посылки или самого предмета, у вас больше не будет права на замену или возмещение. В маловероятном случае повреждения во время доставки выполните следующие действия, чтобы защитить себя:

Если ваш заказ будет доставлен поврежденным или неполным, следуйте этим точным инструкциям:

1) ОТКАЗ ОТ ДОСТАВКИ.
2) Отметьте любые повреждения (разрывы, дыры, раздавленный картон) упаковки в накладной.
3) Отметьте все недостающие элементы.
4) Сделайте снимки коробки со всех сторон в качестве доказательства повреждения.
5) Отправьте фотографии по адресу [email protected] , чтобы мы могли обработать страховое возмещение / замену.

Если в доставке отказано по какой-либо причине, кроме повреждения, вы несете ответственность за все действительные транспортные расходы (до и от адреса доставки) и 25% комиссионных за возврат товара.

Если коробка / упаковка выглядит нормально, но вы чувствуете, что предмет внутри может быть поврежден, следуйте этим точным инструкциям:

1) Отметьте «возможные скрытые повреждения» в накладной.
2) ПРИНЯТЬ ДОСТАВКУ.
3) Осмотрите свой товар при распаковке.
4) Если она действительно повреждена, сфотографируйте коробку (со всех сторон) и сам предмет. (Страхование / производители требуют фотографии как коробки, так и продукта .)
Не выбрасывайте поврежденный предмет, пока производитель или магазин игровой комнаты не предоставят дальнейшие инструкции.
5) КОРОБКУ НЕ ВЫБРАСЫВАТЬ . (Оригинальная коробка и упаковка должны быть возвращены для обработки возмещения или заказа на замену. Никаких исключений не будет.)
6) Сообщите о повреждении по адресу [email protected] в течение пяти календарных дней с момента доставки.

Возврат

Ваше удовлетворение — наш главный приоритет. Мы продаем только продукцию самого высокого качества от известных производителей, поэтому у нас редко возникают проблемы. Но если ваш товар каким-либо образом поврежден или неисправен, мы позаботимся о вас.

На большинство наших продуктов распространяется гарантия производителя. Если в вашем изделии обнаружен дефект, обратитесь к производителю, как указано в документации, прилагаемой к продукту. Если вам нужна помощь в обращении к производителю, обращайтесь к нам.

Если ваш продукт был поврежден во время транспортировки, свяжитесь с нами, и мы поможем вам получить необходимые запасные части или организуем полную замену продукта бесплатно для вас. В зависимости от производителя приобретенного вами предмета в игровой комнате возврат может быть невозможен.

Мы хотим, чтобы вы остались полностью довольны своим заказом. Таким образом, мы рады бесплатно отменить или изменить любой заказ до его отправки или запуска в производство. Пожалуйста, ознакомьтесь с нашей политикой для всех сценариев отмены и возврата.

Мы рекомендуем вам ознакомиться с ПОЛИТИКОЙ МАГАЗИНА перед отправкой вашего заказа.

Если у вас есть какие-либо вопросы о доставке, доставке или о чем-либо, связанном с вашим заказом, пожалуйста, не стесняйтесь связаться с нами !

Мы постоянно сравниваем цены на наши коллекции игровых комнат с ценами наших конкурентов, чтобы гарантировать самые низкие цены в Интернете.Если вы обнаружите более низкую цену на идентичный товар в течение 90 дней с момента покупки у нас, мы вернем вам 110% разницы в цене! Применяются правила и условия.

Чтобы получить возмещение, равное цене, отправьте нам следующую информацию:

  • Ваше полное имя

  • Ваш номер заказа

  • Ваш электронный адрес

  • Ваш номер телефона

  • Марка и модель приобретенного вами продукта

  • Скриншот / фотография цены конкурента (включая доставку, обработку, налоги и другие применимые сборы)

  • Адрес веб-сайта (URL) продукта конкурента

УСЛОВИЯ ГАРАНТИИ САМОЙ НИЗКОЙ ЦЕНЫ

У вас есть до 90 дней после покупки, чтобы отправить запрос на сопоставление цен.

Мы сопоставим цены только с идентичными моделями у авторизованных дилеров электронной коммерции в США, которые соблюдают политику минимальных рекламируемых цен (MAP) дилеров. После получения вашего запроса о сопоставлении цен мы можем проверить наличие продукта и цену конкурента, прежде чем выдать вам сопоставление или возмещение.

В частности, продукт конкурента должен иметь те же гарантии производителя в США и номер модели и содержать те же компоненты, что и продукт в магазине Game Room Shop. Товар конкурента должен быть как совершенно новым, так и в наличии.Продукт должен быть от производителя, в котором действует политика MAP.

Мы не будем сравнивать цены с обычных магазинов, аукционов или сайтов ликвидации (таких как eBay / Overstock / Wayfair), частных продавцов или веб-сайтов только для участников (включая, помимо прочего: Costco, Sam’s Club, BJs, так далее).

Мы не будем сопоставлять временные ошибки ценообразования, распродажи, распродажи, рекламные акции или купоны.

Гарантия самой низкой цены распространяется на общую стоимость покупки и доставки товара, включая доставку, обработку, транспортировку, налоги и другие применимые сборы.

Наша гарантия самой низкой цены не распространяется на товары, проданные менее чем за 250 долларов.

Мы оставляем за собой право отклонить ваш запрос о сопоставлении цен, если это означает, что мы понесем убытки при продаже. Мы не будем предлагать цену ниже нашей оптовой стоимости продукта.

Исключенные бренды: BlueWave, Imperial, RAM Game Room, RS Barcelona

Почувствуйте себя комфортно, зная, что вы платите лучшую цену за все покупки в Game Room Shop.

Нам доверяют такие же компании, организации, университеты и семьи, как ваша.

1. БОЛЬШАЯ КОЛЛЕКЦИЯ!
Наша коллекция настольных игр и другой мебели для домашних игровых комнат не имеет себе равных как по размеру, так и по качеству. Вы можете провести бесчисленное количество выходных, разъезжая по различным розничным магазинам, чтобы собрать полный набор игровой комнаты. Или вы можете сэкономить время и деньги, просматривая все, что вам нужно, в одном удобном месте.

Магазин игровых комнат — лучшее место в Интернете, где можно найти целые коллекции игровых комнат в одном месте по самым низким ценам.Наш постоянно обновляемый каталог включает ведущих брендов в широком ассортименте () размеров и цветов. Мы даже предлагаем декор стен, барные стойки и другие вспомогательные товары, чтобы создать идеальное место для отдыха в вашем доме. Независимо от того, какой бренд или стиль вы ищете, у нас есть то, что обеспечит вам долгие годы семейного отдыха и идеально подойдет вашему стилю!

2. ГАРАНТИЯ САМОЙ НИЗКОЙ ЦЕНЫ

Мы постоянно сравниваем цены наших коллекций игровых комнат с ценами наших конкурентов, чтобы гарантировать, что мы предлагаем самые низкие цены в любом месте в Интернете .Если вы обнаружите более низкую цену на идентичный товар в течение 90 дней с момента покупки у нас, мы вернем вам 110% разницы в цене! Применяются правила и условия.

3. ОТСУТСТВИЕ НАЛОГА НА ПРОДАЖУ

С вас не будет взиматься налог с продаж за любой заказ, отправленный за пределы штата Мэриленд. Это связано с постановлением правительства, согласно которому интернет-магазины несут ответственность за уплату налога с продаж только на заказы в пределах своего штата. Мы находимся в Мэриленде.Поэтому, если вы отправляете товар в любой из 48 штатов, расположенных ниже, или в Вашингтон, округ Колумбия, мы обязуемся передавать вам эти сбережения до тех пор, пока действует законодательство. (Любые заказы, отправленные в Мэриленд, будут облагаться стандартным налогом с продаж в размере 6%.)

4. БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА В ПОСТОЯННЫЕ СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ
Мы предлагаем БЕСПЛАТНУЮ доставку в пределах континентальной части США почти для каждого предмета в нашем инвентаре (за исключением отдельных таблиц Playcraft, в зависимости от региона). Цена, указанная на странице нашего продукта, — это цена, которую вы получаете.Наш стандартный срок доставки и доставки в прилегающие Соединенные Штаты составляет примерно одну неделю после получения нами вашего заказа. Любые исключения будут вызываться на странице продукта. Для некоторых товаров может быть предусмотрена возможность ускорения доставки и доставки за дополнительную плату.

5. ПЯТЬ ЗВЕЗД ОБСЛУЖИВАНИЯ КЛИЕНТОВ
Мы не просто продаем мебель и аксессуары для игровых комнат, мы живем ими. Мы выросли, играя в настольные игры, и знаем, как много они значат для семейных связей и развития.Наша высококвалифицированная команда фанатиков игр готова ответить на любые ваши вопросы о наших коллекциях или обсудить, какие варианты лучше всего подойдут для вашего дома. Позвоните нам по телефону (240) 244-6642, пообщайтесь в чате или отправьте нам электронное письмо по адресу [email protected] . Мы с нетерпением ждем возможности помочь создать идеальное индивидуальное место для отдыха для вашей семьи.


6. ВАША БЕЗОПАСНОСТЬ И БЕЗОПАСНОСТЬ — ПАРАМЕТРЫ
Мы знаем, что конфиденциальность и безопасность являются вашими первоочередными задачами при совершении покупок в Интернете.Они тоже наши. Таким образом, мы используем исключительно шифрование SSL в процессе оформления заказа, чтобы гарантировать конфиденциальность вашей личной и финансовой информации. Вы также можете оформить заказ по телефону (240) 244-6642. Мы принимаем PayPal и все основные кредитные карты, включая Visa, Mastercard, American Express и Discover.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ : Рак и вред репродуктивной системе — www.P65Warnings.ca.gov

Предупреждение о предложении 65 штата Калифорния
Закон Калифорнии о безопасности питьевой воды и токсичных веществах 1986 г. (Предложение 65) Разъяснение:

В 1986 году избиратели Калифорнии одобрили инициативу по устранению опасений по поводу воздействия токсичных химикатов. Эта инициатива стала Законом о безопасности питьевой воды и токсичных веществ от 1986 года, широко известным как Предложение 65.

Предложение 65 требует, чтобы штат Калифорния опубликовал список химических веществ, которые, как известно, вызывают рак, врожденные дефекты или другие нарушения репродуктивной функции.Этот список, который необходимо обновлять не реже одного раза в год, с момента его первой публикации в 1987 году расширился и теперь включает более 900 химических веществ.

Предложение 65 требует, чтобы компании предоставляли калифорнийцам четкое и разумное предупреждение о химических веществах в продуктах, которые они покупают, дома или на рабочем месте, или которые выбрасываются в окружающую среду. Предоставляя эту информацию, Предложение 65 позволяет калифорнийцам принимать информированные решения о защите себя от воздействия этих химикатов.Предложение 65 также запрещает калифорнийским предприятиям сознательно сбрасывать значительные количества перечисленных химикатов в источники питьевой воды.

Управление по оценке рисков для здоровья в окружающей среде (OEHHA) управляет программой Proposition 65. OEHHA, которое является частью Калифорнийского агентства по охране окружающей среды (Cal / EPA), также оценивает всю имеющуюся в настоящее время научную информацию о веществах, рассматриваемых для включения в список Proposition 65.

Что это значит для вас:
Хотя предложение было создано для защиты источников питьевой воды от химического загрязнения, сфера действия закона с годами расширилась.В настоящее время он включает более 900 химических веществ, а также относится (но не ограничивается) к воздействию через прикосновение, вдыхание, проглатывание или контакт с кожей.

Предупреждение Предложения 65 теперь можно найти на продуктах, которые могут содержать небольшое количество более 900 химических веществ или ингредиентов, которые OEHHA классифицирует как канцероген или репродуктивный токсикант. Это включает винил, покрытия, пластмассы и многое другое. Многие из элементов, перечисленных в Предложении 65, являются обычными добавками, которые можно найти в повседневных предметах.

Из-за огромного количества продуктов, которые могут содержать одно из химических веществ или ингредиентов из списка, мы должны включать предупреждения в соответствии с предложением 65 в наши сообщения с вами.Мы обязаны использовать точные формулировки, указанные в штате Калифорния. Хотя предупреждение звучит тревожно, цель состоит в том, чтобы уведомить вас о потенциальном риске, чтобы вы могли принять осознанное решение о покупке.

Часто задаваемые вопросы:

Почему маркируются все продукты, а не только те, которые продаются в Калифорнии?
Наша продукция распространяется по всей стране. Было бы очень сложно определить, какие продукты в конечном итоге будут куплены, проданы или привезены в Калифорнию.Поэтому, чтобы обеспечить соответствие требованиям Положения 65, мы включаем предупреждение во все наши продукты.

Почему не все дистрибьюторы предупреждают о своих товарах?
Game Room Shop соответствует всем федеральным нормам и правилам штата в отношении токсичных химикатов и тяжелых металлов. И хотя мы не можем контролировать то, что делают наши конкуренты, мы можем убедиться, что наши продукты соответствуют требованиям Предложения 65, чтобы наши клиенты могли принять осознанное решение о покупке.

Где я могу получить дополнительную информацию?
Для получения дополнительной информации о Предложении 65 Калифорнии посетите http://oehha.ca.gov/prop65/background/p65plain.html

VIPER — это генетически кодируемая пептидная метка для флуоресценции и электронной микроскопии.

Значимость

. Мы вступаем в новую эру клеточной картографии, в которой белки и мультибелковые комплексы будут картироваться с наноразмерной точностью с использованием передовых инструментов.Основным препятствием, мешающим прогрессу в этой области, является нехватка методов мечения белков для визуализации как с помощью флуоресцентной микроскопии, так и электронной микроскопии. В этом отчете мы описываем технологию отслеживания и картирования белков с помощью многомасштабной микроскопии. Для этого мы разработали инновационную технологию под названием VIPER. VIPER состоит из гетеродимерной спиральной спирали между генетически кодируемой пептидной меткой (CoilE) и пептидом, конъюгированным с репортером (CoilR). Ключевой вывод заключается в том, что VIPER предоставляет множество химических репортеров, что позволяет легко переключаться с флуоресцентной микроскопии на получение изображений с помощью электронной микроскопии с высоким разрешением без изменения генетически кодируемой метки.

Abstract

Многие открытия в клеточной биологии основаны на том, чтобы сделать определенные белки видимыми в их естественной клеточной среде. Существуют различные генетически закодированные метки, такие как флуоресцентные белки, разработанные для флуоресцентной микроскопии (FM). Однако почти нет генетически закодированных меток, которые позволяют наблюдать клеточные белки как с помощью FM, так и электронной микроскопии (EM). Здесь мы описываем технологию маркировки белков различными химическими репортерами, включая яркие органические флуорофоры для FM и электронно-плотные наночастицы для EM.В нашей технологии используются универсальные взаимодействующие пептидные (VIP) теги, класс генетически закодированных тегов. Мы представляем VIPER, который состоит из гетеродимера спиральной спирали, образованного между генетической меткой CoilE и меченным зондом пептидом CoilR. Используя конфокальную FM, мы демонстрируем, что VIPER можно использовать для выделения субклеточных структур или для изображения опосредованного рецепторами захвата железа. Кроме того, мы использовали VIPER для визуализации механизма поглощения железа с помощью корреляционного света и ЭМ (CLEM). VIPER выгодно отличается от иммунной метки для визуализации белков с помощью CLEM и является технологией, обеспечивающей доступ к белкам-мишеням, которые не могут быть иммуномечены.VIPER — это универсальная пептидная метка, которую можно использовать для маркировки и отслеживания белков с помощью различных химических репортеров, наблюдаемых с помощью приборов FM и EM.

Последние достижения в области оборудования для визуализации и компьютерного анализа открыли захватывающую возможность для исследования молекулярных основ заболеваний с необычайной детализацией. Например, в области флуоресцентной микроскопии (FM) развитие микроскопии сверхвысокого разрешения (SRM) (1–3) позволило сделать новые открытия в отношении структуры, организации и динамики органелл (4–6).Хотя SRM предлагает лучшее разрешение, чем обычный FM, он все же не обеспечивает получение ультраструктурных деталей и клеточного контекста, обеспечиваемых электронной микроскопией (EM). Таким образом, ЭМ более полезна для визуализации субклеточных структур в наномасштабе, включая нейронные связи и компоненты эндоцитарного аппарата. Корреляционный свет и ЭМ (CLEM) сочетает в себе лучшие черты FM и EM (7, 8), но существует несколько методов для маркировки и отслеживания клеточных белков в разных масштабах и платформах визуализации.Необходимо разработать новые белковые метки для многомасштабной микроскопии, чтобы полностью использовать потенциал этих технологий.

Как можно пометить клеточные белки, чтобы воспользоваться этими новыми технологиями? Иммуномечение — один из единственных методов, совместимых с FM, EM и CLEM. Антитела можно конъюгировать с различными химическими репортерами. Однако мечение белков антителами имеет ряд недостатков. Большой размер антител снижает точность локализации, а протоколы маркировки могут нарушить клеточную ультраструктуру (9).Редкие белки и редкие взаимодействия могут ускользнуть от обнаружения, когда иммуномечение неэффективно (9, 10). Многие антитела обладают низкой специфичностью и перекрестной реактивностью (11, 12), что может привести к ошибочным наблюдениям. Подводя итог, можно сказать, что проблемы с иммуномаркированием привели к повсеместному интересу к созданию более совершенных генетически кодируемых меток для визуализации клеточных белков.

Генетически закодированные метки широко доступны для FM, а некоторые из них совместимы с SRM (1). Однако большинство меток для FM имеют большие размеры (18–33 кДа), что может иметь негативные последствия для сворачивания, транспортировки и функции белков (13, 14).Обычно используемые метки включают слияния с флуоресцентными белками, ДНК-алкилтрансферазами (15, 16), дегалогеназой (17) или дигидрофолатредуктазой (18). Для сравнения, существует нехватка генетически закодированных тегов для EM. Были предприняты попытки разработать металлохелатирующие метки, но эти метки не получили широкого распространения из-за мультимеризации, размера, токсичности и плохой контрастности (19–23). Все другие метки EM, включая APEX и miniSOG (24⇓ – 26), используют окисление диаминобензидина (DAB) с образованием нерастворимого полимера, который окрашивается для создания контраста (27⇓ – 29).Осадки DAB трудно контролировать, что ограничивает точность определения местоположения. Основным недостатком тегов на основе DAB является их зависимость от одной и той же химической реакции для создания контраста.

В данном документе мы сообщаем о технологии, которая позволяет легко переключаться с FM на EM высокого разрешения без изменения генетически закодированной метки. В 2017 году мы опубликовали нашу первую метку универсального взаимодействующего пептида (VIP) под названием VIP Y / Z (30). Теперь мы представляем VIPER, отдельную пептидную метку, которая имеет высокую специфичность в миниатюрном размере.VIPER использует гетеродимерную спиральную спираль между двумя пептидами, генетически кодируемой пептидной меткой (CoilE) и пептидом, конъюгированным с репортером (CoilR), для маркировки клеточных белков несколькими различными химическими репортерами (рис. 1). Генетически кодируемый пептид CoilE является одной из самых маленьких доступных пептидных меток (5,2 кДа). Мы подтвердили специфичность и универсальность VIPER путем визуализации белков, меченных CoilE, с помощью как FM, так и EM.

Рис. 1.

VIPER — это передовая технология для многомасштабной микроскопии.( A ) Целевой белок генетически помечен пептидом CoilE. Затем меченый белок может быть помечен димеризацией пептидом CoilR, ковалентно связанным с различными химическими репортерами, включая BODIPY, Sulfo-Cyanine5 (Cy5) или биотин для обнаружения с помощью стрептавидин-Qdot. ( B ) Диаграмма винтового колеса VIPER, созданная с помощью DrawCoil 1.0. Приведены последовательности для тега CoilE и пептида-зонда CoilR.

Результаты и обсуждение

Дизайн VIPER, генетически закодированной метки.

Большинство генетически кодируемых меток полагаются на большие и сложные белковые структуры для обеспечения контраста. Разработка таких тегов требует больших затрат времени и усилий. Например, потребовалось 5 лет для преобразования SNAP в CLIP (15) и 20 лет для разработки удовлетворительного флуоресцентного белка в ближней инфракрасной области (31, 32). Напротив, в тегах VIP для маркировки белков используется α-спиральная спиральная спираль. Это простой структурный мотив, который можно разработать и оптимизировать. Специфичность и аффинность димеризации определяются пептидной последовательностью (33–38).Для VIP Y / Z (30) мы адаптировали гетеродимерную спиральную катушку, описанную Китингом и соавторами (35). Этот димер имел константу диссоциации ( K D ) <15 × 10 -9 M и температуру плавления ( T m ) 32 ° C (35). VIP Y / Z точно помечает белковые мишени в живых клетках с помощью различных химических репортеров, включая флуорофоры и квантовые точки (Qdots) (30).

Для данной работы мы разработали отдельный VIP-тег с более высоким сродством.Мы выбрали гетеродимерную пару, описанную Винсоном и соавторами (33): RR 12 EE 345 L и EE 12 RR 345 L. Димеризация между этими двумя пептидами осуществляется за счет гидрофобного интерфейса и оптимизированных межцепочечных солевых мостиков. , как показано на рис.1 B . В результате получается димер с удивительно высоким сродством ( K D 1,3 × 10 −11 M; T m 73 ° C) (33). Мы использовали эти пептиды для создания CoilE tag и зонда CoilR пептида, которые димеризуются с образованием VIPER.

Сборка генов на основе гомологии была использована для введения тега CoilE в белки-мишени. Пептиды зонда CoilR были получены путем рекомбинантной бактериальной экспрессии. Последовательность CoilR включала гексагистидиновую метку для очистки и цистеин для сайт-специфичного мечения с использованием химии тиол-малеимид. Эти функции позволили нам быстро создать набор пробных пептидов: CoilR-биотин, CoilR-Cy5 и CoilR-BODIPY.

Локализация белков с меткой VIPER в различных субклеточных структурах.

Нашей первоочередной задачей было установить, что VIPER позволяет селективно маркировать клеточные белки. Мы выбрали три отличительные субклеточные структуры для маркировки: цитоскелет (β-актин), ядро ​​(гистон 2B; h3B) и митохондриальный матрикс (с использованием фрагмента COX8, кодирующего последовательность локализации; «Mito»). Мы получили векторы экспрессии млекопитающих, которые кодировали каждый целевой белок, слитый с мономерным зеленым флуоресцентным белком mEmerald (39). Мы модифицировали каждый вектор, чтобы вставить последовательность CoilE внутригенно между целевым белком и mEmerald (рис.2 А ). Мы трансфицировали клетки остеосаркомы человека (U-2 OS) векторами, кодирующими меченые белки, которые мы назвали mEmerald-CoilE-Actin, Mito-CoilE-mEmerald и h3B-CoilE-mEmerald. Мы также трансфицировали клетки белками без тега CoilE (mEmerald-Actin, Mito-mEmerald, h3B-mEmerald). Клетки фиксировали, пермеабилизировали и блокировали перед обработкой CoilR-Cy5.

Рис. 2.

Селективное флуоресцентное мечение клеточного актина, митохондрий и ядра с использованием VIPER. ( A ) Представление белков, меченных CoilE, используемых для мечения цитоскелета (mEmerald-CoilE-Actin), митохондрий (Mito-CoilE-mEmerald) и ядра (h3B-CoilE-mEmerald).Трансфицированные клетки U-2 OS были помечены после фиксации обработкой CoilR-Cy5 (100 нМ), а затем визуализированы с помощью конфокальной FM для наблюдения за цитоскелетом ( B ), митохондриями ( C ) или ядром ( D ). . Мечение CoilR-Cy5 было специфичным для белков, меченных CoilE, и сигналы Cy5 (пурпурный) и mEmerald (зеленый) колокализировались. Перекрытие зеленого и пурпурного цветов выглядит белым на объединенных изображениях, а ядерное пятно (Hoechst 33342) имеет ложный синий цвет.

Мы использовали конфокальную FM для оценки мечения и специфичности VIPER в клетках (рис.2). Трансфицированные клетки идентифицировали с использованием флуоресценции mEmerald. Мы обнаружили, что CoilR-Cy5 выделяет субклеточные структуры только в клетках, экспрессирующих CoilE-tagged белки. Например, в клетках, экспрессирующих mEmerald-CoilE-Actin, флуоресценция CoilR-Cy5 (пурпурный) колокализована с флуоресценцией mEmerald (зеленый) (рис. 2 B ). Точно так же клетки, экспрессирующие Mito-CoilE-mEmerald или h3B-CoilE-mEmerald, обладали колокализованной флуоресценцией в митохондриях или ядре, соответственно (фиг. 2 C и D ).Сигнал CoilR-Cy5 в клетках, экспрессирующих немаркированные конструкции mEmerald, практически не обнаруживался. Эти результаты демонстрируют, что мечение VIPER было избирательным, и метка CoilE не изменяла и не нарушала локализацию целевого белка. Наши результаты показали, что мечение VIPER происходит с тегом CoilE, вставленным между двумя белками, что полезно для мечения белков, которые не переносят теги на N- или C-конце.

Мы использовали анализ конкурентного связывания для оценки эффективности мечения VIPER.Фиксированные клетки предварительно обрабатывали возрастающими концентрациями немеченого пептида CoilR (0, 100, 1000, 10000 и 100000 нМ) для блокирования последующего мечения Cy5 белков, меченных CoilE. Затем клетки обрабатывали 100 нМ CoilR-Cy5 для метки оставшихся несвязанных белков, меченных CoilE. Предварительной обработки 100 нМ немеченого пептида CoilR было достаточно для уменьшения мечения CoilR-Cy5 ( SI, приложение , фиг. S1). Флуоресценция Cy5 стала почти не обнаруживаемой после предварительной обработки 10-кратным избытком немеченого CoilR для клеток, экспрессирующих mEmerald-CoilE-Actin или Mito-CoilE-mEmerald.Сигнал Cy5, локализованный в ядрышках, был обнаружен для клеток, предварительно обработанных ≥1000 нМ CoilR, но сигнал был снижен, и его становилось все труднее обнаруживать. h3B локализован в небольшом субядерном объеме, что делает CoilR-Cy5 локально сконцентрированным и более обнаруживаемым. В целом, наши условия обработки были достаточными для эффективной маркировки большей части, но не всех, мишеней, меченных CoilE, в фиксированных клетках.

Получение изображений поглощения железа с помощью VIPER.

Затем мы оценили VIPER путем визуализации двух компонентов механизма поглощения железа: трансферрина (Tf) и рецептора трансферрина 1 (TfR1).Путь TfR1 представляет собой хорошо описанную систему рецептор-опосредованного эндоцитоза (40, 41). Вкратце, нагруженный железом Tf связывается с TfR1, и комплекс интернализируется через покрытые клатрином везикулы. Эти эндосомы подкисляются, высвобождая железо из Tf. Восстановленное железо транспортируется в цитозоль, где оно используется белками, требующими железа, или хранится. Затем комплекс апо – Tf / TfR1 возвращается на поверхность клетки. Tf освобождается от TfR1, что позволяет перезапустить процесс. Поглощение железа происходит быстро, при этом интернализация комплекса Tf / TfR1 в ранние эндосомы происходит в течение нескольких минут после связывания Tf, а рециркуляция Tf-TfR1 обратно на поверхность происходит менее чем за 20 минут (42).

Мы использовали конфокальную FM для наблюдения за локализацией и перемещением Tf и TfR1 в живых клетках. Мы создали вектор с тегом CoilE во внеклеточном С-концевом домене TfR1 (pcDNA3.1_TfR1-CoilE). Для сравнительного анализа мы приобрели вектор, кодирующий TfR1, слитый с мономерным красным флуоресцентным белком mCherry (pcDNA3_TfR1-mCherry; Addgene # 55144). Для этих исследований мы использовали клеточную линию TRVb яичников китайского хомячка (CHO), которая не экспрессирует TfR1 или близкородственный рецептор трансферрина 2 (TfR2) (43).Мы выбрали эту клеточную линию, чтобы гарантировать, что все клеточные TfR1 будут помечены CoilE или mCherry. Трансфицированные клетки охлаждали до 4 ° C, чтобы приостановить эндоцитоз, и обрабатывали в течение 30 минут флуоресцентным лигандом Tf-AF488. Клетки, экспрессирующие TfR1-CoilE, одновременно обрабатывали CoilR-Cy5, в то время как клетки, экспрессирующие TfR1-mCherry, не обрабатывали. Клетки промывали, возвращали к 37 ° C и визуализировали сразу после мечения (0 мин) и через 30 мин.

В оба момента времени TfR1, помеченный VIPER, колокализовался с Tf-AF488 (рис.3), что дает убедительные доказательства того, что меченый TfR1 сохраняет свою лиганд-связывающую функцию. Большая часть флуоресцентного сигнала от CoilR-Cy5 (рецептор) и AF488 (лиганд) ограничивалась поверхностью клетки в течение 0 минут до появления в ярких флуоресцентных эндосомах через 30 минут. Через 30 мин часть TfR1 клеточной поверхности больше не колокализуется с Tf, что соответствует рециркуляции комплекса и высвобождению Tf в среду. Эти результаты демонстрируют, что VIPER позволяет наблюдать взаимодействия связывания рецептор-лиганд, эндоцитоз рецептора и рециклинг рецептора (косвенно).Мы обнаружили, что пептиды зонда CoilR были непроницаемыми для живых клеток. В результате мечение CoilR-Cy5 было ограничено локализованным на клеточной поверхности TfR1-CoilE, что позволило нам проследить за эндоцитозом этого пула рецепторов.

Рис. 3.

Рецептор трансферрина, меченный VIPER, сохраняет связывание трансферрина и эндоцитоз. ( A ) Клетки CHO TRVb, экспрессирующие TfR1-CoilE, обрабатывали CoilR-Cy5 и флуоресцентным лигандом (Tf-AF488). В живых клетках мечение как Tf-AF488, так и CoilR-Cy5 было локализовано на поверхности клетки через 0 мин.Через 30 мин сигналы AF488 и Cy5 от комплекса Tf-TfR1 наблюдались вместе в эндоцитарных везикулах. ( B ) Клетки, экспрессирующие TfR1-mCherry, обрабатывали Tf-AF488. В A и B желтые прямоугольники очерчивают вставки , которые обеспечивают изображение в 2-кратном увеличении. Объединенные изображения (, правый столбец ) включают Tf-AF488 (зеленый), ядерное пятно (синий) и либо mCherry (пурпурный), либо CoilR-Cy5 (пурпурный). (Масштаб: 25 мкм.)

Затем мы визуализировали клетки, экспрессирующие TfR1-mCherry (рис.3 В ). По сравнению с VIPER, мы наблюдали меньшую совместную локализацию зеленой и красной флуоресценции в оба момента времени. Мы обнаружили, что коэффициент корреляции Пирсона Tf-AF488 с VIPER-меченным рецептором (AF488 с Cy5) как на 0 мин (81%), так и на 30 мин (87%) был больше, чем у Tf-AF488 с TfR1-mCherry, который составляла 65% через 0 мин и 75% через 30 мин ( SI Приложение , рис. S2). Это исследование подчеркивает ключевую особенность тега VIPER: только VIPER позволяет однозначно наблюдать за интернализацией рецепторов клеточной поверхности после обработки флуоресцентным лигандом.

В родственном эксперименте мы продемонстрировали, что интернализация Tf и TfR1 может наблюдаться с помощью покадровой визуализации. Мы получили 25-минутную динамику для клеток CHO TRVb, экспрессирующих либо меченый (TfR1-CoilE), либо немаркированный (TfR1) рецептор. Мечение VIPER было высокоспецифичным: сигнал CoilR-Cy5 наблюдался только для клеток, экспрессирующих TfR1-CoilE, а не для немаркированного TfR1. Полный временной график можно найти в приложении SI , рис. S3.

Двухцветная маркировка TfR1.

Мечение Pulse-chase — это признанный метод последовательной маркировки клеток с помощью различимых репортеров. Этот метод основан на быстрой маркировке и совместимости живых клеток для получения двухцветных изображений динамических популяций белков с временным разрешением. Мы использовали VIPER для импульсной маркировки популяции TfR1 на клеточной поверхности красным флуоресцентным Cy5, а затем пометили вторую популяцию зеленым флуоресцентным BODIPY (рис. 4). Вкратце, клетки CHO TRVb, экспрессирующие TfR1-CoilE, охлаждали до 4 ° C и затем обрабатывали CoilR-Cy5 для импульсной маркировки рецепторов на поверхности клетки.Мы вернули клетки к 37 ° C и позволили рецепторам, меченным Cy5, распределиться в течение 5, 30 или 120 мин. Затем клетки обрабатывали ледяной смесью CoilR-BODIPY для преследования второй популяции рецепторов. Клетки промывали, фиксировали и отображали. В каждый момент времени мы наблюдали помеченную CoilR-Cy5 популяцию TfR1 (пурпурный) преимущественно внутри пузырьков, что согласуется с быстрым эндоцитозом TfR1. Напротив, CoilR-BODIPY-меченый TfR1 (зеленый) был преимущественно локализован на поверхности клетки. Небольшая часть рецепторов, меченных BODIPY, появилась во флуоресцентных точках, что согласуется с предыдущими сообщениями о том, что некоторая интернализация Tf происходит при 4 ° C (40).Этот эксперимент также был проведен с немаркированным TfR1, который подтвердил, что мечение CoilR было специфичным для TfR1-CoilE ( SI Приложение , рис. S4). Этот эксперимент по маркировке с отслеживанием импульсов демонстрирует, что технологию VIPER можно использовать для отслеживания двух различных популяций рецепторов с течением времени. Кроме того, маркировка VIPER была быстрой, достаточная маркировка была достигнута в течение 15 минут лечения.

Рис. 4.

Двухцветная импульсная маркировка TfR1. ( A ) Схема протокола маркировки с отслеживанием импульсов.( B ) Клетки, экспрессирующие TfR1-CoilE, подвергали импульсной метке CoilR-Cy5 (500 нМ, 15 мин), промывали и возвращали при 37 ° C на 5, 30 или 120 минут. Затем TfR1-CoilE метили с помощью CoilR-BODIPY (500 нМ, 15 мин), фиксировали и отображали для обнаружения как рецептора, меченного Cy5 (пурпурный), так и рецептора, меченного BODIPY (зеленый).

VIPER обеспечивает маркировку белков для многомасштабной микроскопии.

Требуется новая технология для маркировки и наблюдения белков как с помощью FM, так и с помощью EM. Теперь доступно оборудование для многомасштабной микроскопии.Мы использовали коммерческий прибор CLEM, FEI CorrSight, который позволяет предварительно анализировать биологические образцы с помощью FM перед обработкой на EM (44). Программное обеспечение FEI MAPS облегчает отбор и отслеживание клеток на разных платформах визуализации. Кроме того, коммерчески доступны репортеры CLEM. Квантовые точки ярко флуоресцентны и электронно-плотные — две важные особенности многомасштабной микроскопии (45).

Тег VIPER можно использовать для маркировки белков с помощью Qdots. Мы стремились определить, можно ли использовать эту уникальную особенность для многомасштабной микроскопии механизма поглощения железа.Для этих исследований живые клетки CHO TRVb обрабатывали как Tf-AF488, так и биотинилированным CoilR (CoilR-биотин), в котором мы обнаружили постфиксацию с использованием стрептавидина-Qdot655. Мы визуализировали клетки сначала с помощью FM, а затем с помощью сканирования EM (SEM) (рис. 5). Флуоресцентные микрофотографии позволили идентифицировать трансфицированные клетки, которые связывали Tf-AF488. Кроме того, мы наблюдали яркую флуоресценцию Qdot655, связанную с клетками, экспрессирующими TfR1-CoilE (фиг. 5 A ), но не для клеток, экспрессирующих немаркированный TfR1 (фиг. 5 B ).Мы использовали программное обеспечение MAPS для регистрации координат флуоресцентных клеток относительно предметного стекла, чтобы мы могли перемещать те же клетки для визуализации SEM.

Рис. 5.

Визуализация TfR1 с помощью многомасштабной микроскопии. Трансфицированные клетки CHO TRVb обрабатывали CoilR-биотином и Tf-AF488. После фиксации клетки обрабатывали стрептавидином-Qdot655 для обнаружения биотинилированных (помеченных VIPER) рецепторов. ( A ) Флуоресцентные микрофотографии клеток, экспрессирующих TfR1-CoilE. Трансфицированные клетки идентифицировали на основании связывания с Tf-AF488 (зеленый) и мечения Qdot655 (пурпурный).( B ) Флуоресцентные микрофотографии клеток, экспрессирующих немеченый TfR1. Мы выбрали область C (в A ) и область D (в B ) для получения изображений с помощью SEM с высоким разрешением. Образцы были обработаны перед визуализацией при 65000-кратном увеличении. СЭМ-микрофотографии клеток, экспрессирующих TfR1-CoilE ( C ), показали селективное мечение Qdot, в то время как мечение не наблюдалось на клетках, экспрессирующих немаркированный TfR1 ( D ). Вставки обеспечивают увеличенный вид области в рамке.

Затем образцы были обезвожены и покрыты углеродом для визуализации с помощью SEM. Микрофотографии были получены на приборе FEI Helios Nanolab 660, который обеспечил топографический вид клеток, предварительно отобранных с помощью FM. При увеличении 65000 × Q-точки наблюдались как маленькие ярко-белые сферы на темно-сером фоне (см. Рис. 5 C , , вставка для увеличенного изображения Qdots). Выпуклые элементы на поверхности клетки, такие как выступы мембраны, выглядят светло-серыми или белыми. Микрофотографии выявили плотное мечение Qdot655 для клеток, экспрессирующих TfR1-CoilE (рис.5 С ). Мечение Qdot, обеспечиваемое VIPER, оказалось высокоспецифичным, почти без неспецифической ассоциации частиц с TfR1 или клеточными поверхностями (рис. 5 D ).

Другие метки EM используют осаждение DAB для создания контраста (24⇓⇓⇓⇓ – 29), но продукт реакции может быть трудно контролировать. В отличие от этого, обнаружение целей на основе Qdot позволяет проводить количественный анализ изображений, поскольку маркировка является стехиометрической. Чтобы продемонстрировать эту особенность, мы алгоритмически сегментировали и подсчитали количество частиц Qdot655 в поле зрения на микрофотографиях SEM.Мы сделали 12 изображений ( n = 6 ячеек) для каждого условия. В клетках, меченных VIPER, мы идентифицировали одиночные Qdots, димеры и мультимеры, но обнаружили, что большинство Qdots были распределены в виде мономеров ( SI Приложение , Таблица S1). SI Приложение , рис. S5 и S6 предоставляют репрезентативные микрофотографии с сегментацией частиц. Мы определили, что в клетках, экспрессирующих TfR1-CoilE, было 110 ± 34 Qdots / мкм 2 (среднее ± стандартное отклонение); Плотность Qdot варьировалась от 63 до 190 Qdot / мкм 2 .Мы связываем это изменение с различиями в экспрессии рецепторов среди временно трансфицированных клеток. Для клеток, экспрессирующих немеченый TfR1, мы наблюдали в среднем 0 Qdots / мкм 2 . Это исследование CLEM показывает, что VIPER является эффективной меткой EM, которая позволяет с высокой точностью маркировать клеточные рецепторы с помощью Qdots. Мы ожидаем, что способность идентифицировать субклеточную локализацию, кластеризацию и относительное количество белка будет полезна для различных приложений в клеточной биологии.

Сравнение VIPER с иммуномаркированием.

Иммуномечение широко используется для маркировки и визуализации целевых белков с помощью FM, EM и CLEM. Для EM белки обычно обрабатывают первичным антителом, генерируемым против белка, и вторичным антителом, доставляющим электронно-плотный репортер (например, коллоидное золото или Qdot). Мы выбрали три коммерческих антитела против внеклеточного домена TfR1: 8D3 (46), Ab1086 (47) и Ab216665. Первичные антитела выявляли вторичным антителом против хозяина, конъюгированным с Qdot655.Мы использовали Qdot655 вместо коллоидного золота, чтобы провести прямое сравнение с нашей маркировкой VIPER Qdot. Для этих исследований мы использовали TfR1-CoilE, экспрессирующие клетки CHO TRVb, обработанные живым Tf-AF488. Мы выбрали клетки для изображения на основе связывания Tf, пытаясь сопоставить интенсивность зеленой флуоресценции Tf-AF488 среди образцов. Затем фиксированные клетки были помечены VIPER или иммуномечены.

Для двух антител, Ab1086 и Ab216665, мы не смогли определить условия для маркировки рецептора, что является общей проблемой, с которой сталкиваются исследователи, использующие коммерческие антитела.Мы не обнаружили свидетельств мечения TfR1-CoilE Ab1086 и Ab216665 с помощью FM или EM ( SI, приложение , рис. S7). Однако мы наблюдали селективное мечение TfR1 антителом 8D3, которое было обнаружено козьим антителом против IgG крысы, конъюгированным с Qdot655 (фиг. 6). Качественно иммуномечение 8D3 (фиг. 6 D ) выглядело аналогично мечения VIPER (фиг. 6 C ). Однако количественный анализ шести изображений для каждого условия ( n = 3 клетки) показал, что мечение 8D3 (464 ± 97 Qdots / мкм 2 ) было более эффективным, чем VIPER (270 ± 85 Qdots / мкм 2 ).Однако также возможно, что непрямое обнаружение рецептора привело к тому, что несколько вторичных антител были связаны с одним первичным 8D3.

Рис. 6.

Мечение мишеней и визуализация CLEM с помощью VIPER или иммунного мечения. Клетки, экспрессирующие TfR1-CoilE, идентифицировали по связыванию с Tf-AF488. Для мечения VIPER фиксированные клетки обрабатывали CoilR-биотином и стрептавидином-Qdot655 ( A ). Для иммуномечения клетки обрабатывали первичным антителом против Tf (Ab82411; F ) или TfR1 [8D3 ( B ) или H68.4 ( E )]. Первичные антитела выявляли с помощью вторичных антител, конъюгированных с Qdot655. Флуоресцентные микрофотографии клеток, меченных VIPER ( A ), 8D3 ( B ), H68.4 ( E ) и Ab82411 ( F ), были получены и картированы для СЭМ высокого разрешения. После обработки мы выбрали области (желтые прямоугольники) для получения изображений с помощью SEM при 100000-кратном увеличении. Вид с высоким разрешением показывает маркировку Qdot поверхности ячейки ( C , D , G и H ).Пурпурный Вставки представляют собой 4-кратное увеличение Qdots. Для H68.4 обработка детергентом вызвала экстракцию мембраны, что наблюдалось с помощью 3000 × SEM, и сигнал Tf-AF488 был снижен.

Затем мы оценили широко используемое антитело против TfR1: H68.4 (48). Клетки должны были быть пермеабилизированы постфиксацией, чтобы пометить цитозольный домен TfR1 с помощью H68.4, который повреждает клеточную мембрану (фиг. 6 E ). Более того, потеря флуоресценции Tf-AF488 произошла во время пермеабилизации, предположительно из-за потери ассоциированного с мембраной Tf.С H68.4 мы наблюдали 182 ± 63 Qdots / мкм 2 , что значительно меньше, чем наблюдаемое с 8D3 или VIPER. Мы также сравнили VIPER-мечение TfR1 с иммуномечением Tf (фиг. 6 F и H ), которое было неэффективным (91 ± 19 Qdots / мкм 2 ) по сравнению с VIPER, 8D3 или H68.4. В целом, VIPER превзошел иммунную метку для четырех из пяти оцениваемых антител.

Биотинилированный Tf позволил нам провести окончательное сравнение с VIPER. Гомодимерный TfR1 связывает два нагруженных железом Tf с низким наномолярным сродством (49).Полное мечение TfR1 либо CoilR-биотином, либо Tf-биотином будет размещать два биотинилированных лиганда на каждом рецепторном комплексе. Следовательно, обнаружение Tf-биотина стрептавидином-Qdot655 должно быть сопоставимо с обнаружением TfR1, меченного CoilR. Мы проверили эту гипотезу и наблюдали селективное мечение Qdot655 для обоих образцов с помощью FM и EM ( SI, приложение , рис. S8). Мы подсчитали 210 ± 71 Qdots / мкм 2 для VIPER и 258 ± 65 Qdots / мкм 2 для Tf ( SI Приложение , Таблица S2), разница, которая не является статистически значимой ( P = 0.126). Подводя итог, наш сравнительный анализ демонстрирует, что мечение VIPER является селективной и универсальной альтернативой обычно используемым методам визуализации белков с помощью EM или CLEM.

Заключение

VIP-метки — это новое дополнение к инструментарию микроскопии, объединяющее иммунную метку, флуоресцентные белки и другие генетически кодируемые метки. VIPER — это небольшая метка, добавляющая пептид с молекулярной массой менее 6 кДа к целевому белку. Мы предоставляем доказательства того, что VIPER обладает высокой специфичностью для мечения различных субклеточных мишеней, включая цитоскелет, митохондрии и ядро.Белки могут быть помечены репортерным химическим составом с пре- или постфиксацией. Мы продемонстрировали диапазон репортеров, пометив TfR1-CoilE с помощью CoilR-BODIPY, CoilR-Cy5 и CoilR-биотина. Существует множество реактивных флуорофоров и флуоресцентных сенсоров, которые могут быть сайт-специфически конъюгированы с CoilR, обеспечивая множество других возможностей для приложений визуализации.

VIPER совместим с живыми клетками и динамической визуализацией. Мы пометили TfR1 CoilE, чтобы получить изображение поглощения железа клетками. VIPER, по-видимому, не влиял на локализацию белка, функцию (например,g., связывание лиганда) или трафик. Важно отметить, что VIPER позволил динамически наблюдать популяции рецепторов и разрешать пространственно-временное разрешение. Мечение было достигнуто в течение 15 мин (рис. 4). Мы не оценивали более короткое время маркировки CoilR, но мы полагаем, что более быстрая маркировка возможна.

Мы разработали VIPER как технологию многомасштабной микроскопии. Представленные здесь исследования CLEM демонстрируют, что маркировка VIPER предлагает убедительную альтернативу иммуномечению. Мы оценили четыре антитела против TfR1 в прямом сравнении с VIPER.В то время как и 8D3, и H68.4 селективно метили TfR1, метка H68.4 требовала обработки, которая нарушала клеточную мембрану. Половина оцененных антител против TfR1 не пометила TfR1. В отличие от VIPER, иммуномечение зависит от антител с широко варьируемой целевой специфичностью и аффинностью. Для белков, в которых отсутствуют специфические антитела, VIPER дает возможность наблюдать эти мишени с помощью многомасштабной микроскопии.

Мы ожидаем, что EM-совместимость VIPER будет особенно полезной для изучения субклеточной локализации и сборки клеточных белков.В будущих исследованиях биотинилирование рецепторов, опосредованное VIPER, может быть обнаружено с помощью других репортеров, таких как стрептавидин-золото. В качестве альтернативы CoilR может быть напрямую конъюгирован с золотом для EM или бифункционализирован флуорофором плюс золото для CLEM. Эти варианты следует изучить с целью использования многоцветной визуализации для изучения мультибелковых сборок с точностью до наномасштаба.

Совместимость VIPER с различными химическими репортерами обеспечивает гибкость, не имеющую себе равных с тегами на основе DAB.Однако важно подчеркнуть, что VIPER не заменяет и не заменяет все другие генетически закодированные теги. Скорее, VIPER дополняет другие методы маркировки, такие как иммуномечение или флуоресцентные белки, чтобы исследователи могли помечать и отслеживать сразу несколько отдельных мишеней. Мы ожидаем, что этот усовершенствованный набор инструментов для микроскопии облегчит создание более подробных и информативных карт клеточных белков.

Благодарности

Мы благодарим доктора Майкла Дэвидсона (Университет штата Флорида) за хранение его коллекции флуоресцентных белков в Addgene; нашим коллегам из Орегонского университета здоровья и науки за советы, особенно докторам.Джо Грей, Джим Коркола, Дэн Цукерман, Даниэль Йоргенс, Стефани Кеч Петри и Кристал Чоу; и д-р Тимоти МакГроу (Корнельский университет), щедро предоставивший клеточную линию TRVb яичников китайского хомячка. Электронная микроскопия выполнялась на ядре Multiscale Microscopy Core. Это исследование было поддержано щедрым финансированием Орегонского университета здоровья и науки и Национального института здоровья (грант R01 GM122854). J.K.D. был поддержан Орегонским отделением Фонда ученых колледжей.

Сноски

  • Вклад авторов: J.K.D., J.D.W., H.K.Z., C.S.L., C.A.E. и K.E.B. спланированное исследование; J.K.D., J.D.W., H.K.Z., C.S.L. и K.E.B. проведенное исследование; J.K.D., J.D.W., H.K.Z. и Y.H.C. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; J.K.D., J.D.W., H.K.Z., Y.H.C., C.S.L., C.A.E. и K.E.B. проанализированные данные; Y.H.C. проведен количественный анализ изображений; и J.K.D., J.D.W., H.K.Z. и K.E.B. написал газету.

  • Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

  • Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.

  • Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1808626115/-/DCSupplemental.

Электронная доска для дартса Viper Vtooth 1000 EX ™ Онлайн для продажи • Бильярд N Подробнее

Описание

Вы больше никогда не будете играть в дартс так же, как с электронной онлайн-доской для дартса Vtooth 1000 EX ™, с возможностью онлайн-игры!

Используя Bluetooth Smart Technology , вы можете подключить свою доску для дартса по беспроводной сети к смартфону, планшету или другому устройству через приложение Viper Darts Linkup®.Это революционное бесплатное мобильное приложение позволит вам играть онлайн в 301 и крикет с людьми со всего мира. Приложение также предлагает 16 офлайн-игр, и их ждет еще много. Следите за своими результатами с помощью настраиваемого профиля, который сохранит ваш прогресс и измерит вашу статистику дартс. Никогда раньше вам не удавалось так ясно видеть крикет и ’01 на одном табло. Приложение табло может использовать функцию быстрой игры, чтобы вы сразу же начали играть в свои любимые игры.Vtooth 1000 EX ™ имеет компактную 13-дюймовую мишень, что позволяет решить настоящую задачу. В стильной цветовой гамме используется четкий синий и серебристый цвет на черном, чтобы ваша доска выделялась среди конкурентов. Эта доска для дротика оснащена сегментами Target Tested Tough ™, которые выдерживают интенсивное использование, а также ультратонким пауком для минимизации отскоков. Кроме того, точно спроектированные отверстия вогнутых сегментов фиксируют ваши выстрелы и помогают уменьшить отскоки. Многопользовательская игра поддерживает до 4 игроков, поэтому никто не останется позади.Погрузитесь в новую технологическую революцию в дартс с электронной онлайн-доской для дартса Viper Vtooth 1000 EX ™!

  • Новейшие технологии в бесплатном приложении Viper Darts Linkup App® переносят эту доску для дартса в онлайн-мир, так что вы можете играть против противников по всему миру как в 301, так и в Cricket
  • Легко подключайтесь к своему интеллектуальному устройству Android или Apple через Bluetooth Smart Technology, чтобы играть в дартс онлайн, а также просматривать и отслеживать свои результаты.
  • Наслаждайтесь 16 играми, доступными в настоящее время, а также новыми играми, добавленными с бесплатными обновлениями приложений
  • Непревзойденная конструкция с компактной 13-дюймовой поверхностью мишени, вогнутыми отверстиями для сегментов для уменьшения отскока и сегментами Target Tested Tough ™, которые раз за разом выдерживают самые тяжелые броски.

Check Also

Профессия ит специалист: Профессия IT-специалист. Описание профессии IT-специалиста. Кто такой IT-специалист. . Описание профессии

Содержание Что такое IT специалист — Кто кем работаетСамые востребованные IT-профессии 2021 года / Блог …

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *