Суббота , 16 октября 2021
Главная / Разное / Мадекассосид что это: Мадекассосид: что нужно знать? | KoreaBeauty.by

Мадекассосид что это: Мадекассосид: что нужно знать? | KoreaBeauty.by

Содержание

Мадекассосид в косметике: что нужно знать?

В линии Meder есть сыворотка Serum Soin-Apax, обещающая защиту от свободных радикалов, успокаивающий и противовоспалительный эффект. Основной действующий ингредиент экстракт центеллы азиатской. И причем здесь Мадекассосид, спросите вы? =)

Я расскажу об активном компоненте центеллы, который омолаживает кожу путем стимулирования синтеза коллагена и восстановления повреждений. Это Мадекассосид, одна из самых интересных молекул растительного происхождения!

Мадекассосид не просто экстракт центеллы азиатской. Это активный компонент, молекула или чистый изолят, полученный из центеллы. Он УЖЕ не является экстрактом, и в составе этикетки обозначается как отдельное чистое вещество.

Мадекассосид называют «уникальной молекулой, разработанной Лабораторией La Roche-Posay в результате исследования процессов регенерации кожи».  Это совсем не так. Ингредиент получила другая компания, а концерн Лореаль закупает Мадекассосид  наряду с другими фирмами

для своей косметики.

Как обнаружить его на этикетке в составе INCI:

  • Сentella asiatica extract: экстракт центеллы азиатской
  • Madecassoside: молекула Мадекассосид

Что такое Мадекассосид

Мадекассосид (Madecassoside) — это выделенный чистый изолят из  Центеллы Азиатской (Готу Кола). Это лекарственное растение широко используют в китайской, аюрведической и даже африканской медицине.
Мадекассосид был обнаружен в 1973 году, но не мог быть выделен и стандартизирован до 2003 обычными хроматографическими методами. По виду это белый кристаллический порошок, с коэффициентом чистоты 98% и по сравнению с экстрактом центеллы в сотни раз дороже.

Как Мадекассосид влияет на кожу

Мадекассосид имеет три доказанных косметических свойства:  противовоспалительное, заживляющее и омолаживающее действие.

Он увеличивает синтез коллагена I и III типа, который ухудшается при старении кожи. А коллаген I типа играет важную роль в заживлении ран. Средства по уходу за кожей с madecassoside могут быть также полезны для стимуляции заживления ран после хирургических процедур.

Открыт магазин!

В магазин

Основное действие:

  • контролирует и снижает микро-воспаления в коже
  • восстанавливает активность фибропластов и стимулирует синтез коллагена I и III типа.
  • за счет регенерации волокон дермы уменьшает глубокие морщины в коже.
  • обеспечивает подтягивающий эффект на коже в среднесрочной перспективе (по данным независимых исследований)
  • снижает активность матриксных металлопротеиназ (MMPs), которые приводят к разрушению соединительной ткани и коллагена в коже.
  • способствует заживлению и восстановлению кожи за счет регуляции кератиноцитов, основных клеток эпидермиса
  • может использоваться при псориазе за счет сильных противовоспалительных свойств
  • представляет большой интерес в дерматологии и пластической хирургии в фазе восстановления кожи

Le Laboratoire M.E. SkinLab одна из  интересных марок, сделавших ставку на центеллу азиатскую. Основана в 2009 фармацевтом Michèle Evrard, все средства содержат MA2 Complex: комбинацию мадекассосида, азиатикозида и азиатиковую кислоту.

Мадекассосид в косметике

Мадекассосид используется в восстанавливающем бальзаме Цикапласт La Roche-Posay Cicaplast Baume B5 для стимуляции восстановления кожи после повреждений и химических пилингов.

Био-энергетический бальзам Baume 27 от Cosmetics 27 by M.E. SkinLab содержит 27 активных компонентов и три чистых изолята центеллы.

На iHerb тоже есть крем с мадекассозидом: цика-бальзам Etude House Cica Balm с пантенолом и скваленом

Альтернатива Мадекассосиду в косметике

Есть и альтернативные соединения, тоже чистые изоляты, полученные экстрагированием из Центеллы Азиатской. Это asiaticoside (азиатикозиды), азиатиковая кислота (asiatic acid) и мадекассовая кислота (madecassic acid).

Во французских аптеках продается крем Madecassol для заживления рубцов и шрамов на коже, это также отличное средство для снятия покраснений и раздражений. В составе мадекассол, содержащий 40% азиатикозидов и 60% смеси азиатиковой и мадекассовой кислот.

Также почитать:

  • исследования мадекассосида на PubMed
  • статья про центеллу в косметологии Centella asiatica in cosmetology

обзор 3 средств от La Roche-Posay

Что такое мадекассосид

Мадекассосид — модный и очень активный ингредиент, полученный из центеллы азиатской. Центеллу (известную также как готу кола, тигровая трава) давно оценили за способность восстанавливать поврежденную кожу.

Первыми это свойство обнаружили тигры, которые имеют обыкновение кататься в зарослях центеллы, чтобы залечить раны.

Медекассосид получают из центеллы азиатской © iStock

Экстракт центеллы азиатской издавна применяют в восточных традициях врачевания, да и в современных косметических формулах его используют охотно. Однако именно мадекассосид считается наиболее передовой и эффективной формой центеллы. Эта молекула была обнаружена еще в 70-е, но внедрять ее в косметические формулы научились совсем недавно.

Вернуться к оглавлению

Как действует на кожу

Список дел, на которые способна эта чудо-молекула, впечатляет и даже кажется невероятным. Тем не менее все, что мы скажем о мадекассосиде — чистая правда. Вот что он умеет:

  1. 1

    стимулирует синтез коллагена I и III типов, а значит, возвращает коже упругость и разглаживает морщины;

  2. 2

    работает как антиоксидант;

  3. 3

    имеет противовоспалительный эффект;

  4. 4

    обладает капилляропротекторным и лимфодренажным действием;

  5. 5

    снижает негативное влияние ультрафиолета.

Вернуться к оглавлению

Для чего применяется

Этот ингредиент можно встретить в восстанавливающих средствах и формулах, направленных на коррекцию проявлений старения:

  • морщин;

  • потери упругости;

  • ослабления кожного барьера и, как следствие, сухости.

Наиболее активный популяризатор мадекассосида в Европе (в Азии-то его используют многие бренды) — марка La Roche-Posay. Она сделала эту молекулу своим фирменным ингредиентом и создает на его базе продукты для борьбы с возрастными изменениями кожи. И не только.

Вернуться к оглавлению

Обзор кремов с мадекассосидом

Успокаивающий мультивосстанавливающий бальзам Cicaplast B5, La Roche-Posay

Этот продукт прославился способностью сразу снимать признаки раздражения на любых участках лица и тела. Обладает насыщенной кремовой текстурой, которая обволакивает кожу, создавая на ее поверхности антибактериальный барьер.

Помимо мадекассосида в состав входят минеральный комплекс (медь, марганец и цинк), успокаивающий пантенол и масло ши.

Антивозрастной уход Redermic C, La Roche-Posay

Здесь использован мадекассосид высокой степени очистки в большой концентрации — 95%. Вещество выступает в паре с концентрированным витамином С, чтобы защитить волокна коллагена от разрушения и стимулировать производство новых структур. Дополнительные ингредиенты работают над улучшением качества кожи.

  • Витамин С выравнивает цвет лица, корректирует морщинки и способствует упругости кожи.

  • Низкомолекулярная гиалуроновая кислота наполняет кожу влагой и расправляет изнутри.

  • Нейросенсин — пептид, действующий успокаивающе на чувствительную кожу.

Формула выпущена в двух вариантах: для нормальной/комбинированной и сухой кожи.

Концентрированная сыворотка против морщин для повышения упругости, тонуса и эластичности кожи Hyalu B5 Serum, La Roche-Posay

  • Основана на гиалуроновой кислоте разной молекулярной массы, увлажняет кожу изнутри и снаружи.

  • Витамин B5 способствует скорейшему восстановлению кожного барьера, удерживающего влагу.

Оба ингредиента создают идеальные условия для работы мадекассосида, а он, в свою очередь, повышает плотность кожи и уменьшает выраженность морщин за счет стимуляции синтеза коллагена.

Вернуться к оглавлению

Мадека-что? Мадекассосид! Как компонент со странным названием может помочь коже?

Вот уже три года центелла не сдаёт позиций! «Тигровая трава» по-прежнему возглавляет ТОП самых любимых и узнаваемых компонентов. И в этом нет ничего удивительного.


Центелла азиатская успешно используется людьми в медицинских, гастрономических и косметических целях уже более 3000 лет и является одним из самых хорошо изученных растений. 

И за несколько тысячелетий активного использования люди эмпирическим путём выяснили, что центелла умеет много чего интересного! 


Например, мастерски заживлять ранки так, что после них практически никогда не остаётся шрамов! За исключением действительно глубоких повреждений кожи. Кстати! Знаете, почему на косметике с центеллой пишут слово «cica»? Оказывается, это сокращение английского слова «cicatrising», которое в переводе на русский означает «заживляющий», «обладающий заживляющим действием» или «рубцующийся». Интересно также, что латинское слово «cicatrix», от которого произошло «cicatrising», означает «шрам». 

Вот такая вот вышла занимательная этимологическая минутка! Теперь к сути.

  • Центелла всячески катализирует процесс заживления повреждённой кожи. Во-первых, она стимулирует деятельность фибробластов, синтезирующих коллаген 1 и 3 типов. В итоге «пустоты», возникшие там, где целостность кожи была нарушена, быстро зарастают качественной, правильно размещённой тканью. А, во-вторых, центелла стимулирует образование кератиноцитов и корнеоцитов, помогая сформировать новую гладкую «рабочую поверхность» — наши эпидермис и роговой слой. 
  • Центелла очень эффективна против розацеа! Она укрепляет сосуды и делает их стенки менее проницаемыми, благодаря чему краснота значительно уменьшается в течение нескольких недель применения средств с высоким содержанием центеллы. 
  • Центелла борется с отёками! Укрепляя сосуды (а мы все помним, что хорошее кровообращение напрямую зависит от их состояния) центелла обеспечивает хороший кровоток и стимулирует отток лимфы. 
  • Центелла также «чинит» барьерные функции и снижает чувствительность кожи. Как? За счёт корнеоцитов, синтез которых она стимулирует! Корнеоциты составляют основу нашего рогового слоя (защитного барьера). Если мы слишком часто отшелушиваем кожу, мы счищаем их и сознательно избавляемся от естественного «щита», оберегающего нас от бактерий, инфекций, ультрафиолета и обезвоживания. Центелла в свою очередь запускает активное производство новых корнеоцитов и помогает нам довольно быстро его восстановить!
  • Центелла убивает болезнетворные бактерии. Она безжалостно растворяет из защитную оболочку и буквально полностью их обезвреживает! С помощью центеллы раньше успешно лечили лепру и даже туберкулёз кожи!
  • Центелла обладает антиоксидантными свойствами, а это и защита от раннего старения, и защита от воспалений в одном флаконе.

Как обычный сорняк может делать столько всего полезного?!

В составе центеллы азиатской есть активные соединения, которые проделывают всю основную работу по улучшению состояния кожи: азиатикозид, азиатиковая кислота, мадекассосид и мадекассовая кислота. Они составляют где-то 8% от всей массы растения, что довольно много (всё остальное — это стеролы, танины, флавоноиды, жирные кислоты, витамины и аминокислоты). 

Самый известный и распространённый из них мадекассосид. А по послухам ещё и самый мощный и эффективный! Всё что приписывают центелле, умеет и мадекассосид!

Его довольно часто можно встретить в уходовой косметике. Иногда мадекассосид даже выступает в роли ключевого компонента формулы и используется как самостоятельная единица в отрыве от своих «собратьев». 

Мадекассосид — настоящее спасение для людей, кожные проблемы которых носят аутоиммунный характер. Экзема, псориаз, аллергия и атопический дерматит? Тогда вам нужна косметика с центеллой и мадекассосидом. Дело в том, что мадекассосид балансирует количество цитокинов, которые провоцируют развитие воспалительной реакции. Переизбыток цитокинов даёт не очень хорошую реакцию на коже — зуд, жжение, сильное шелушение, краснота, отёчность и болезненные ощущения. Но мадекассосиду под силу купировать все симптомы и успокоить кожу за счёт снижения  количества медиаторов воспаления. А когда процессу восстановления ничего не мешает, он проходит быстрее!

Исследования также показывают, что в лечении ожогов мадекассосиду нет равных! 

В общем, вряд ли кого-то удивит, что средства с центеллой пользуются большим успехом у обладателей проблемной, чувствительной и повреждённой кожи!

Если бы Швеция была кремом для лица, она точно была бы Dr.Ceuracle Cica Regen 70 Cream! Настолько он нейтральный и безукоризненный. В нём совершенно нет никакой отдушки, а текстура самая сбалансированная из всех, что есть в природе. Имеет довольно простую но эффективную формулу с высоким содержанием центеллы и мадекассосида.  Смягчает, успокаивает и проделывает качественную работу по борьбе с воспалениями. 

Для жирной и комбинированной кожи сыворотка FarmStay Cica Farm Recovery Ampoule — просто мастхэв! Она очень лёгкая, невесомая, быстро впитывается и не перегружает кожу. Все активные компоненты заключены в капсулы благодаря которым они защищены от окисления и способны дать максимум пользы!

 Дуэт центеллы и витамина С — считается одним из лучших в мире косметической химии! Хорошая совместимость этих компонентов была не раз подтверждена лабораторными исследованиями. И классные отзывы на сывороткуKlairs Freshly Juiced Vitamin Drop лишний раз подтверждают это.


Очень простой и очень базовый крем CosRX Pure Fit Cica Cream создан для тех кто, в косметике прежде всего ценит функционал, а не декоративные составляющие (отдушка, упаковка и т.д.). Его формула — находка для людей с гиперчувствительной кожей. В ней нет ни спирта, ни отдушек никаких-либо других потенциально раздражающих компонентов. С таким уходом  кожа точно «словит» дзен!

Плотный и обволакивающий крем-одеялко Botanity Flavon Intensive Cream укроет кожу от невзгод, таких как сухость, стянутость, покраснения и прыщики. Но как в любое одеялко, в него лучше укутываться на ночь! Центелла и мадекассосид в нём — вспомогательные компоненты, но это не мешает им эффективно делать свою работу.


Сыворотка для борьбы с воспалениями Manyo Blemish Red Ampoule внешне похожа на лекарство, а внутри больше напоминает ведьмино зелье. В её составе с центеллой и мадекассосидом мило соседствуют экстракт зантоксилума перечного, экстракт прострела корейского, экстракт уснеи бородовидной… Звучит очень перспективно. У бактерий, которые провоцируют появление прыщей точно нет шансов! 


Центелла азиатская и мадекассосид в косметике | Отзывы покупателей

Привет.
Впервые с центеллой азиатской я познакомилась в 13 году в сыворотке Meder Beauty Science Soin-Apax (Sa3).
Прошу посмотреть.
Сыворотка мне настолько понравилась, ранее я рассказывала о ней здесь, что я ее повторяла два раза, и параллельно стала делать себе тоники с центеллой. В то время я страдала сильными отеками правой половины лица и шеи, а центелла их удивительным образом снимала, по крайней мере, внешне — экстракт центеллы оказывает выраженное успокаивающее действие, подавляет воспаление, снимает отек, способствует рассасыванию застойных пятен.

Centella asiatica или готу-кола — это лекарственное растение, которое растет в тропических болотистых районах Индии и на Мадакаскаре. В аюрведе центелла относится к «брахма» — растению высшего порядка, в китайской медицине ценится за свои омолаживающие свойства.
Терапевтическая ценность этого растения в основном заключается в содержании пентациклических тритерпеновых соединений — азиатикозида, мадекасозида (мадекассосида) и их метаболитов. Вообще, состав этого невзрачного с виду растения достаточно широк — сапонины, танины, гликозиды, витамины В, К и Е и др. Благодаря такому богатому химическому составу, экстракт центеллы широко используется в различных БАДах, рекомендуемых для улучшения когнитивных функций, применяется в комплексной терапии нейродегенеративных заболеваний (Альцгеймер), хронической венозной недостаточности. [1]
Центелла также эффективна в лечении небольших ран и ожогов, псориазе. [2] Она ускоряет заживление ран, стимулируя эпителизацию, усиливает синтез коллагена, обладает противовоспалительными свойствами.
Как я отметила выше, я делаю себе тоники из экстракта центеллы азиатской, применяю их на все тело.
Делается он просто — нужно взять готовый порошок центеллы, у меня на данный момент такой:Порошок представляет из себя мельчайшую пудру желто-коричневого оттенка с дымным запахом. Вводится он в количестве от 2 до 20%, в воде не растворяется, но диспергируется в ней.
Для тоника необходимо взять по 10% порошка центеллы и глицерина и 80% воды. Сначала нужно смешать глицерин с водой, он легко растворяется, затем всыпать порошок, хорошенько взболтать и поставить на сутки в темное теплое место настаиваться. Условно говоря, получится мацерат, который затем нужно будет процедить и использовать по назначению. Также его можно использовать и в качестве водной фазы при изготовлении различных сывороток, кремов, что я и делаю в том числе.
Если мацерат используется не сразу, то необходимо будет добавить консервант, я добавляю цитрат серебра и эфирное масло немецкой ромашки.
Я использую этот настой просто — переливаю его в бутылку с распылителем и брызгаю на все тело, особое внимание уделяя псориатическим бляшкам (да, я ходячая болячка) В первую очередь этот настой снимает зуд и сухость.

Madecassoside (Мадекассосид) — это один из основных тритерпенов центеллы, и это чистый изолят, то есть это отдельное вещество и на этикетке значится как Madecassocide. Этот тритерпен стимулирует синтез коллагенов I и III типов, и одновременно снижает активность матриксных металлопротеинах, отвечающие за разрушение различных видов коллагена. Еще одно свойство мадекассосида, обнаруженное недавно — способность регулировать процессы кератинизации, влияя на созревание кератиноцитов.
Мадекассосид может защитить клетки от окислительного повреждения, обладает отбеливающим потенциалом. [3]
Обычно в косметике мадекассосид используется в концентрации 0.1-0.2%. [4]
Активно этот ингредиент использует компания La Roche-Posay в своей антивозрастной линейке Redermic в сочетании с 5% витамином С. Aqua / Water, Glycerin, Dimethicone, Butyrospermum Parkii Butter / Shea Butter, Limnanthes Alba Seed Oil / Meadowfoam Seed Oil, Ascorbic Acid, Polymethylsilsesquioxane, Butylene Glycol, Paraffinum Liquidum / Mineral Oil, Ammonium Polyacryldimethyltauramide / Ammonium Polyacryloyldimethyl Taurate, Cetyl Alcohol, Peg-100 Stearate, Glyceryl Stearate, Potassium Hydroxide, Paraffin, Sodium Styrene/Ma Copolymer, Cera Microcristallina / Microcrystalline Wax, Madecassoside, Dimethicone/Vinyl Dimethicone Crosspolymer, Dimethiconol, Sodium Hyaluronate, Disodium Edta, Acetyl Dipeptide-1 Cetyl Ester, Xanthan Gum, Pentaerythrityl Tetra-Di-T-Butyl Hydroxyhydrocinnamate, Phenoxyethanol, Caprylyl Glycol, Parfum / Fragrance

La Roche-Posay Cicaplast Baume B5 Aqua / Water, Hydrogenated Polyisobutene, Dimethicone, Glycerin, Butyrospermum Parkii Butter / Shea Butter, Panthenol, Butylene Glycol, Aluminum Starch Octenylsuccinate, Propanediol, Cetyl Peg/Ppg-10/1 Dimethicone, Tristearin, Zinc Gluconate, Madecassoside, Gluconate, Magnesium Sulfate, Disodium Edta, Copper Gluconate, Acetylated Glycol Stearate, Polyglyceryl-4 Isostearate, Sodium Benzoate, Phenoxyethanol, Chlorhexidine Digluconate, Ci 77891 / Titanium Dioxide/

Резюмируя. Экстракт центеллы азиатской и мадекассосид интересны и подходят для ухода за кожей с акне, раздраженной, чувствительной, пострадавшей от солнечного излучения, возрастной. Личное дело каждого, включать ее в свой уход или нет, у меня она в постоянном использовании. Ну и всегда можно попробовать, вдруг подойдёт и понравится.

Ниже я приведу еще несколько средств с содержанием центеллы и мадекассосида.

Missha Near Skin Madecanol CreamCentella Asiatica Extract, Glycerin, Water, Dimethicone, Caprylic, Capric Triglyceride, Panthenol, Cetearyl Alcohol, Pentylene Glycol, Olea Europaea (Olive) Fruit Oil, Niacinamide, Propanediol, Cetearyl Olivate, Cyclopentasiloxane, Glyceryl Stearate, Microcrystalline Wax, Sorbitan Olivate, Dimethicone/Vinyl Dimethicone Crosspolymer, Carbomer, Tromethamine, Polyacrylate-13, Madecassoside, Artemisia Princeps Leaf Extract, Polyisobutene, Butylene Glycol, Polysorbate 20, Sorbitan Isostearate, Sodium Hyaluronate

Zimogen Centella Ferment CreamWater, Butylene Glycol, Glycerin, Squalane, Caprylic/Capric Triglyceride, Simmondsia Chinensis (Jojoba) Seed Oil, Beta-Glucan, BeesWax, Cetearyl Glucoside, Cetearyl Alcohol, Lactobacillus/Scutellaria Baicalensis Root Extract Ferment Filtrate, Centella Asiatica Extract, Bacillus Ferment, Rosa Canina Seed Extract, Scutellaria Baicalensis Root Extract, Thujopsis Dolabrata Branch Extract, Salix Alba (Willow) Bark Extract, Propolis Extract, Magnolia Kobus Bark Extract, Citrus Grandis (Grapefruit) Fruit Extract, Chamomilla Recutita (Matricaria) Flower/Leaf Extract, Camellia Sinensis Leaf Extract, Dimethicone, Sorbitan Stearate, Polysorbate 60, Juglans Regia (Walnut) Seed Oil, Borago Officinalis Seed Oil, Tocopheryl Acetate, Polyacrylate-13, Polysorbate 20, Polyisobutene, Arginine, Dipotassium Glycyrrhizate, Carbomer, Allantoin, Panthenol, Ceramide 3, Adenosine, Sodium Hyaluronate, Lecithin, Phenoxyethanol, Methylparaben, Fragrance

COSRX Centella Blemish Ампульная эссенция для проблемной кожи с экстрактом центеллы азиатскойCentella asiatica leaf water, butylene glycol, glycerin, betaine,1,2-hexanediol, allantoin, sodium hyaluronate, centella asiatica extract, arginine, peg-60 hydrogenated castor oil, chlorophyllin-copper complex, carbomer, hydroxyethylcellulos.

A’Pieu Madecassoside Cream
(этот крем у меня есть, скоро напишу отзыв)Centella Asiatica Leaf Water (40%), Water, Cyclopentasiloxane, Phenyl Trimethicone, Propanediol, Glycerin, PEG-10 Dimethicone, Cyclohexasiloxane, Niacinamide, Disteardimonium Hectorite, Ethoxydiglycol, Panthenol, Centella Asiatica Extract, Madecassoside (0.1%), Camellia Sinensis Leaf Extract, Rubus Suavissimus (Raspberry) Leaf Extract, Dimethicone Crosspolymer, Hamamelis Virginiana (Witch Hazel) Leaf Extract, Pinus Densiflora Leaf Extract, Sodium Chloride,Lactic Acid, Sodium Lactate, Serine, Urea, Sorbitol, Citrus Grandis (Grapefruit) Peel Oil, Citrus Limon (Lemon) Peel Oil, Lavandula Hybrida Oil, Pelargonium Graveolens Flower Oil, Citrus Nobilis (Mandarin Orange) Peel Oil, Juniperus Mexicana Oil, Adenosine, Allantoin, Pentylene Glycol, Caprylyl Glycol, Butylene Glycol, Caprylhydroxamic Acid, Disodium EDTA, Chlorphenesin, Phenoxyethanol.

DR. JART+ Cicapair™ Tiger Grass Re.Pair SerumWater, Glycerin, Propanediol, Butylene Glycol, Niacinamide, 1,2-Hexanediol, Dimethicone, Dimethicone/Vinyl Dimethicone Crosspolymer, Carbomer, Tromethamine, Artemisia Princeps Leaf Extract, Hydroxyacetophenone, Cyclopentasiloxane, Melia Azadirachta Leaf Extract, Cyclohexasiloxane, Ethylhexylglycerin, Glyceryl Polyacrylate, Octyldodecanol, Adenosine, Melia Azadirachta Flower Extract, Disodium EDTA, heobroma Cacao (Cocoa) Extract, Dextrin, Lavandula Angustifolia (Lavender) Oil, Polyglutamic Acid, Lecithin, Citrus Grandis (Grapefruit) Peel Oil, Phenoxyethanol, Rosmarinus Officinalis (Rosemary) Leaf Oil, Anthemis obilis Flower Oil, Madecassoside, Aniba Rosaeodora (Rosewood) Wood Oil, Centella Asiatica Leaf Water, Houttuynia Cordata Extract, Asiatic Acid, Asiaticoside, Alcohol, Madecassic Acid, Centella Asiatica Meristem Cell Culture, PEG-8, Caprylyl Glycol, PPG-1-PEG-9 Lauryl Glycol Ether, Helianthus Annuus (Sunflower) Seed Extract, Gentiana Lutea Root Extract, Achillea Millefolium Extract, Arnica Montana Flower Extract, Artemisia Absinthium Extract, Hedera Helix (Ivy) Leaf/Stem Extract, Sodium Glycerophosphate, Phytic Acid, Centella Asiatica Extract, Selaginella Lepidophylla Extract, Potassium Magnesium Aspartate, Citric Acid, Sodium Polyacrylate, Calcium Gluconate, Magnesium Gluconate, Potassium Sorbate, Xanthan Gum, Sodium Benzoate, Polysorbate 20.

SkinCeuticals Epidermal RepairWater, Dimethicone, Glycerin, Ethylhexyl Palmitate, Butylene Glycol, Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone, Pentaerythrityl Tetraethylhexanoate, C30-45 Alkyl Dimethicone, Isohexadecane, Dipropylene Glycol, PEG/PP-18/10 Dimethicone, Magnesium Slufate, Phenoxyethanol, Caprylyl Glycol, Dimethiconol, Sodium Benzoate, Centella Asiatica Extract, Sodium Carboxymethyl Beta-glucan, Citric Acid, Nymphaea Alba Extract/nymphae Alba Flower Extract, D165802/2.

Klairs Midnight Blue Calming CreamWater, Cetyl Ethylhexanoate, Butylene Glycol, Glycerin, Sodium Hyaluronate, Caprylic/Capric, Triglyceride, Centella Asiatica Extract, Sorbitan Stearate, Cetyl Alcohol, Butyrospermum Parkii (Shea Butter), Argania Spinosa Kernel Oil, Simmondsia Chinensis (Jojoba) Seed Oil, Sorbitan Sesquioleate, Glyceryl Stearate, Stearic Acid, Portulaca Oleracea Extract, Anthemis Nobilis Flower Extract, Ceramide 3, Polysorbate 60, Bees Wax, Chlorphenesin, Tocopheryl Acetate, Xanthan Gum, Acrylates/C10-30 Alkyl, Acrylate Crosspolymer, Morus Alba Root Extract, Triethanolamine, Brassica Oleracea Italica (Broccoli) Extract, Lavandula Angustifolia (Lavender) Oil, Eucalyptus Globulus Leaf Oil, Pelargonium Graveolens Flower Oil, Citrus Limon (Lemon) Peel Oil, Citrus Aurantium Dulcis (Orange) Peel Oil, Cananga Odorata Flower Oil, Guaiazulene, Acetyl Hexapeptide-8, Lecithin, Acetyl Glutamine, SH-Oligopeptide-1, SH-Oligopeptide-2, SH-Polypeptide-1, SH-Polypeptide-9, SH-Polypeptide-11, Bacillus/Soybean/Folic Acid Ferment Extract, Caprylyl Glycol, 1,2-Hexanediol.

Graymelin CENTELLA 50 REGENERATION NATURAL TONERCentella Asia Tica Extract, Butylene Glycol,Water,PEG/PPG-17/6 Copolymer,1,2-Hexanediol,Betaine, Sodium Hyaluronate,Beta-Glucan,Sodium Chondroitin Sulfate,Human Oligopeptide-1,Camellia Sinensis Leaf Extract, Alchemilla Vulgaris Leaf Extract, Vaccinium Macrocarpon (Cranberry) Fruit Extract, Aspalathus Linearis Extract, Melissa Officinalis Leaf Extract, Rosa Canina Fruit Extract, Vaccinium Angustifolium (Blueberry) Fruit Extract, Hibiscus Sabdariffa Flower Extract, Euterpe Oleracea Fruit Extract, Rosmarinus Officinalis (Rosemary) Extract, Caprylyl Glycol,Allantoin, Aloe Barbadensis Leaf Powder, Styrene/VP Copolymer, Carbomer, Triethanolamine, Adenosine, Dipotassium Glycyrrhizate,Chlorophyllin-Copper Complex

Пожалуй, на этом закончу, средств с центеллой много, на азиатском рынке дак почти в каждой марке есть.

Спасибо, что смотрели. Я — Лена.
Источники:
1, 2, 3, 4

Внимание на ингредиенты: Центелла Азиатская и Мадекассосид

Центелла Азиатская, популярная в корейском уходе, в Азии называют волшебным эликсиром жизни. Растение, так долго использовавшееся в традиционной китайской медицине, недавно снискало популярность в косметике из-за своей способности к заживлению ран и высокого содержания антиоксидантов.

Что такое Центелла Азиатская?

Центелла азиатская, также известная как Кика (Cica), Готу Кола (Gotu Kola) или тигровая трава, является многолетним растением, встречающимся в основном в тенистых и влажных районах Азии. Она вырастает до 15 см в высоту и также извесна как один из «чудодейственных эликсиров жизни» из-за своих целебных свойств.

Экстракт Центеллы азиатской является эффективным антивозрастным ингредиентом и чудотворным средством для сконной к акне коже.

Экстракт пользуется популярностью из-за своих антиоксидантных, антивозрастных и противовоспалительных свойств. Центелла является богатым источником аминокислот. Также она является хорошим увлажняющий ингредиентом — помогает восстановить уровень влаги и успокаивает кожу.

Активные составляющие центеллы азиатской

Итак, теперь мы знаем, что центелла — это растение с огромной лекарственной ценностью, но что придает этой маленькой травке свои исцеляющие, антибактериальные и противовоспалительные свойства?

Центелла содержит множество активных соединений, однако считается, что сапонины (основном азиатикозид , madecassoside, азиатиковая кислота и madecassic кислота) отвечают за широкие терапевтические действия этого растения.

Преимущества Centella Asiatica для кожи

Центелла азиатская улучшает увлажняющий барьер кожи

Это исследование показало, что использование 5% экстракта центеллы азиатской в ​​течение 4 недель улучшило гидратацию кожного влагозащитного барьера (рогового слоя) на 25%. Это происходит главным образом из-за молекулярной структуры сапонинов в Centella asiatica, которые способны связывать воду в окклюзионном слое, тем самым уменьшая количество трансэпидермальной потери воды.

Влияние центеллы на увлажнение кожи сравнимо с эффектом алоэ вера.

Центелла азиатская снижает чувствительность кожи к раздражителям

В том же исследовании, что и выше, также оценивались противовоспалительные свойства Centella asiatica. Было установлено, что центелла оказывает защитное действие на кожу, снижая ее чувствительность к раздражителям.

Кроме того, мадекассозиновая кислота помогает подавлять воспаление, ингибируя определенные ферменты, вызывающие раздражение и покраснение. Средства с мадекассозидом могут использоваться при псориазе.

Другими словами — если у вас чувствительная кожа, которая легко раздражается, продукт Centella может помочь успокоить её, одновременно уменьшая покраснение!

Антивозрастные преимущества центеллы азиатской

Если вышеуказанных преимуществ было недостаточно, было также доказано, что Centella asiatica увеличивает выработку коллагена и повышает упругость и эластичность кожи. Это делает ее мощным антивозрастным ингредиентом.

Это исследование показало, что соединение madecassoside (найденное в Centella asiatica) устраняет фотостарение кожи (например, солнечные пятна), значительно улучшая глубокие и поверхностные морщины, упругость, упругость, шероховатость и увлажнение кожи.

Согласно научным исследованиям, его активное соединение мадекассозид служит антиоксидантом. Это означает, что он помогает вашей коже восстановиться от повреждения клеток. В свою очередь, это уменьшает неблагоприятное воздействие старения на вашу кожу.

Центелла успокаивает восстанавливает чувствительную кожу

Центелла также является отличным ингредиентом для ухода за кожей, если у вас есть склонность к акне. Это связано с тем, что активные компоненты Centella asiatica ускоряют заживление ран и уменьшают воспаление, стимулируя выработку коллагена.

Многие корейские средства по уходу за кожей, предназначенные для склонной к акне кожи, содержат Centella asiatica — или одно из ее производных.

Это потому, что центелла помогает быстрее лечить прыщи, предотвращая образование шрамов от угревой сыпи.

Лучшая косметика с мадекассозидом и Центеллой азиатской

La Roche-Posay

Мадекассозид используется линейке средств Цикапласт La Roche-Posay Cicaplast для стимуляции восстановления кожи после повреждений и химических пилингов. В линейке можно найти бальзам для тела, гель, крем для рук и бальзам для тела.

Также в ассортименте марки есть такое интересное средство как стик Lipikar AP+. Очень удобно использовать в качестве палочки-выручалочки для очень сухой кожи, при обветривании, раздражениях.

Etude House Soon Jung pH 5.5 Relief Toner

Этот тонер содержит мадекассозид и пантенол, который обеспечивает глубокое увлажнение кожи в течение дня.

Средство содержит только один потенциально комедогенный ингредиент (бутиленгликоль) и не содержит потенциально раздражающих ингредиентов. Этот тонер, без сомнения, можно рекомендовать любой коже.

Etude House Soon Jung 5-Panthensoside Cica Balm

Бальзам, содержит пантенол и мадекассозид. Успокаивает, увлажняет и лечит поврежденную кожу. Etude House Soon Jung 5-Panthensoside Cica Balm подходит для всех типов кожи, особенно для чувствительной кожи.

COSRX Centella Blemish Ampule

Ампула, содержащая 80% воды из листьев Centella Asiatica, которая успокаивает раздражение и покраснение кожи, способствует увлажнению и выработке коллагена. Ампула COSRX Centella Blemish подходит для чувствительной и склонной к акне кожи.

COSRX Centella Blemish Cream

Крем для точечного лечения, созданный на основе Centella Asiatica, уменьшает и лечит акне. Успокаивает покраснения и раздражение на проблемных участках кожи, сохраняя ее увлажненной. COSRX Centella Blemish Cream подходит для всех типов кожи.

COSRX Clear Fit Blemish Cushion

Не является уходовым средством, но тем не менее содержит экстракт Centella Asiatica. Это многофункциональный кушон, обеспечивает отличное покрытие, помогая успокоить и исцелить склонную к акне кожу. COSRX Clear Fit Blemish Cushion подходит для всех типов кожи, особенно для чувствительной кожи.

A’Pieu Madecassoside

Нельзя обделить вниманием линейку средств Madecassoside от A’Pieu. В ней без преувеличения есть всё и на все случаи жизни.

Эта серия рекомендована для людей с чувствительным типом кожи, которая нуждается в защите и восстановлении. Тех, кто пытается справиться с болезненными воспалениями и постакне.

Frudia Avocado

Cерия на основе авокадо и мадекассосида. Идеальна для сухой и зрелой кожи. Обладает питательным действием, стимулирует процесс обновления кожи, защищает её от вредного воздействия окружающей среды. Благодаря свой плотной текстуре хоршо подойдет для использования в холодное время года.

Центелла быстро становится одним из самых популярных ингредиентов. Как в корейских, так и в европейских средствах по уходу за кожей — особенно тех, которые предназначены для чувствительной и склонной к акне кожи. Благодаря ее способности успокаивать воспаленную кожу.

Какие средства с Центеллой вы уже пробовали? Они помогли улучшить вашу кожу? Какой продукт, мы не упомянули в статье?

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Add to FavouritesAdd to Collection

Все о мадекассосиде… — ProfKrasa

Есть такое волшебное растение – Центелла азиатская, которую в Азии еще называют «Тигровая трава». Кто первым обнаружил ее лечебные свойства?
    Если тигр поранился, то они приходят в те места, где растет центелла и некоторое время трутся о нее, снимая боль и ускоряя заживление ран.

    На протяжении многих веков тигровая трава используется в качестве успокоительного и натурального заживляющего средства. Центелла хорошо помогает справится со стрессом и является успокаивающим лекарством. Очень часто ее применяют для подавления бессонницы.

    Центелла – мощный антиоксидант, великолепно защищающий от преждевременного старения, обладает благотворным влиянием на проблемную кожу. Поэтому экстракт центеллы в косметических средствах успешно применяется для лечения и профилактики кожных заболеваний.
    
    А мадекассосид — это чистый изолят центеллы, существенно высококонцентрированный активный компонент, полученный из экстракта центеллы азиатской. Доказано, что он способен снимать воспаления, заживлять кожу и омолаживать ее (активно противостоит появлению морщин и признаков старения). В нем содержится достаточное к-во кофеина, улучшающего процессы клеточного метаболизма, поэтому косметические средства можно успешно использовать для избавления от целлюлита, шрамов и растяжек. Очень богатым витаминным комплексом обусловлены антиоксидантные и спазмолитические эффекты.

Есть у нас классная маска от наших южнокорейских друзей с мадекассосидом:
https://profkrasa.com.ua/maska-s-madekassosidom/

Которая уже показала отличные результаты:

    # Омолаживающий — запускает синтез коллагена, улучшает обменные процессы, что позволяет сделать кожу упругой и подтянутой;
    # Увлажняющий – удерживает влагу в клетках кожи, нормализирует гидролипидный баланс, выводит токсины и способствует устранению отечности;
    # Противовоспалительный – разрушает оболочку бактерий, устраняет воспаления, имеет антисептическое действие. Эффективен при раздражениях, воспалениях;
    # Заживляющий – успокаивает кожу, способствует устранеию шрамов, рубцов и следов постакне;
    #Укрепляющий – укрепляет стенки сосудов, постепенно устраняя куперозную сетку;

ОЧЕНЬ ХОРОШИЕ результаты при использовании после ПИЛИНГОВ, СКРАБОВ, УКОЛОВ КРАСОТЫ. Существенно сокращается время восстановления кожи, ускоряется регенерация!

Центелла азиатская и мадекассоид для восстановления вашей кожи

Вы спросите: «Центелла азиатская? Какой ещё мадекассосид? О чем вы говорите?»

Наверное, ты думаешь, что мы издеваемся, но мы всего лишь хотим расскать тебе про очень популярный сейчас компонент в уходовой косметике, который сложно выговорить с первого раза . Всё про его свойства и откуда он берется.

 

ЧТО ТАКОЕ ЦЕНТЕЛЛА АЗИАТСКАЯ? 

Центелла азиатская  – это травянистое цветковое растение, которое распространено на Шри-Ланке, в Индии, Северной  Австралии, Индонезии, Иране, Майлайзии, Меланезии и Папуа — Новой Гвинее. Она растёт в основном во влажных низменных местах и вдоль канав.

Использование центеллы в китайской, малазийской и индийской медицине насчитывает уже более трех тысяч лет. У этого растения есть ещё несколько названий: Готу Кола и тигровая трава. Последнее она получила не просто так. Считается, что первыми полезные свойства центеллы были открыты азиатскими тиграми, а не людьми. Когда тигр был ранен, то он искал место, где растёт центелла азиатская, затем катался спиной по этой траве, а после этого ритуала его раны быстро заживали. 

 

ДЛЯ ЧЕГО ИСПОЛЬЗУЮТ ЦЕНТЕЛЛУ АЗИАТСКУЮ В КОСМЕТИКЕ? 

В прошлом году начало появляться всё больше и больше косметических средств, в составе которых находится этот чудесный компонент. Связано это с тем, что многие девушки узнали о сущестововании кислот и ретинола. А все знают, что кислотные пилинги и сыворотки могут сушить кожу, раздражать её и даже вызывать ожоги. Мы уже молчим про агрессивное действие средст с ретинолом. Центелла азиатская в этом случае – идеальный компоненты для заживления и восстановления кожи. Не зря же тигры перекатывались по местам с Готу Кола.

В составах она обозначается как: Centella Asiatica Extract, Tiger Grass, Asiatic acid. Для эффективной работы центеллы на коже достаточно использовать её  в концентарции 0,00002-0,5 %.

 

КАКОМУ ТИПУ КОЖИ ПОДОЙДЕТ СРЕДСТВА С ЦЕНТЕЛЛОЙ АЗИАТСКОЙ?

Вот он, ещё один большой плюс этого волшебного компонента. Ведь средства с содержаниям центеллы азиатской подходит для любого типа кожи. Жирной и проблемной она поможет заживить ранки от воспалений, окажет антибактериальное действие. Чувствительной, склонной к покраснениям и куперозу – поможет укрепить хрупкие сосуды и меньше реагировать на негативное воздействие окрущающей среды. А сухой – восстановить свои защитные функции.

 

ЧТО ТАКОЕ МАДЕКАССОСИД И КАК ОН СВЯЗАН С ЦЕНТЕЛЛОЙ АЗИАТСКОЙ?

Мадекассосид – это молекула, которая добывается из растения – центеллы азиатской.

Именно поэтому в составе он будет представлен как отдельный ингредиент: Madecassocide.

Мадекассосид является полностью безопасным и его аллергенность, канцерогенность на Cosmobase равны нулевому значению. Но, конечно же, все индивидуально, поэтому аллергическая реакция все равно возможна.

⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀

ПОЧЕМУ ЖЕ ВСЕ ТАК ЛЮБЯТ ЭТИ КОМПОНЕНТЫ?

Мадекассосид и центелла азиатская:

 стимулируют выработку коллагена, следовательно повышают упругость кожи;
 замечательные андиоксиданты, которые борются со свободными радикалами;
 обладают противовоспалительным и заживляющим эффектом, поэтому не будет лишним при воспалениях и пост-акне ;
 ослабляют действие ультрафиолета;
 помимо всего вышеперечисленного мадекассосид — обладатель липолитического свойства;
 способствуют регуляции кератиноцитов – главных клеток эпидермиса, благодаря чему кожа быстрее восстанавливается;
 а ещё они укрепляют сосуды и могут помочь от купероза.
⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀

У КАКИХ БРЕНДОВ НАЙТИ ЦЕНТЕЛЛУ АЗИАТСКУЮ И МАДЕКАССОСИД В СОСТАВЕ?


Многие бренды сейчас активно используют центеллу азиатскую и мадекассосид в своих линейках. Например, этот компонент можно найти у La-Roche Posay, Cosrx, Missha, Dr.Jart+.


⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀⠀
Особенно популярна линейка A’pieu с мадекассосидом, где представлено множество средств от пенки для умывания до пластырей от прыщей. Состав у средств очень классный: центелла, мадекассосид, ниацинамид, пантенол, молочная кислота и различные масла.  Многие блогеры хвалят эти банки, в том числе и наш главный редактор в своем блоге. Их смело можно брать любому типу кожи на зимний период. В составе есть силиконы, но это вообще не проблема, так как они, наоборот, защитят вашк кожу от потери влаги и от холода на улице. Увлажняет крем на ура, придаёт сияние и хорошо снимает покраснения.

 

Фото: @grashchenkovaa

Чем он отличается от центеллы и зачем он вам

Возможно, вы видели их в списке ингредиентов вашего любимого успокаивающего или уменьшающего покраснение продукта. Но что именно такое мадекассозид, мадекассовая кислота, азиатикозид и азиатская кислота? Оказывается, они связаны с нынешней любимой звездой ухода за кожей, центеллой. Вот что нужно знать.

Можно с уверенностью сказать, что многие из нас потратили последние год или два, натирая лицо множеством растений. Центелла азиатская превратилась из горячих новых ингредиентов в то, что я считаю «основным продуктом», во многом подобно меду / прополису и продуктам на основе улиток.Не похоже, чтобы любовь к традиционным лекарственным растениям ослабевала, и полынь тоже стала заметной. Мне нравится видеть, как многие люди обожают эти традиционные ингредиенты из-за их великолепных результатов; это напоминает мне мое детство в Корее, пищу, которую я ел, с некоторыми из тех же растений, и я думаю, действительно удивительно, как Корея, кажется, продолжает предлагать инновации во многих отношениях, несмотря на то, что она такая маленькая страна.

При этом я понятия не имел, что такое мадекассозид, когда впервые увидел его в списке ингредиентов, и когда я начал видеть азиатикозид вместе с мадекассовой кислотой и азиатской кислотой, я был так же сбит с толку, насколько я уверен. многие из вас могут быть там.Я знал, что это связано с успокаивающими свойствами растительного происхождения, которых я хотел в своей повседневной жизни, но я думал, что мадекассозид — это другое растение, о котором я не слышал, и эти другие компоненты были новыми ингредиентами. Я был совершенно неправ, и я хочу поделиться тем, что я узнал, лихорадочно читая стопку научных исследований.

Большой отказ от ответственности: я не врач, у меня нет степени по химии или какой-либо области, связанной с этим типом исследований.Пожалуйста, отнеситесь к тому, что я хочу сказать, с недоверием. Или несколько зерен на всякий случай. Наденьте свои ботанические очки и отправляйтесь в путешествие со мной, друзья.

Что такое мадекассозид и ему подобные

Как оказалось, мадекассозид, мадекассовая кислота, азиатикозид и азиатская кислота являются компонентами растения Centella asiatica . Их называют «тритерпеноидами», и в данном случае они являются компонентами, отвечающими за все полезные свойства центеллы для кожи.Теперь, если вы идете по тому же пути, что и я, вы, возможно, задаете тот же вопрос, что и я: если они все компоненты Centella asiatica , то почему бы мне просто не использовать продукт центеллы и называть его день?

Как и любой овощ или фрукт, который мы можем есть, Centella asiatica может сильно различаться в зависимости от климата и места, в котором она растет, что может означать присутствие каждого из этих четырех компонентов в разном количестве.Центелла в целом, по-видимому, имеет более низкие уровни азиатской кислоты и мадекассовой кислоты; изоляция этих компонентов позволяет нам по-прежнему получать от них пользу, но дает разработчикам рецептур и производителям немного больше контроля над содержанием, содержащимся в данном продукте.

Что делает madecassoside et al. делать?

В целом, эта небольшая команда тритерпеноидов (я продолжаю изображать Мстителей, но растения) работают вместе, чтобы способствовать синтезу коллагена, а также могут стимулировать кровообращение в вашей коже, что потенциально может способствовать эффекту похудения, заставляя все казаться просто еще немного поднял.Не похоже на подтяжку лица или подтяжку лица, но кажется, что это определенно может помочь в этом отношении.

Они также продемонстрировали сильные антиоксидантные способности в одном исследовании, немного отставая от витамина С (эффективность около 85% по сравнению с L-аскорбиновой кислотой), что в сочетании с вышеупомянутым стимулированием синтеза коллагена заставило меня думать об этой небольшой группе ингредиентов как о менее значимой. привередливый витамин С. Подобная способность стимулировать коллаген и обеспечивать антиоксиданты, которые помогают усилить УФ-фильтры, не беспокоясь об окислении? Я продана.

Разница между мадекассозидом и остальными

Исследование, которое я обнаружил, показало, что эти компоненты действительно имеют свои собственные индивидуальные эффекты, поэтому в зависимости от того, чего вы хотите от своего продукта, вы можете сосредоточиться на том, чтобы один компонент был более распространенным или на котором был сосредоточен в формуле, чем другие. . Вот подноготная.

Мадекассосид

Текстура и тон — вот в чем суть игры, поскольку существует потенциал для предотвращения гиперпигментации и гипертрофических рубцов, которые представляют собой любую рельефную текстуру на коже.

Мадекассовая кислота

Это компонент, наиболее отвечающий за успокаивающие свойства, о которых многие из нас в первую очередь думают, когда речь идет о продуктах из центеллы. Уменьшение раздражения, а также подавление воспаления поможет успокоить вашу кожу и, следовательно, уменьшить покраснение, с которым, я думаю, все мы в определенной степени справляемся.

Азиатикозид

Витамин С набирает обороты во многом благодаря этому члену команды, который продемонстрировал наибольший потенциал в отношении антиоксидантных способностей, а также имеет научно значимый уровень антибактериальной и фунгицидной активности, что означает, что он поможет в борется с высыпаниями, а также защищает кожу от раздражения и стресса, особенно в сочетании с солнцезащитным кремом.

Кислота азиатская

Этому последнему члену экипажа больше всего приписывают стимуляцию клеток фибробластов и синтез коллагена. Это не только способствует антивозрастному потенциалу, но и помогает заживлению ран. Лечение высыпаний и стимулирование образования новых клеток кожи — это универсальный инструмент для людей, которые хотят замедлить преждевременное старение и ускорить заживление прыщей.

Честно говоря, выполнение этой работы заставило меня еще сильнее увлечься зеленью, и после того, как она, похоже, помогла моему партнеру бороться с дерматитом, я не мог больше продаваться.

Используете ли вы центеллу или мадекассозид и др.? в твоей рутине? Если вам нужны предложения, @sheryll сделал потрясающий обзор центеллы и дал несколько отличных рекомендаций по продукту, если вам нужно с чего начать.

Узнайте о преимуществах мадекассозида в уходе за кожей

Отправлено: 9 июня 2008 г.

Мадекассозид — это активный ингредиент для ухода за кожей, полученный из растения центелла азиатская (часто называемая ее псевдонимами азиатский пеннивор и готу кола).Центелла азиатская, или чаще центелла, — это лекарственное растение, которое уже более 2000 лет используется в Индии и в аюрведической медицине. Он использовался многими культурами из-за его лечебных свойств при заживлении ран и противовоспалительных свойств, которые он дает. Его съедобные листья использовались для лечения кашля и синусита, улучшения памяти и лечения заболеваний печени.

В последние годы экстракт центеллы азиатской все чаще включается в составы для ухода за кожей благодаря своим богатым антиоксидантами свойствам и способности ускорять заживление за счет ускорения образования клеток кожи.Хотя экстракт центеллы азиатской также богат аминокислотами и бета-каротином, именно два его компонента делают его востребованным ингредиентом: азиатикозид и мадекассозид.

Ранозаживляющий азиатикозид — это тритерпенин, класс химических соединений, вырабатываемых растениями как часть их механизма самозащиты. Считается, что азиатикозид способствует выработке коллагена I типа, одного из основных компонентов кожи, который помогает коже сохранять пухлый и молодой вид.Вот вам откровение: исследование 2011 года, опубликованное в журнале Chemistry Molecules, показало, что экстракт центеллы стимулирует синтез коллагена значительно лучше, чем даже витамин С, один из наших любимых и самых надежных героев ухода за кожей.

Что делает Мадекассозид?

Мадекассозид, также классифицируемый как тритерпенин, стимулирует выработку коллагена III типа. В то время как азиатикозид способствует заживлению ран, мадекассозид выделяется из упаковки своими противовоспалительными свойствами, что делает его популярным ингредиентом для кожи, склонной к акне.В исследованиях мадекассозид продемонстрировал заживляющие, а также антивозрастные свойства кожи. Считается, что это работает несколькими способами, в том числе:

  • Контроль воспламенения
  • Стимулирует синтез коллагена I и III, неотъемлемых компонентов кожи.
  • Снижение активности ММП — матричных металлопротеинов — или ферментов, которые играют роль в разрушении матрикса или каркаса кожи.

Мадекассозид продемонстрировал некоторые преимущества при лечении псориаза, скорее всего, благодаря своим противовоспалительным свойствам.

Где это найти?

Если вас заинтриговал этот ингредиент и вы хотите ощутить его преимущества, вы можете найти его в следующих продуктах в нашем магазине:

Магия Мадекассозида | Руководство по ингредиентам для ухода за кожей — Обновить Уход за кожей

Мадекассозид — популярный ингредиент для ухода за кожей на растительной основе, получаемый из листьев растения Центелла азиатская . Центелла использовалась более 2000 лет в Индии и за ее пределами и известна своими целебными и успокаивающими свойствами.Он также известен как тигровая трава, так как легенда гласит, что тигры катаются в траве, чтобы залечить свои раны. Ингредиенты мадекассозид, мадакасовая кислота, азиатская кислота и азиатикозид получены из одного и того же растения центеллы азиатской. Как уже известно тиграм, основные эффекты мадекассозида заключаются в уменьшении воспаления и заживлении кожи. Это поможет уменьшить покраснение, зуд и болезненность. Это также полезно для заживления шрамов от прыщей. Состав стимулирует выработку коллагена, который укрепляет кожу и уменьшает появление тонких линий, морщин и повреждений от солнца.В результате кожа выглядит более гладкой. Он богат аминокислотами и обладает антиоксидантными свойствами, которые снижают активность матричных металлопротеинов (ММП), которые играют роль в разрушении структуры кожи. Это помогает успокоить и уменьшить воспаление. Сочетание успокаивающих, противовоспалительных и заживляющих свойств делает мадекассозид популярным ингредиентом для лечения прыщей. Ускоряя производство клеток кожи, этот ингредиент способствует заживлению ран и повреждению кожи. Быстрый и легкий способ ощутить разглаживающие свойства мадекассозида — это маска для клиники Innisfree Skin Clinic Mask. Маска для лица доставляет ингредиенты прямо на кожу, обеспечивая успокаивающий импульс для выработки коллагена. Чтобы сфокусироваться на заживлении шрамов и уменьшении покраснения и зуда, попробуйте крем Missha Nearskin Madecanol. Создан для бережного восстановления чувствительной и поврежденной кожи с минимальным раздражением. Чтобы укрепить и освежить кожу за ночь, попробуйте спящую маску Laneige Cica Sleeping Mask.Он специально разработан для ухода за чувствительной кожей, заживления и успокаивания кожи, а также для того, чтобы вы просыпались отдохнувшими. Гелевая консистенция этой концентрированной формулы означает, что активный ингредиент может действовать быстрее и работать дольше. Используйте гель A’Pieu Madecassoside Cica Gel для воздействия на определенные проблемные участки кожи.

Сэкономьте 10% на вашем первом заказе от Refresh Skincare, подписавшись на нашу рассылку, и будьте первым, кто узнает о новых продуктах и ​​специальных предложениях.

Добились ли вы хороших результатов с Мадекассозидом? Поделитесь своим опытом в комментариях ниже.


Назад к Руководству по ингредиентам для ухода за кожей

Используйте стрелки влево / вправо для навигации по слайд-шоу или проведите пальцем влево / вправо при использовании мобильного устройства

МАДЕКАССОСИД | SEPPIC

МАДЕКАССОСИД — активный ингредиент, обладающий эффектом против покраснения и образования накипи.Придает коже ощущение гладкости. Это также уменьшает зуд кожи.

Этот продукт является частью нашего предложения.

Недвижимость

INCI: Мадекассосид

МАДЕКАССОСИД — это умное, мощное и высокоочищенное активное вещество, одна из самых известных молекул, обнаруженных в Центеллы азиатской , хорошо известной своими полезными свойствами для кожи.

Обладая доказанной эффективностью и определенным механизмом действия, Мадекассозид приносит облегчение чувствительной или склонной к атопии и псориазу коже благодаря эффекту против зуда, покраснения, шелушения и разглаживания.

Характеристики

Растворимость: водорастворимый
Форма: порошок
Уровень использования: от 0,2 до 0,5%
Без консервантов
Природа: ≥ 95%
Соответствует требованиям Китая

-25,7%

Уменьшение эритемы

-43.5%

Уменьшение площади десквамации

Хотите образец этого ингредиента?

Запрос Предыдущий продукт
LUMIPOD ™

Умный активатор меланина для безопасного загара

Обнаружить Следующий продукт
MONTANE ™ 481 VG

Твердый липофильный неионный эмульгатор на биологической основе

Обнаружить

Мадекассозид подавляет синтез меланина, блокируя воспаление, индуцированное ультрафиолетом

Abstract

Мадекассозид (MA), пентациклический тритерпен, выделенный из Centella asitica (L.), используется как терапевтическое средство при заживлении ран, а также как противовоспалительное и антивозрастное средство. Однако об участии МА в пигментации кожи не сообщалось. Это исследование было проведено для изучения влияния МА на меланогенез, индуцированный ультрафиолетом (УФ), и механизмы в системе совместного культивирования кератиноцитов и меланоцитов. МА значительно ингибировала индуцированный ультрафиолетовым излучением синтез меланина и перенос меланосом в системе совместного культивирования. Эти эффекты были дополнительно продемонстрированы МА-индуцированным ингибированием экспрессии активированного протеазой рецептора-2 и его сигнального пути, циклооксигеназы-2, простагландина E2 и простагландина F2 альфа в кератиноцитах.Клиническая эффективность МА подтверждена на искусственно загорелой коже человека. МА значительно снизила УФ-индуцированный индекс меланина через 8 недель после местного применения. В целом, исследование продемонстрировало значительные преимущества использования МА в подавлении гиперпигментации, вызванной УФ-облучением.

Ключевые слова: поствоспалительная пигментация, мадекассозид, PAR-2, UVR

1. Введение

У млекопитающих пигментация является результатом синтеза и распределения меланина в коже, волосяных луковицах и глазах.Гиперпигментация — распространенная и тревожная проблема, вызванная различными воспалительными кожными заболеваниями, такими как экзема, аллергический контактный дерматит и раздражающий контактный дерматит [1,2]. Ультрафиолетовое (УФ) излучение косвенно влияет на меланогенез меланоцитов через процесс паракринной регуляции с участием кератиноцитов. УФ-излучение стимулировало секрецию фактора стволовых клеток (SCF), α-меланоцит-стимулирующего гормона (α-MSH), эндотелина (ET-1) и адренокортикотропного меланоцитарно-стимулирующего гормона (ACTH) из кератиноцитов и индуцирует меланогенез меланоцитов [1].Кроме того, простагландин (PG) является промежуточным продуктом передачи липидов, продуцируемым циклооксигенацией арахидоновой кислоты под действием ферментов циклооксигеназы (COX) и ферментов простагландин E2 (PGE 2 ) синтазы. В эпидермисе PGE 2 и простагландин F2α (PGF 2 α) являются основными PG, продуцируемыми кератиноцитами в ответ на УФ-облучение. В нескольких сообщениях было высказано предположение, что PGs опосредуют поствоспалительные пигментные изменения, модулируя синтез меланина и дендричность меланоцитов [3,4,5].Рецептор, активируемый протеазой (PAR) -2, является членом нового семейства семи трансмембранных рецепторов, связанных с G-белком. В эпидермисе PAR-2 ​​экспрессируется в кератиноцитах [6], но не в меланоцитах [7]. Установлена ​​центральная роль PAR-2 ​​в поглощении кератиноцитами меланосом [8,9]. PAR-2 ​​был связан с активацией COX-2 и высвобождением арахидоновой кислоты и секрецией PGE 2 и PGF 2 α [10,11]. В нескольких сообщениях было высказано предположение, что PAR-2 ​​опосредует пигментацию кожи за счет увеличения поглощения меланосом кератиноцитами и высвобождения PGE 2 и PGF 2 α, которые стимулируют дендричность меланоцитов [12].

Мадекассозид (MA, a), один из основных тритерпеновых гликозидов, выделенных из Centella asiatica , имеет различные эффекты, включая заживление ран [13], противовоспалительное [14] и антивозрастное действие [15,16], а также защитные эффекты от окислительного стресса и УФ-В излучения [17,18]. Противовоспалительная активность обусловлена ​​ингибированием продукции ЦОГ-2 и PG [19,20]. Однако до сих пор не сообщалось об участии МА в пигментации кожи. В этом исследовании мы изучили влияние МА на меланогенез, вызванное УФ-излучением, и его механизмы действия в системе совместного культивирования кератиноцитов и меланоцитов.

( а ) Химическая структура МА. ( b ) Меланоциты и кератиноциты HaCaT совместно культивировали в системе вставок для подвешенных культур клеток в присутствии или в отсутствие УФ-В-излучения (20 мДж / см 2 ) с использованием 12-луночных вкладышей для подвешенных культур клеток Millicell. После облучения клеток HaCaT в верхней камере УФ-В, МА добавляли до указанной концентрации и затем помещали над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина.Представленные данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3. o p <0,05 по сравнению с необработанным контролем UVB; * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

2. Результаты и обсуждение

2.1. Влияние МА на вызванный УФ-излучением меланогенез в совместных культурах кератиноцитов / меланоцитов

Чтобы определить, снижает ли МА синтез меланина, индуцированный УФ-В, в системе совместного культивирования кератиноцитов / меланоцитов, во время совместного культивирования измеряли содержание меланина.После облучения кератиноцитов HaCaT в верхней камере УФ-В, МА добавляли до указанной концентрации и помещали над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина. Как показано на b, содержание меланина в меланоцитах при совместном культивировании с облученными УФB кератиноцитами HaCaT было увеличено по сравнению с совместным культивированием с необлученными кератиноцитами HaCaT. МА значительно снизила содержание меланина в облученных УФ-В, совместно культивируемых кератиноцитах / меланоцитах, тогда как МА не показала какого-либо значительного влияния на синтез меланина в необлученных, совместно культивированных кератиноцитах / меланоцитах.Кроме того, МА не показала каких-либо значительных эффектов на синтез меланина в модели одиночного меланоцита (дополнительные данные). Эти результаты предполагают, что МА ингибирует синтез меланина, блокируя меланогенный стимулятор, высвобождаемый кератиноцитами при облучении УФ-В. Результаты были подтверждены повторением экспериментов три раза, каждый из которых проводился в двух экземплярах на меланоцитах, полученных от одного и того же донора.

2.2. Влияние МА на PGE

2 и PGF 2 α Продукция в кератиноцитах

PGE 2 и PGF 2 α, которые являются основными PG, продуцируемыми кератиноцитами в ответ на УФ-облучение, опосредуют поствоспалительную пигментацию путем модуляции синтез меланина и дендричность меланоцитов.Поэтому мы оценили МА, чтобы определить его участие в продукции PGE 2 и PGF 2 α в кератиноцитах, облученных УФ-В. УФ-В излучение заметно активировало PGE 2 и PGF 2 α. Повышенная регуляция продукции подавлялась обработкой МА (). Эти результаты предполагают, что МА ингибирует пигментацию, вызванную УФ-В, путем подавления продукции PGE 2 и PGF 2 α в кератиноцитах.

Уровни липидных медиаторов воспаления ( a ) PGE 2 , ( b ) PGF 2 α.Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3. * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

2.3. Влияние МА на экспрессию ЦОГ-2 и PAR-2 ​​в кератиноцитах

Воздействие на кератиноциты УФ-излучения индуцирует экспрессию ЦОГ-2 и увеличивает синтез PG. В свою очередь, ЦОГ-2 катализирует образование провоспалительных простагландинов (например, PGE 2 ) из арахидоновой кислоты [21]. PAR-2 ​​был связан с активацией COX-2.Мы исследовали, может ли МА в кератиноцитах ослабить вызванное УФВ увеличение экспрессии ЦОГ-2 и PAR-2. UVB-индуцированная экспрессия COX-2 и PAR-2 ​​ингибировалась МА, что позволяет предположить, что МА оказывает противовоспалительное действие на кератиноциты (2).

Влияние МА на экспрессию COX-2 и PAR-2 ​​в кератиноцитах. Белки экстрагировали из цельноклеточных лизатов кератиноцитов HaCaT. β-актин использовали в качестве регулятора нагрузки. Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3; * р <0.05 против УФ-облученного контроля; МА: Мадекассозид.

2.4. Влияние МА на фогоцитоз

PAR-2 ​​имеет решающее значение для поглощения кератиноцитами меланосом. Активация PAR-2 ​​с помощью Ser-Leu-Ile-Gly-Arg-Leu-NH (2) (SLIGRL), известного активирующего пептида PAR-2, индуцирует фагоцитоз кератиноцитов и увеличивает пигментацию кожи, что указывает на то, что PAR-2 ​​регулирует пигментацию путем контроль фагоцитоза меланосом. Чтобы оценить влияние МА на PAR-2-опосредованный фагоцитоз кератиноцитов, кератиноциты HaCaT стимулировали SLIGRL (10 мкМ), а затем инкубировали с флуоресцентно мечеными микросферами (диаметром 1 мкм).SLIGRL увеличивал фагоцитарный ответ (а), но этот эффект был значительно ослаблен МА. Для дальнейшего выяснения эффектов МА на УФ-В-опосредованный фагоцитоз кератиноциты HaCaT обрабатывали только УФ-В излучением или МА, а затем инкубировали с флуоресцентно меченными микросферами. В соответствии с его влиянием на фагоцитоз в SLIGRL, обработка МА уменьшала количество микросфер, индуцированных УФ-излучением (а). Эти результаты показывают, что МА может ингибировать фагоцитоз, вызванный УФ-В, путем блокирования PAR-2.

Влияние МА на фагоцитоз меланосом. ( a ) Анализ фагоцитоза на основе микросфер. o p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; * p <0,05 по сравнению с контролем, обработанным SLIGRL. ( b ) Иммунофлуоресцентный анализ с системой совместного культивирования меланоцитов и кератиноцитов MEL-5. Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3; * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

Кроме того, мы использовали систему совместного культивирования in vitro меланоцитов и кератиноцитов для изучения участия МА в распределении меланосом и дендритогенезе меланоцитов Совместные культуры кератиноцитов / меланоцитов обрабатывали только УФ-В-излучением или с МА. . Для идентификации меланосом мы использовали антитело против MEL-5, которое распознает pg75, экспрессируемый в меланосомах. Кератиноциты окрашивали цитокератином, а ядра окрашивали Hoechst, соответственно.Как показано на b, интенсивность флуоресценции MEL-5 в меланоцитах, обработанных МА, по-видимому, уменьшалась по сравнению с контролем, облученным УФ-В. УФ-В-излучение стимулировало дендритогенез в меланоцитах, тогда как обработка МА подавляла эти морфологические изменения, как было определено с помощью флуоресцентной микроскопии (b). UVB-облучение кератиноцитов стимулирует высвобождение PGE 2 и PGF 2 α, которые действуют как паракринный фактор для стимуляции синтеза меланина и образования дендритов меланоцитов [5]. Эти результаты предполагают, что МА может ингибировать вызванное УФ-В увеличение меланосом и дендритогенез, блокируя высвобождение PGE 2 и PGF 2 α из кератиноцитов.

2,5. Влияние МА на меланогенез в реконструированном эпидермисе

В нескольких исследованиях сообщалось, что УФ-В излучение усиливает пигментацию кожи за счет активации PAR-2 ​​[9,22]. Меланодерма, реконструированный эпидермис, содержащий функциональные меланоциты, использовалась для выяснения влияния МА на пигментацию кожи. SLIGRL (10 мкМ) индуцировал увеличение содержания меланина в реконструированном эпидермисе по сравнению с культурами, выращенными без стимуляции SLIGRL после 14 дней культивирования. Кроме того, УФ-В излучение (100 мДж / см 2 ) вызывало увеличение содержания меланина.Синтез меланина, индуцированный SLIGRL, подавлялся обработкой МА. Более того, синтез меланина, индуцированный УФ-В излучением, был значительно подавлен обработкой МА ().

Влияние МА на реконструированный эпидермис. Применение МА уменьшало пигментацию меланина, вызванную УФ-излучением и SLIGRL, в реконструированном эпидермисе. Гистологические срезы после окрашивания по Фонтана-Массону.

2.6. Влияние МА на танин, индуцированный УФ-В

Отбеливающий эффект МА был также оценен in vivo с использованием искусственно загорелой кожи.Двадцать три здоровых субъекта (средний возраст: 40,35 ± 5,43 года) с типом кожи III по Фитцпатрику (иногда легкий ожог, примерно средний загар) и типом IV (редко ожоги, легко загорают более чем в среднем), которые не имели в анамнезе аллергенного контактного дерматита. в этом исследовании. Исследователь полностью объяснил цель и процедуры исследования, график, компенсацию и ожидаемые побочные реакции или побочные эффекты. Искусственный загар индуцировали на двух участках предплечья всех зачисленных субъектов с помощью УФ-излучения с использованием многопортового УФ-солнечного симулятора (Solar Light Co., Гленсайд, Пенсильвания, США) при воздействии 2 минимальных доз эритемы (MED). Тестовый материал и плацебо случайным образом распределяли по двум загорелым участкам. Испытуемые наносили исследуемый материал и плацебо два раза в день (один раз утром и один раз вечером) на загорелые участки в течение 8 недель. Все субъекты были обследованы до лечения и через 2, 4, 6 и 8 недель после лечения. Индекс меланина определяли с использованием Mexameter® MX18 (C + K, Кельн, Германия). По сравнению с контрольной группой МА значительно снижала УФ-индуцированный индекс меланина через 8 недель после местного применения ().

Влияние МА на искусственно загорелую кожу человека in vivo . Анализ показателя меланина по узкополосному спектральному коэффициенту отражения света. По сравнению с группой A (контроль, продолжение), индекс меланина был значительно снижен в группе B (MA, тест) через 8 недель ( p <0,05).

3. Экспериментальная

3.1. Материалы

.

Мадекассозид был приобретен у Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Калифорния, США). Моноклональные антитела к СОХ-2 и PAR-2 ​​были приобретены в Cell Signaling Technology (Беверли, Массачусетс, США).Антитело Mel-5 было приобретено в SIGNET (Эмеривилл, Калифорния, США). SLIGRL был приобретен у Peptron (Сеул, Корея). Флуоресцентные микросферы, модифицированные карбоксилатом FluoSpheres®, были приобретены у Invitrogen (Карлсбад, Калифорния, США). Реконструированный эпидермис человека был приобретен у MatTek (Ашленд, Массачусетс, США).

3.2. Клетки и культура клеток

Культивируемые нормальные клетки эпидермальных меланоцитов человека, полученные от Cascade Biologics (Портленд, Орегон, США), поддерживали в среде 154 (Cascade Biologicals) с добавлением 0.2% об. / Об. Экстракта гипофиза крупного рогатого скота, 0,5% об. / Об. Фетальной бычьей сыворотки, 5 мкг / мл бычьего инсулина, 5 мкг / мл бычьего трансферрина, 3 нг / мл основного фактора роста фибробластов, 0,18 мкг / мл гидрокортизона, 3 мкг / мл. мл гепарина и 10 нг / мл форбола 12-миристата 13-ацетата при 37 ° C в увлажненной атмосфере, содержащей 95% воздуха / 5% CO 2 . Клеточная линия кератиноцитов человека HaCaT была получена от CLS (Eppelheim, Германия) и поддерживалась в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% антибиотиков.

3.3. УФ-облучение

Для воздействия УФ-В, когда клетки были конфлюэнтными на 70%, среду удаляли, клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и осторожно покрывали DMEM, не содержащей фенолового красного (Biowhittaker, Lonza, Switzerland). Облучение УФВ проводили в среде DMEM без фенолового красного с использованием прибора Вилбера-Лурма со спектром излучения 280–370 нм и пиком при 312 нм. Дозу УФ-излучения измеряли с помощью УФ-измерителя УФ-излучения модели UV-340 (Lutron, Coopersburg, PA, USA).

3.4. Совместное культивирование

Меланоцитов и кератиноцитов HaCaT совместно культивировали с небольшой модификацией ранее описанных ранее методов [23,24]. Для условий совместного культивирования меланоциты культивировали (1 × 10 5 клеток / лунку) в 12-луночном планшете. Кератиноциты HaCaT (5 × 10 4 ) высевали в 12-луночные вкладыши для культуры подвешенных клеток Millicell (Millipore, Billerica, MA, USA) с пористой мембраной 5 мкм, разделяющей верхнюю и нижнюю камеры. Культуральная среда, используемая до создания совместной культуры, представляла собой вышеупомянутую стандартную среду для роста для двух типов клеток.Через 24 часа кератиноциты HaCaT во вставках для подвешивания облучали указанными дозами УФВ, а затем заменяли средой для совместного культивирования, содержащей указанную концентрацию МА во вставках над меланоцитами. После инициации совместных культур среду верхней и нижней камеры заменяли на бессывороточную среду для роста кератиноцитов (SF-KGM) с добавкой для роста кератиноцитов (KGS; Invitrogen).

3.5. Анализ меланина

Меланоциты и кератиноциты HaCaT совместно культивировали в контактной системе в присутствии или в отсутствие УФ-В-излучения (20 мДж / см 2 ) с использованием 12-луночных вкладышей для культуры подвешенных клеток Millicell.После того, как кератиноциты HaCaT в верхней камере были облучены УФВ, МА был добавлен до указанной концентрации над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина. Анализ выполняли, как описано ранее [25]. Вкратце, осадки клеток солюбилизировали в 1 н. NaOH (60 ° C) в течение 1 часа. Цвет анализировали в спектре 475 нм. Содержание меланина определяли по поглощению / мкг белка в клеточном экстракте.

3.6. Липидный медиатор для анализа воспаления

Кератиноцитов HaCaT облучали указанными дозами УФВ и инкубировали с указанной концентрацией мадекассозида в течение 24 часов.Концентрации PGE 2 и PGF 2 α в культуральном супернатанте измеряли с использованием наборов для ELISA (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США) в соответствии с инструкциями производителя.

3,7. Вестерн-блот-анализ

Вестерн-блот-анализ проводили путем разделения клеточных лизатов с помощью 10% SDS-PAGE. Гели подвергали блоттингу в течение ночи на мембранах из поливинилидендифторида, после чего они подвергались действию соответствующих антител (анти-COX2, анти-PAR-2). Затем белки визуализировали с использованием усиленной хемилюминесценции, системы вестерн-блоттинга ECL (Amersham Biosciences, Пискатауэй, Нью-Джерси, США) с конъюгированными с пероксидазой хрена анти-кроличьими или антимышиными антителами в качестве вторичных антител.Результаты были подтверждены тремя независимыми экспериментами.

3.8. Анализ фагоцитоза

Анализ фагоцитоза на основе микросфер Кератиноциты HaCaT высевали в 24-луночные планшеты, инкубировали в течение ночи при 37 ° C и обрабатывали SLIGRL (10 мкМ) или облучали УФB (20 мДж / см 2 ) в присутствии или отсутствие МА. Через 24 часа клетки голодали по сыворотке в течение 6 часов. Желто-зеленые флуоресцентные микросферы FluoSpheres ® , модифицированные карбоксилатом (диаметр 1 мкм; Invitrogen), получали за 24 часа до использования в соответствии с инструкциями производителя.Клетки инкубировали с микросферами (100 на ячейку) при 37 ° C в течение 4 часов. Микросферы аспирировали и клетки инкубировали с 1 мл FBS при 37 ° C в течение 15 минут. После тщательной промывки были сделаны изображения проглоченных шариков. Каждый эксперимент проводился в двух экземплярах и повторялся не менее трех раз.

3.9. Иммунофлуоресцентное окрашивание

Меланоцитов и кератиноцитов HaCaT субкультивировали на покрытые витрогеном 8-луночные предметные стекла (Nalge Nunc International, Naperville, IL, USA) и поддерживали в смеси 1: 1 культуральной среды меланоцитов (Medium 154s) и культуры клеток HaCaT. среда (DMEM, содержащая 10% FBS).Затем монослои клеток фиксировали в 2,5% глутаральдегиде и 2% параформальдегиде в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,4), после чего их пермеабилизировали 0,1% Тритоном-X-100 в стабилизирующем буфере (PBS, 100 мМ MgCl 2 , 1 мМ CaCl 2 ) в течение 10 мин. Затем неспецифическое связывание антител блокировали путем инкубации слайдов в 10% нормальной козьей сыворотке. Затем применяли первичные антитела в течение ночи при 4 ° C с последующей инкубацией с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с флуоресцеином, в течение 2 часов при комнатной температуре.Hoechst 33342 (Invitrogen) использовали для окрашивания ядер. Изображения были сняты цифровой камерой Spot и обработаны с помощью программы Olympus DP Manager (Olympus, Токио, Япония).

3.10. Гистохимия реконструированного эпидермиса

Реконструированный эпидермис человека (MatTek, Ашленд, Массачусетс, США) состоял из нормальных эпидермальных кератиноцитов человека и нормальных эпидермальных меланоцитов человека, которые были культивированы для образования многослойной высокодифференцированной модели. Реконструированный эпидермис инкубировали в среде, содержащей 50 мкМ МА, в течение 2 недель.Химическое вещество было добавлено в нижнюю лунку реконструированной системы эпидермиса, а затем проникло через мембрану и достигло базальных клеток. Среду, содержащую МА, заменяли через день. Затем эпидермис фиксировали 4% формалином в PBS с последующим окрашиванием по Фонтана-Массону для визуализации пигментов меланина. Изображения были проанализированы с помощью Image-Pro Plus версии 4.1.

3.11. Клиническое исследование МА на коже, вызванной УФ-загаром

Двадцать три здоровых субъекта (средний возраст: 40.35 ± 5,43 года) с типом кожи III по Фитцпатрику (иногда легкий ожог, загар примерно средний) или IV (ожог редко, загар больше среднего). Тип кожи по Фитцпатрику классифицирует реакцию кожи на УФ-излучение. МЭД определяется как наименьший временной интервал или доза УФ-излучения, достаточная для образования минимальной ощутимой эритемы на незащищенной коже и необходимая для рационального лечения УФ-светом, вызывающего искусственную пигментацию. Для определения МЭД каждого субъекта каждое предплечье облучали лестницей тестовых доз 16–48 мДж / см 2 с использованием многопортового УФ-солнечного симулятора (Solar Light Co., Гленсайд, Пенсильвания, США). МЭД и индекс эритемы считывали через 24 часа. После определения МЭД каждого субъекта искусственный загар вызывали в двух местах на предплечье с помощью 2 МЭД. Состояние кожи всех субъектов оценивали до лечения и через 2, 4, 6 и 8 недель после лечения. Отбеливание кожи оценивали по индексу меланина. Продукты (тестовая сыворотка: MA 0,05%, плацебо: необработанная MA) наносили с разными интервалами на каждый тестовый участок (группа A: плацебо, использованное после пигментации, группа B: тестовая сыворотка, используемая после пигментации) два раза в день (один раз в утром и один раз вечером) в течение 8 недель.Это исследование было одобрено этическим комитетом DERMAPRO / Skin Research Center (Сеул, Корея). Субъекты дали письменное информированное согласие.

3.12. Статистический анализ

Статистическая значимость данных определялась односторонним или двусторонним методом дисперсионного анализа. Индекс меланина клинического исследования был статистически проанализирован с использованием RM ANOVA и ANOVA программы пакета SPSS 11.5. Значимым считалось p <0,05.

Вклад авторов

E.Юнг и Дж. Ли придумали и разработали эксперименты; Э. Юнг. Дж. Ли, С. Шин и Дж. Ким проводили эксперименты; Э. Юнг, К. Ро и Д. Парк проанализировали данные; Дж. Ли и К. Ро предоставили реагенты / материалы / инструменты для анализа; рукопись написали Э. Юнг, С. Шин и Д. Пак.

Мадекассозид подавляет синтез меланина, блокируя воспаление, индуцированное ультрафиолетом

Abstract

Мадекассозид (MA), пентациклический тритерпен, выделенный из Centella asitica (L.), используется как терапевтическое средство при заживлении ран, а также как противовоспалительное и антивозрастное средство. Однако об участии МА в пигментации кожи не сообщалось. Это исследование было проведено для изучения влияния МА на меланогенез, индуцированный ультрафиолетом (УФ), и механизмы в системе совместного культивирования кератиноцитов и меланоцитов. МА значительно ингибировала индуцированный ультрафиолетовым излучением синтез меланина и перенос меланосом в системе совместного культивирования. Эти эффекты были дополнительно продемонстрированы МА-индуцированным ингибированием экспрессии активированного протеазой рецептора-2 и его сигнального пути, циклооксигеназы-2, простагландина E2 и простагландина F2 альфа в кератиноцитах.Клиническая эффективность МА подтверждена на искусственно загорелой коже человека. МА значительно снизила УФ-индуцированный индекс меланина через 8 недель после местного применения. В целом, исследование продемонстрировало значительные преимущества использования МА в подавлении гиперпигментации, вызванной УФ-облучением.

Ключевые слова: поствоспалительная пигментация, мадекассозид, PAR-2, UVR

1. Введение

У млекопитающих пигментация является результатом синтеза и распределения меланина в коже, волосяных луковицах и глазах.Гиперпигментация — распространенная и тревожная проблема, вызванная различными воспалительными кожными заболеваниями, такими как экзема, аллергический контактный дерматит и раздражающий контактный дерматит [1,2]. Ультрафиолетовое (УФ) излучение косвенно влияет на меланогенез меланоцитов через процесс паракринной регуляции с участием кератиноцитов. УФ-излучение стимулировало секрецию фактора стволовых клеток (SCF), α-меланоцит-стимулирующего гормона (α-MSH), эндотелина (ET-1) и адренокортикотропного меланоцитарно-стимулирующего гормона (ACTH) из кератиноцитов и индуцирует меланогенез меланоцитов [1].Кроме того, простагландин (PG) является промежуточным продуктом передачи липидов, продуцируемым циклооксигенацией арахидоновой кислоты под действием ферментов циклооксигеназы (COX) и ферментов простагландин E2 (PGE 2 ) синтазы. В эпидермисе PGE 2 и простагландин F2α (PGF 2 α) являются основными PG, продуцируемыми кератиноцитами в ответ на УФ-облучение. В нескольких сообщениях было высказано предположение, что PGs опосредуют поствоспалительные пигментные изменения, модулируя синтез меланина и дендричность меланоцитов [3,4,5].Рецептор, активируемый протеазой (PAR) -2, является членом нового семейства семи трансмембранных рецепторов, связанных с G-белком. В эпидермисе PAR-2 ​​экспрессируется в кератиноцитах [6], но не в меланоцитах [7]. Установлена ​​центральная роль PAR-2 ​​в поглощении кератиноцитами меланосом [8,9]. PAR-2 ​​был связан с активацией COX-2 и высвобождением арахидоновой кислоты и секрецией PGE 2 и PGF 2 α [10,11]. В нескольких сообщениях было высказано предположение, что PAR-2 ​​опосредует пигментацию кожи за счет увеличения поглощения меланосом кератиноцитами и высвобождения PGE 2 и PGF 2 α, которые стимулируют дендричность меланоцитов [12].

Мадекассозид (MA, a), один из основных тритерпеновых гликозидов, выделенных из Centella asiatica , имеет различные эффекты, включая заживление ран [13], противовоспалительное [14] и антивозрастное действие [15,16], а также защитные эффекты от окислительного стресса и УФ-В излучения [17,18]. Противовоспалительная активность обусловлена ​​ингибированием продукции ЦОГ-2 и PG [19,20]. Однако до сих пор не сообщалось об участии МА в пигментации кожи. В этом исследовании мы изучили влияние МА на меланогенез, вызванное УФ-излучением, и его механизмы действия в системе совместного культивирования кератиноцитов и меланоцитов.

( а ) Химическая структура МА. ( b ) Меланоциты и кератиноциты HaCaT совместно культивировали в системе вставок для подвешенных культур клеток в присутствии или в отсутствие УФ-В-излучения (20 мДж / см 2 ) с использованием 12-луночных вкладышей для подвешенных культур клеток Millicell. После облучения клеток HaCaT в верхней камере УФ-В, МА добавляли до указанной концентрации и затем помещали над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина.Представленные данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3. o p <0,05 по сравнению с необработанным контролем UVB; * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

2. Результаты и обсуждение

2.1. Влияние МА на вызванный УФ-излучением меланогенез в совместных культурах кератиноцитов / меланоцитов

Чтобы определить, снижает ли МА синтез меланина, индуцированный УФ-В, в системе совместного культивирования кератиноцитов / меланоцитов, во время совместного культивирования измеряли содержание меланина.После облучения кератиноцитов HaCaT в верхней камере УФ-В, МА добавляли до указанной концентрации и помещали над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина. Как показано на b, содержание меланина в меланоцитах при совместном культивировании с облученными УФB кератиноцитами HaCaT было увеличено по сравнению с совместным культивированием с необлученными кератиноцитами HaCaT. МА значительно снизила содержание меланина в облученных УФ-В, совместно культивируемых кератиноцитах / меланоцитах, тогда как МА не показала какого-либо значительного влияния на синтез меланина в необлученных, совместно культивированных кератиноцитах / меланоцитах.Кроме того, МА не показала каких-либо значительных эффектов на синтез меланина в модели одиночного меланоцита (дополнительные данные). Эти результаты предполагают, что МА ингибирует синтез меланина, блокируя меланогенный стимулятор, высвобождаемый кератиноцитами при облучении УФ-В. Результаты были подтверждены повторением экспериментов три раза, каждый из которых проводился в двух экземплярах на меланоцитах, полученных от одного и того же донора.

2.2. Влияние МА на PGE

2 и PGF 2 α Продукция в кератиноцитах

PGE 2 и PGF 2 α, которые являются основными PG, продуцируемыми кератиноцитами в ответ на УФ-облучение, опосредуют поствоспалительную пигментацию путем модуляции синтез меланина и дендричность меланоцитов.Поэтому мы оценили МА, чтобы определить его участие в продукции PGE 2 и PGF 2 α в кератиноцитах, облученных УФ-В. УФ-В излучение заметно активировало PGE 2 и PGF 2 α. Повышенная регуляция продукции подавлялась обработкой МА (). Эти результаты предполагают, что МА ингибирует пигментацию, вызванную УФ-В, путем подавления продукции PGE 2 и PGF 2 α в кератиноцитах.

Уровни липидных медиаторов воспаления ( a ) PGE 2 , ( b ) PGF 2 α.Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3. * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

2.3. Влияние МА на экспрессию ЦОГ-2 и PAR-2 ​​в кератиноцитах

Воздействие на кератиноциты УФ-излучения индуцирует экспрессию ЦОГ-2 и увеличивает синтез PG. В свою очередь, ЦОГ-2 катализирует образование провоспалительных простагландинов (например, PGE 2 ) из арахидоновой кислоты [21]. PAR-2 ​​был связан с активацией COX-2.Мы исследовали, может ли МА в кератиноцитах ослабить вызванное УФВ увеличение экспрессии ЦОГ-2 и PAR-2. UVB-индуцированная экспрессия COX-2 и PAR-2 ​​ингибировалась МА, что позволяет предположить, что МА оказывает противовоспалительное действие на кератиноциты (2).

Влияние МА на экспрессию COX-2 и PAR-2 ​​в кератиноцитах. Белки экстрагировали из цельноклеточных лизатов кератиноцитов HaCaT. β-актин использовали в качестве регулятора нагрузки. Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3; * р <0.05 против УФ-облученного контроля; МА: Мадекассозид.

2.4. Влияние МА на фогоцитоз

PAR-2 ​​имеет решающее значение для поглощения кератиноцитами меланосом. Активация PAR-2 ​​с помощью Ser-Leu-Ile-Gly-Arg-Leu-NH (2) (SLIGRL), известного активирующего пептида PAR-2, индуцирует фагоцитоз кератиноцитов и увеличивает пигментацию кожи, что указывает на то, что PAR-2 ​​регулирует пигментацию путем контроль фагоцитоза меланосом. Чтобы оценить влияние МА на PAR-2-опосредованный фагоцитоз кератиноцитов, кератиноциты HaCaT стимулировали SLIGRL (10 мкМ), а затем инкубировали с флуоресцентно мечеными микросферами (диаметром 1 мкм).SLIGRL увеличивал фагоцитарный ответ (а), но этот эффект был значительно ослаблен МА. Для дальнейшего выяснения эффектов МА на УФ-В-опосредованный фагоцитоз кератиноциты HaCaT обрабатывали только УФ-В излучением или МА, а затем инкубировали с флуоресцентно меченными микросферами. В соответствии с его влиянием на фагоцитоз в SLIGRL, обработка МА уменьшала количество микросфер, индуцированных УФ-излучением (а). Эти результаты показывают, что МА может ингибировать фагоцитоз, вызванный УФ-В, путем блокирования PAR-2.

Влияние МА на фагоцитоз меланосом. ( a ) Анализ фагоцитоза на основе микросфер. o p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; * p <0,05 по сравнению с контролем, обработанным SLIGRL. ( b ) Иммунофлуоресцентный анализ с системой совместного культивирования меланоцитов и кератиноцитов MEL-5. Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3; * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

Кроме того, мы использовали систему совместного культивирования in vitro меланоцитов и кератиноцитов для изучения участия МА в распределении меланосом и дендритогенезе меланоцитов Совместные культуры кератиноцитов / меланоцитов обрабатывали только УФ-В-излучением или с МА. . Для идентификации меланосом мы использовали антитело против MEL-5, которое распознает pg75, экспрессируемый в меланосомах. Кератиноциты окрашивали цитокератином, а ядра окрашивали Hoechst, соответственно.Как показано на b, интенсивность флуоресценции MEL-5 в меланоцитах, обработанных МА, по-видимому, уменьшалась по сравнению с контролем, облученным УФ-В. УФ-В-излучение стимулировало дендритогенез в меланоцитах, тогда как обработка МА подавляла эти морфологические изменения, как было определено с помощью флуоресцентной микроскопии (b). UVB-облучение кератиноцитов стимулирует высвобождение PGE 2 и PGF 2 α, которые действуют как паракринный фактор для стимуляции синтеза меланина и образования дендритов меланоцитов [5]. Эти результаты предполагают, что МА может ингибировать вызванное УФ-В увеличение меланосом и дендритогенез, блокируя высвобождение PGE 2 и PGF 2 α из кератиноцитов.

2,5. Влияние МА на меланогенез в реконструированном эпидермисе

В нескольких исследованиях сообщалось, что УФ-В излучение усиливает пигментацию кожи за счет активации PAR-2 ​​[9,22]. Меланодерма, реконструированный эпидермис, содержащий функциональные меланоциты, использовалась для выяснения влияния МА на пигментацию кожи. SLIGRL (10 мкМ) индуцировал увеличение содержания меланина в реконструированном эпидермисе по сравнению с культурами, выращенными без стимуляции SLIGRL после 14 дней культивирования. Кроме того, УФ-В излучение (100 мДж / см 2 ) вызывало увеличение содержания меланина.Синтез меланина, индуцированный SLIGRL, подавлялся обработкой МА. Более того, синтез меланина, индуцированный УФ-В излучением, был значительно подавлен обработкой МА ().

Влияние МА на реконструированный эпидермис. Применение МА уменьшало пигментацию меланина, вызванную УФ-излучением и SLIGRL, в реконструированном эпидермисе. Гистологические срезы после окрашивания по Фонтана-Массону.

2.6. Влияние МА на танин, индуцированный УФ-В

Отбеливающий эффект МА был также оценен in vivo с использованием искусственно загорелой кожи.Двадцать три здоровых субъекта (средний возраст: 40,35 ± 5,43 года) с типом кожи III по Фитцпатрику (иногда легкий ожог, примерно средний загар) и типом IV (редко ожоги, легко загорают более чем в среднем), которые не имели в анамнезе аллергенного контактного дерматита. в этом исследовании. Исследователь полностью объяснил цель и процедуры исследования, график, компенсацию и ожидаемые побочные реакции или побочные эффекты. Искусственный загар индуцировали на двух участках предплечья всех зачисленных субъектов с помощью УФ-излучения с использованием многопортового УФ-солнечного симулятора (Solar Light Co., Гленсайд, Пенсильвания, США) при воздействии 2 минимальных доз эритемы (MED). Тестовый материал и плацебо случайным образом распределяли по двум загорелым участкам. Испытуемые наносили исследуемый материал и плацебо два раза в день (один раз утром и один раз вечером) на загорелые участки в течение 8 недель. Все субъекты были обследованы до лечения и через 2, 4, 6 и 8 недель после лечения. Индекс меланина определяли с использованием Mexameter® MX18 (C + K, Кельн, Германия). По сравнению с контрольной группой МА значительно снижала УФ-индуцированный индекс меланина через 8 недель после местного применения ().

Влияние МА на искусственно загорелую кожу человека in vivo . Анализ показателя меланина по узкополосному спектральному коэффициенту отражения света. По сравнению с группой A (контроль, продолжение), индекс меланина был значительно снижен в группе B (MA, тест) через 8 недель ( p <0,05).

3. Экспериментальная

3.1. Материалы

.

Мадекассозид был приобретен у Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Калифорния, США). Моноклональные антитела к СОХ-2 и PAR-2 ​​были приобретены в Cell Signaling Technology (Беверли, Массачусетс, США).Антитело Mel-5 было приобретено в SIGNET (Эмеривилл, Калифорния, США). SLIGRL был приобретен у Peptron (Сеул, Корея). Флуоресцентные микросферы, модифицированные карбоксилатом FluoSpheres®, были приобретены у Invitrogen (Карлсбад, Калифорния, США). Реконструированный эпидермис человека был приобретен у MatTek (Ашленд, Массачусетс, США).

3.2. Клетки и культура клеток

Культивируемые нормальные клетки эпидермальных меланоцитов человека, полученные от Cascade Biologics (Портленд, Орегон, США), поддерживали в среде 154 (Cascade Biologicals) с добавлением 0.2% об. / Об. Экстракта гипофиза крупного рогатого скота, 0,5% об. / Об. Фетальной бычьей сыворотки, 5 мкг / мл бычьего инсулина, 5 мкг / мл бычьего трансферрина, 3 нг / мл основного фактора роста фибробластов, 0,18 мкг / мл гидрокортизона, 3 мкг / мл. мл гепарина и 10 нг / мл форбола 12-миристата 13-ацетата при 37 ° C в увлажненной атмосфере, содержащей 95% воздуха / 5% CO 2 . Клеточная линия кератиноцитов человека HaCaT была получена от CLS (Eppelheim, Германия) и поддерживалась в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% антибиотиков.

3.3. УФ-облучение

Для воздействия УФ-В, когда клетки были конфлюэнтными на 70%, среду удаляли, клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и осторожно покрывали DMEM, не содержащей фенолового красного (Biowhittaker, Lonza, Switzerland). Облучение УФВ проводили в среде DMEM без фенолового красного с использованием прибора Вилбера-Лурма со спектром излучения 280–370 нм и пиком при 312 нм. Дозу УФ-излучения измеряли с помощью УФ-измерителя УФ-излучения модели UV-340 (Lutron, Coopersburg, PA, USA).

3.4. Совместное культивирование

Меланоцитов и кератиноцитов HaCaT совместно культивировали с небольшой модификацией ранее описанных ранее методов [23,24]. Для условий совместного культивирования меланоциты культивировали (1 × 10 5 клеток / лунку) в 12-луночном планшете. Кератиноциты HaCaT (5 × 10 4 ) высевали в 12-луночные вкладыши для культуры подвешенных клеток Millicell (Millipore, Billerica, MA, USA) с пористой мембраной 5 мкм, разделяющей верхнюю и нижнюю камеры. Культуральная среда, используемая до создания совместной культуры, представляла собой вышеупомянутую стандартную среду для роста для двух типов клеток.Через 24 часа кератиноциты HaCaT во вставках для подвешивания облучали указанными дозами УФВ, а затем заменяли средой для совместного культивирования, содержащей указанную концентрацию МА во вставках над меланоцитами. После инициации совместных культур среду верхней и нижней камеры заменяли на бессывороточную среду для роста кератиноцитов (SF-KGM) с добавкой для роста кератиноцитов (KGS; Invitrogen).

3.5. Анализ меланина

Меланоциты и кератиноциты HaCaT совместно культивировали в контактной системе в присутствии или в отсутствие УФ-В-излучения (20 мДж / см 2 ) с использованием 12-луночных вкладышей для культуры подвешенных клеток Millicell.После того, как кератиноциты HaCaT в верхней камере были облучены УФВ, МА был добавлен до указанной концентрации над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина. Анализ выполняли, как описано ранее [25]. Вкратце, осадки клеток солюбилизировали в 1 н. NaOH (60 ° C) в течение 1 часа. Цвет анализировали в спектре 475 нм. Содержание меланина определяли по поглощению / мкг белка в клеточном экстракте.

3.6. Липидный медиатор для анализа воспаления

Кератиноцитов HaCaT облучали указанными дозами УФВ и инкубировали с указанной концентрацией мадекассозида в течение 24 часов.Концентрации PGE 2 и PGF 2 α в культуральном супернатанте измеряли с использованием наборов для ELISA (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США) в соответствии с инструкциями производителя.

3,7. Вестерн-блот-анализ

Вестерн-блот-анализ проводили путем разделения клеточных лизатов с помощью 10% SDS-PAGE. Гели подвергали блоттингу в течение ночи на мембранах из поливинилидендифторида, после чего они подвергались действию соответствующих антител (анти-COX2, анти-PAR-2). Затем белки визуализировали с использованием усиленной хемилюминесценции, системы вестерн-блоттинга ECL (Amersham Biosciences, Пискатауэй, Нью-Джерси, США) с конъюгированными с пероксидазой хрена анти-кроличьими или антимышиными антителами в качестве вторичных антител.Результаты были подтверждены тремя независимыми экспериментами.

3.8. Анализ фагоцитоза

Анализ фагоцитоза на основе микросфер Кератиноциты HaCaT высевали в 24-луночные планшеты, инкубировали в течение ночи при 37 ° C и обрабатывали SLIGRL (10 мкМ) или облучали УФB (20 мДж / см 2 ) в присутствии или отсутствие МА. Через 24 часа клетки голодали по сыворотке в течение 6 часов. Желто-зеленые флуоресцентные микросферы FluoSpheres ® , модифицированные карбоксилатом (диаметр 1 мкм; Invitrogen), получали за 24 часа до использования в соответствии с инструкциями производителя.Клетки инкубировали с микросферами (100 на ячейку) при 37 ° C в течение 4 часов. Микросферы аспирировали и клетки инкубировали с 1 мл FBS при 37 ° C в течение 15 минут. После тщательной промывки были сделаны изображения проглоченных шариков. Каждый эксперимент проводился в двух экземплярах и повторялся не менее трех раз.

3.9. Иммунофлуоресцентное окрашивание

Меланоцитов и кератиноцитов HaCaT субкультивировали на покрытые витрогеном 8-луночные предметные стекла (Nalge Nunc International, Naperville, IL, USA) и поддерживали в смеси 1: 1 культуральной среды меланоцитов (Medium 154s) и культуры клеток HaCaT. среда (DMEM, содержащая 10% FBS).Затем монослои клеток фиксировали в 2,5% глутаральдегиде и 2% параформальдегиде в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,4), после чего их пермеабилизировали 0,1% Тритоном-X-100 в стабилизирующем буфере (PBS, 100 мМ MgCl 2 , 1 мМ CaCl 2 ) в течение 10 мин. Затем неспецифическое связывание антител блокировали путем инкубации слайдов в 10% нормальной козьей сыворотке. Затем применяли первичные антитела в течение ночи при 4 ° C с последующей инкубацией с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с флуоресцеином, в течение 2 часов при комнатной температуре.Hoechst 33342 (Invitrogen) использовали для окрашивания ядер. Изображения были сняты цифровой камерой Spot и обработаны с помощью программы Olympus DP Manager (Olympus, Токио, Япония).

3.10. Гистохимия реконструированного эпидермиса

Реконструированный эпидермис человека (MatTek, Ашленд, Массачусетс, США) состоял из нормальных эпидермальных кератиноцитов человека и нормальных эпидермальных меланоцитов человека, которые были культивированы для образования многослойной высокодифференцированной модели. Реконструированный эпидермис инкубировали в среде, содержащей 50 мкМ МА, в течение 2 недель.Химическое вещество было добавлено в нижнюю лунку реконструированной системы эпидермиса, а затем проникло через мембрану и достигло базальных клеток. Среду, содержащую МА, заменяли через день. Затем эпидермис фиксировали 4% формалином в PBS с последующим окрашиванием по Фонтана-Массону для визуализации пигментов меланина. Изображения были проанализированы с помощью Image-Pro Plus версии 4.1.

3.11. Клиническое исследование МА на коже, вызванной УФ-загаром

Двадцать три здоровых субъекта (средний возраст: 40.35 ± 5,43 года) с типом кожи III по Фитцпатрику (иногда легкий ожог, загар примерно средний) или IV (ожог редко, загар больше среднего). Тип кожи по Фитцпатрику классифицирует реакцию кожи на УФ-излучение. МЭД определяется как наименьший временной интервал или доза УФ-излучения, достаточная для образования минимальной ощутимой эритемы на незащищенной коже и необходимая для рационального лечения УФ-светом, вызывающего искусственную пигментацию. Для определения МЭД каждого субъекта каждое предплечье облучали лестницей тестовых доз 16–48 мДж / см 2 с использованием многопортового УФ-солнечного симулятора (Solar Light Co., Гленсайд, Пенсильвания, США). МЭД и индекс эритемы считывали через 24 часа. После определения МЭД каждого субъекта искусственный загар вызывали в двух местах на предплечье с помощью 2 МЭД. Состояние кожи всех субъектов оценивали до лечения и через 2, 4, 6 и 8 недель после лечения. Отбеливание кожи оценивали по индексу меланина. Продукты (тестовая сыворотка: MA 0,05%, плацебо: необработанная MA) наносили с разными интервалами на каждый тестовый участок (группа A: плацебо, использованное после пигментации, группа B: тестовая сыворотка, используемая после пигментации) два раза в день (один раз в утром и один раз вечером) в течение 8 недель.Это исследование было одобрено этическим комитетом DERMAPRO / Skin Research Center (Сеул, Корея). Субъекты дали письменное информированное согласие.

3.12. Статистический анализ

Статистическая значимость данных определялась односторонним или двусторонним методом дисперсионного анализа. Индекс меланина клинического исследования был статистически проанализирован с использованием RM ANOVA и ANOVA программы пакета SPSS 11.5. Значимым считалось p <0,05.

Вклад авторов

E.Юнг и Дж. Ли придумали и разработали эксперименты; Э. Юнг. Дж. Ли, С. Шин и Дж. Ким проводили эксперименты; Э. Юнг, К. Ро и Д. Парк проанализировали данные; Дж. Ли и К. Ро предоставили реагенты / материалы / инструменты для анализа; рукопись написали Э. Юнг, С. Шин и Д. Пак.

Мадекассозид подавляет синтез меланина, блокируя воспаление, индуцированное ультрафиолетом

Abstract

Мадекассозид (MA), пентациклический тритерпен, выделенный из Centella asitica (L.), используется как терапевтическое средство при заживлении ран, а также как противовоспалительное и антивозрастное средство. Однако об участии МА в пигментации кожи не сообщалось. Это исследование было проведено для изучения влияния МА на меланогенез, индуцированный ультрафиолетом (УФ), и механизмы в системе совместного культивирования кератиноцитов и меланоцитов. МА значительно ингибировала индуцированный ультрафиолетовым излучением синтез меланина и перенос меланосом в системе совместного культивирования. Эти эффекты были дополнительно продемонстрированы МА-индуцированным ингибированием экспрессии активированного протеазой рецептора-2 и его сигнального пути, циклооксигеназы-2, простагландина E2 и простагландина F2 альфа в кератиноцитах.Клиническая эффективность МА подтверждена на искусственно загорелой коже человека. МА значительно снизила УФ-индуцированный индекс меланина через 8 недель после местного применения. В целом, исследование продемонстрировало значительные преимущества использования МА в подавлении гиперпигментации, вызванной УФ-облучением.

Ключевые слова: поствоспалительная пигментация, мадекассозид, PAR-2, UVR

1. Введение

У млекопитающих пигментация является результатом синтеза и распределения меланина в коже, волосяных луковицах и глазах.Гиперпигментация — распространенная и тревожная проблема, вызванная различными воспалительными кожными заболеваниями, такими как экзема, аллергический контактный дерматит и раздражающий контактный дерматит [1,2]. Ультрафиолетовое (УФ) излучение косвенно влияет на меланогенез меланоцитов через процесс паракринной регуляции с участием кератиноцитов. УФ-излучение стимулировало секрецию фактора стволовых клеток (SCF), α-меланоцит-стимулирующего гормона (α-MSH), эндотелина (ET-1) и адренокортикотропного меланоцитарно-стимулирующего гормона (ACTH) из кератиноцитов и индуцирует меланогенез меланоцитов [1].Кроме того, простагландин (PG) является промежуточным продуктом передачи липидов, продуцируемым циклооксигенацией арахидоновой кислоты под действием ферментов циклооксигеназы (COX) и ферментов простагландин E2 (PGE 2 ) синтазы. В эпидермисе PGE 2 и простагландин F2α (PGF 2 α) являются основными PG, продуцируемыми кератиноцитами в ответ на УФ-облучение. В нескольких сообщениях было высказано предположение, что PGs опосредуют поствоспалительные пигментные изменения, модулируя синтез меланина и дендричность меланоцитов [3,4,5].Рецептор, активируемый протеазой (PAR) -2, является членом нового семейства семи трансмембранных рецепторов, связанных с G-белком. В эпидермисе PAR-2 ​​экспрессируется в кератиноцитах [6], но не в меланоцитах [7]. Установлена ​​центральная роль PAR-2 ​​в поглощении кератиноцитами меланосом [8,9]. PAR-2 ​​был связан с активацией COX-2 и высвобождением арахидоновой кислоты и секрецией PGE 2 и PGF 2 α [10,11]. В нескольких сообщениях было высказано предположение, что PAR-2 ​​опосредует пигментацию кожи за счет увеличения поглощения меланосом кератиноцитами и высвобождения PGE 2 и PGF 2 α, которые стимулируют дендричность меланоцитов [12].

Мадекассозид (MA, a), один из основных тритерпеновых гликозидов, выделенных из Centella asiatica , имеет различные эффекты, включая заживление ран [13], противовоспалительное [14] и антивозрастное действие [15,16], а также защитные эффекты от окислительного стресса и УФ-В излучения [17,18]. Противовоспалительная активность обусловлена ​​ингибированием продукции ЦОГ-2 и PG [19,20]. Однако до сих пор не сообщалось об участии МА в пигментации кожи. В этом исследовании мы изучили влияние МА на меланогенез, вызванное УФ-излучением, и его механизмы действия в системе совместного культивирования кератиноцитов и меланоцитов.

( а ) Химическая структура МА. ( b ) Меланоциты и кератиноциты HaCaT совместно культивировали в системе вставок для подвешенных культур клеток в присутствии или в отсутствие УФ-В-излучения (20 мДж / см 2 ) с использованием 12-луночных вкладышей для подвешенных культур клеток Millicell. После облучения клеток HaCaT в верхней камере УФ-В, МА добавляли до указанной концентрации и затем помещали над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина.Представленные данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3. o p <0,05 по сравнению с необработанным контролем UVB; * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

2. Результаты и обсуждение

2.1. Влияние МА на меланогенез, индуцированный УФ-излучением, в совместных культурах кератиноцитов / меланоцитов

Чтобы определить, снижает ли МА синтез меланина, индуцированный УФ-В, в системе совместного культивирования кератиноцитов / меланоцитов, во время совместного культивирования измеряли содержание меланина.После облучения кератиноцитов HaCaT в верхней камере УФ-В, МА добавляли до указанной концентрации и помещали над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина. Как показано на b, содержание меланина в меланоцитах при совместном культивировании с облученными УФB кератиноцитами HaCaT было увеличено по сравнению с совместным культивированием с необлученными кератиноцитами HaCaT. МА значительно снижала содержание меланина в облученных УФ-В, совместно культивируемых кератиноцитах / меланоцитах, тогда как МА не показала какого-либо значительного влияния на синтез меланина в необлученных, совместно культивированных кератиноцитах / меланоцитах.Кроме того, МА не показала каких-либо значительных эффектов на синтез меланина в модели одиночного меланоцита (дополнительные данные). Эти результаты предполагают, что МА ингибирует синтез меланина, блокируя меланогенный стимулятор, высвобождаемый кератиноцитами при облучении УФ-В. Результаты были подтверждены путем трехкратного повторения экспериментов, каждый из которых проводился в двух экземплярах на меланоцитах, полученных от одного и того же донора.

2.2. Влияние МА на PGE

2 и PGF 2 α Продукция в кератиноцитах

PGE 2 и PGF 2 α, которые являются основными PG, продуцируемыми кератиноцитами в ответ на УФ-облучение, опосредуют поствоспалительную пигментацию путем модуляции синтез меланина и дендричность меланоцитов.Поэтому мы оценили МА, чтобы определить его участие в продукции PGE 2 и PGF 2 α в кератиноцитах, облученных УФ-В. УФ-В излучение заметно активировало PGE 2 и PGF 2 α. Повышенная регуляция продукции подавлялась обработкой МА (). Эти результаты предполагают, что МА ингибирует пигментацию, вызванную УФ-В, путем подавления продукции PGE 2 и PGF 2 α в кератиноцитах.

Уровни липидных медиаторов воспаления ( a ) PGE 2 , ( b ) PGF 2 α.Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3. * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

2.3. Влияние МА на экспрессию ЦОГ-2 и PAR-2 ​​в кератиноцитах

Воздействие на кератиноциты УФ-излучения индуцирует экспрессию ЦОГ-2 и увеличивает синтез PG. В свою очередь, ЦОГ-2 катализирует образование провоспалительных простагландинов (например, PGE 2 ) из арахидоновой кислоты [21]. PAR-2 ​​был связан с активацией COX-2.Мы исследовали, может ли МА в кератиноцитах ослабить вызванное УФВ увеличение экспрессии ЦОГ-2 и PAR-2. UVB-индуцированная экспрессия COX-2 и PAR-2 ​​ингибировалась МА, что позволяет предположить, что МА оказывает противовоспалительное действие на кератиноциты (2).

Влияние МА на экспрессию COX-2 и PAR-2 ​​в кератиноцитах. Белки экстрагировали из цельноклеточных лизатов кератиноцитов HaCaT. β-актин использовали в качестве регулятора нагрузки. Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3; * р <0.05 против УФ-облученного контроля; МА: Мадекассозид.

2.4. Влияние МА на фогоцитоз

PAR-2 ​​имеет решающее значение для поглощения кератиноцитами меланосом. Активация PAR-2 ​​с помощью Ser-Leu-Ile-Gly-Arg-Leu-NH (2) (SLIGRL), известного активирующего пептида PAR-2, индуцирует фагоцитоз кератиноцитов и увеличивает пигментацию кожи, что указывает на то, что PAR-2 ​​регулирует пигментацию путем контроль фагоцитоза меланосом. Чтобы оценить влияние МА на PAR-2-опосредованный фагоцитоз кератиноцитов, кератиноциты HaCaT стимулировали SLIGRL (10 мкМ), а затем инкубировали с флуоресцентно мечеными микросферами (диаметром 1 мкм).SLIGRL увеличивал фагоцитарный ответ (а), но этот эффект был значительно ослаблен МА. Для дальнейшего выяснения эффектов МА на УФB-опосредованный фагоцитоз кератиноциты HaCaT обрабатывали только УФ-излучением или МА, а затем инкубировали с флуоресцентно мечеными микросферами. В соответствии с его влиянием на фагоцитоз в SLIGRL, обработка МА уменьшала количество микросфер, индуцированных УФ-излучением (а). Эти результаты показывают, что МА может ингибировать фагоцитоз, вызванный УФ-В, путем блокирования PAR-2.

Влияние МА на фагоцитоз меланосом. ( a ) Анализ фагоцитоза на основе микросфер. o p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; * p <0,05 по сравнению с контролем, обработанным SLIGRL. ( b ) Иммунофлуоресцентный анализ с системой совместного культивирования меланоцитов и кератиноцитов MEL-5. Представленные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3; * p <0,05 по сравнению с UVB-облученным контролем; МА: Мадекассозид.

Кроме того, мы использовали систему совместного культивирования in vitro меланоцитов и кератиноцитов для изучения участия МА в распределении меланосом и дендритогенезе меланоцитов Совместные культуры кератиноцитов / меланоцитов обрабатывали только УФ-В-излучением или с МА. . Для идентификации меланосом мы использовали антитело против MEL-5, которое распознает pg75, экспрессируемый в меланосомах. Кератиноциты окрашивали цитокератином, а ядра окрашивали Hoechst, соответственно.Как показано на b, интенсивность флуоресценции MEL-5 в меланоцитах, обработанных МА, по-видимому, уменьшалась по сравнению с контролем, облученным УФ-В. УФ-В-излучение стимулировало дендритогенез в меланоцитах, тогда как обработка МА подавляла эти морфологические изменения, как было определено с помощью флуоресцентной микроскопии (b). UVB-облучение кератиноцитов стимулирует высвобождение PGE 2 и PGF 2 α, которые действуют как паракринный фактор для стимуляции синтеза меланина и образования дендритов меланоцитов [5]. Эти результаты предполагают, что МА может ингибировать вызванное УФ-В увеличение меланосом и дендритогенез, блокируя высвобождение PGE 2 и PGF 2 α из кератиноцитов.

2,5. Влияние МА на меланогенез в реконструированном эпидермисе

В нескольких исследованиях сообщалось, что УФ-В излучение усиливает пигментацию кожи за счет активации PAR-2 ​​[9,22]. Меланодерма, реконструированный эпидермис, содержащий функциональные меланоциты, использовалась для выяснения влияния МА на пигментацию кожи. SLIGRL (10 мкМ) индуцировал увеличение содержания меланина в реконструированном эпидермисе по сравнению с культурами, выращенными без стимуляции SLIGRL после 14 дней культивирования. Кроме того, УФ-В излучение (100 мДж / см 2 ) вызывало увеличение содержания меланина.Синтез меланина, индуцированный SLIGRL, подавлялся обработкой МА. Более того, синтез меланина, индуцированный УФ-В излучением, был значительно подавлен обработкой МА ().

Влияние МА на реконструированный эпидермис. Применение МА уменьшало пигментацию меланина, вызванную УФ-излучением и SLIGRL, в реконструированном эпидермисе. Гистологические срезы после окрашивания по Фонтана-Массону.

2.6. Влияние МА на танин, индуцированный УФ-В

Отбеливающий эффект МА был также оценен in vivo с использованием искусственно загорелой кожи.Двадцать три здоровых субъекта (средний возраст: 40,35 ± 5,43 года) с типом кожи III по Фитцпатрику (иногда легкий ожог, примерно средний загар) и типом IV (редко ожоги, легко загорают более чем в среднем), которые не имели в анамнезе аллергенного контактного дерматита. в этом исследовании. Исследователь полностью объяснил цель и процедуры исследования, график, компенсацию и ожидаемые побочные реакции или побочные эффекты. Искусственный загар индуцировали на двух участках предплечья всех зачисленных субъектов с помощью УФ-излучения с использованием многопортового УФ-солнечного симулятора (Solar Light Co., Гленсайд, Пенсильвания, США) при воздействии 2 минимальных доз эритемы (MED). Тестовый материал и плацебо случайным образом распределяли по двум загорелым участкам. Испытуемые наносили исследуемый материал и плацебо два раза в день (один раз утром и один раз вечером) на загорелые участки в течение 8 недель. Все субъекты были обследованы до лечения и через 2, 4, 6 и 8 недель после лечения. Индекс меланина определяли с использованием Mexameter® MX18 (C + K, Кельн, Германия). По сравнению с контрольной группой МА значительно снижала УФ-индуцированный индекс меланина через 8 недель после местного применения ().

Влияние МА на искусственно загорелую кожу человека in vivo . Анализ показателя меланина по узкополосному спектральному коэффициенту отражения света. По сравнению с группой A (контроль, продолжение), индекс меланина был значительно снижен в группе B (MA, тест) через 8 недель ( p <0,05).

3. Экспериментальная

3.1. Материалы

.

Мадекассозид был приобретен у Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, Калифорния, США). Моноклональные антитела к СОХ-2 и PAR-2 ​​были приобретены в Cell Signaling Technology (Беверли, Массачусетс, США).Антитело Mel-5 было приобретено в SIGNET (Эмеривилл, Калифорния, США). SLIGRL был приобретен у Peptron (Сеул, Корея). Флуоресцентные микросферы, модифицированные карбоксилатом FluoSpheres®, были приобретены у Invitrogen (Карлсбад, Калифорния, США). Реконструированный эпидермис человека был приобретен у MatTek (Ашленд, Массачусетс, США).

3.2. Клетки и культура клеток

Культивируемые нормальные клетки эпидермальных меланоцитов человека, полученные от Cascade Biologics (Портленд, Орегон, США), поддерживали в среде 154 (Cascade Biologicals) с добавлением 0.2% об. / Об. Экстракта гипофиза крупного рогатого скота, 0,5% об. / Об. Фетальной бычьей сыворотки, 5 мкг / мл бычьего инсулина, 5 мкг / мл бычьего трансферрина, 3 нг / мл основного фактора роста фибробластов, 0,18 мкг / мл гидрокортизона, 3 мкг / мл. мл гепарина и 10 нг / мл форбола 12-миристата 13-ацетата при 37 ° C в увлажненной атмосфере, содержащей 95% воздуха / 5% CO 2 . Клеточная линия кератиноцитов человека HaCaT была получена от CLS (Eppelheim, Германия) и поддерживалась в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% антибиотиков.

3.3. УФ-облучение

Для воздействия УФ-В, когда клетки были конфлюэнтными на 70%, среду удаляли, клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и осторожно покрывали DMEM, не содержащей фенолового красного (Biowhittaker, Lonza, Switzerland). Облучение УФВ проводили в среде DMEM без фенолового красного с использованием прибора Вилбера-Лурма со спектром излучения 280–370 нм и пиком при 312 нм. Дозу УФ-излучения измеряли с помощью УФ-измерителя УФ-излучения модели UV-340 (Lutron, Coopersburg, PA, USA).

3.4. Совместное культивирование

Меланоцитов и кератиноцитов HaCaT совместно культивировали с небольшой модификацией ранее описанных ранее методов [23,24]. Для условий совместного культивирования меланоциты культивировали (1 × 10 5 клеток / лунку) в 12-луночном планшете. Кератиноциты HaCaT (5 × 10 4 ) высевали в 12-луночные вкладыши для культуры подвешенных клеток Millicell (Millipore, Billerica, MA, USA) с пористой мембраной 5 мкм, разделяющей верхнюю и нижнюю камеры. Культуральная среда, используемая до создания совместной культуры, представляла собой вышеупомянутую стандартную среду для роста для двух типов клеток.Через 24 часа кератиноциты HaCaT во вставках для подвешивания облучали указанными дозами УФВ, а затем заменяли средой для совместного культивирования, содержащей указанную концентрацию МА во вставках над меланоцитами. После инициации совместных культур среду верхней и нижней камеры заменяли на бессывороточную среду для роста кератиноцитов (SF-KGM) с добавкой для роста кератиноцитов (KGS; Invitrogen).

3.5. Анализ меланина

Меланоциты и кератиноциты HaCaT совместно культивировали в контактной системе в присутствии или в отсутствие УФ-В-излучения (20 мДж / см 2 ) с использованием 12-луночных вкладышей для культуры подвешенных клеток Millicell.После того, как кератиноциты HaCaT в верхней камере были облучены УФВ, МА был добавлен до указанной концентрации над меланоцитами. Через 4 дня меланоциты нижней камеры собирали для анализа меланина. Анализ выполняли, как описано ранее [25]. Вкратце, осадки клеток солюбилизировали в 1 н. NaOH (60 ° C) в течение 1 часа. Цвет анализировали в спектре 475 нм. Содержание меланина определяли по поглощению / мкг белка в клеточном экстракте.

3.6. Липидный медиатор для анализа воспаления

Кератиноцитов HaCaT облучали указанными дозами УФВ и инкубировали с указанной концентрацией мадекассозида в течение 24 часов.Концентрации PGE 2 и PGF 2 α в культуральном супернатанте измеряли с использованием наборов для ELISA (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США) в соответствии с инструкциями производителя.

3,7. Вестерн-блот-анализ

Вестерн-блот-анализ проводили путем разделения клеточных лизатов с помощью 10% SDS-PAGE. Гели подвергали блоттингу в течение ночи на мембранах из поливинилидендифторида, после чего они подвергались действию соответствующих антител (анти-COX2, анти-PAR-2). Затем белки визуализировали с использованием усиленной хемилюминесценции, системы вестерн-блоттинга ECL (Amersham Biosciences, Пискатауэй, Нью-Джерси, США) с конъюгированными с пероксидазой хрена анти-кроличьими или антимышиными антителами в качестве вторичных антител.Результаты были подтверждены тремя независимыми экспериментами.

3.8. Анализ фагоцитоза

Анализ фагоцитоза на основе микросфер Кератиноциты HaCaT высевали в 24-луночные планшеты, инкубировали в течение ночи при 37 ° C и обрабатывали SLIGRL (10 мкМ) или облучали УФB (20 мДж / см 2 ) в присутствии или отсутствие МА. Через 24 часа клетки голодали по сыворотке в течение 6 часов. Желто-зеленые флуоресцентные микросферы FluoSpheres ® , модифицированные карбоксилатом (диаметр 1 мкм; Invitrogen), получали за 24 часа до использования в соответствии с инструкциями производителя.Клетки инкубировали с микросферами (100 на ячейку) при 37 ° C в течение 4 часов. Микросферы аспирировали и клетки инкубировали с 1 мл FBS при 37 ° C в течение 15 минут. После тщательной промывки были сделаны изображения проглоченных шариков. Каждый эксперимент проводился в двух экземплярах и повторялся не менее трех раз.

3.9. Иммунофлуоресцентное окрашивание

Меланоцитов и кератиноцитов HaCaT субкультивировали на покрытые витрогеном 8-луночные предметные стекла (Nalge Nunc International, Naperville, IL, USA) и поддерживали в смеси 1: 1 культуральной среды меланоцитов (Medium 154s) и культуры клеток HaCaT. среда (DMEM, содержащая 10% FBS).Затем монослои клеток фиксировали в 2,5% глутаральдегиде и 2% параформальдегиде в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,4), после чего их пермеабилизировали 0,1% Тритоном-X-100 в стабилизирующем буфере (PBS, 100 мМ MgCl 2 , 1 мМ CaCl 2 ) в течение 10 мин. Затем неспецифическое связывание антител блокировали путем инкубации слайдов в 10% нормальной козьей сыворотке. Затем применяли первичные антитела в течение ночи при 4 ° C с последующей инкубацией с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с флуоресцеином, в течение 2 часов при комнатной температуре.Hoechst 33342 (Invitrogen) использовали для окрашивания ядер. Изображения были сняты цифровой камерой Spot и обработаны с помощью программы Olympus DP Manager (Olympus, Токио, Япония).

3.10. Гистохимия реконструированного эпидермиса

Реконструированный эпидермис человека (MatTek, Ашленд, Массачусетс, США) состоял из нормальных эпидермальных кератиноцитов человека и нормальных эпидермальных меланоцитов человека, которые были культивированы для образования многослойной высокодифференцированной модели. Реконструированный эпидермис инкубировали в среде, содержащей 50 мкМ МА, в течение 2 недель.Химическое вещество было добавлено в нижнюю лунку реконструированной системы эпидермиса, а затем проникло через мембрану и достигло базальных клеток. Среду, содержащую МА, заменяли через день. Затем эпидермис фиксировали 4% формалином в PBS с последующим окрашиванием по Фонтана-Массону для визуализации пигментов меланина. Изображения были проанализированы с помощью Image-Pro Plus версии 4.1.

3.11. Клиническое исследование МА на коже, вызванной УФ-загаром

Двадцать три здоровых субъекта (средний возраст: 40.35 ± 5,43 года) с типом кожи III по Фитцпатрику (иногда легкий ожог, загар примерно средний) или IV (ожог редко, загар больше среднего). Тип кожи по Фитцпатрику классифицирует реакцию кожи на УФ-излучение. МЭД определяется как наименьший временной интервал или доза УФ-излучения, достаточная для образования минимальной ощутимой эритемы на незащищенной коже и необходимая для рационального лечения УФ-светом, вызывающего искусственную пигментацию. Для определения МЭД каждого субъекта каждое предплечье облучали лестницей тестовых доз 16–48 мДж / см 2 с использованием многопортового УФ-солнечного симулятора (Solar Light Co., Гленсайд, Пенсильвания, США). МЭД и индекс эритемы считывали через 24 часа. После определения МЭД каждого субъекта искусственный загар вызывали в двух местах на предплечье с помощью 2 МЭД. Состояние кожи всех субъектов оценивали до лечения и через 2, 4, 6 и 8 недель после лечения. Отбеливание кожи оценивали по индексу меланина. Продукты (тестовая сыворотка: MA 0,05%, плацебо: необработанная MA) наносили с разными интервалами на каждый тестовый участок (группа A: плацебо, использованное после пигментации, группа B: тестовая сыворотка, используемая после пигментации) два раза в день (один раз в утром и один раз вечером) в течение 8 недель.Это исследование было одобрено этическим комитетом DERMAPRO / Skin Research Center (Сеул, Корея). Субъекты дали письменное информированное согласие.

3.12. Статистический анализ

Статистическая значимость данных определялась односторонним или двусторонним методом дисперсионного анализа. Индекс меланина клинического исследования был статистически проанализирован с использованием RM ANOVA и ANOVA программы пакета SPSS 11.5. Значимым считалось p <0,05.

Вклад авторов

E.Юнг и Дж. Ли придумали и разработали эксперименты; Э. Юнг. Дж. Ли, С. Шин и Дж. Ким проводили эксперименты; Э. Юнг, К.

Check Also

Профессия ит специалист: Профессия IT-специалист. Описание профессии IT-специалиста. Кто такой IT-специалист. . Описание профессии

Содержание Что такое IT специалист — Кто кем работаетСамые востребованные IT-профессии 2021 года / Блог …

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *