Четверг , 23 сентября 2021
Главная / Разное / Hpv 33 что это такое у женщин: Human Papillomavirus 31/33 (HPV 31/33), ДНК [реал-тайм ПЦР]

Hpv 33 что это такое у женщин: Human Papillomavirus 31/33 (HPV 31/33), ДНК [реал-тайм ПЦР]

Содержание

ВПЧ — 21 тип (6,11,44,16,18,26,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73, 82)

ВПЧ — 21 тип (6,11,44,16,18,26,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73, 82)

Вирусы папилломы человека 6, 11 — безоболочечные ДНК-вирусы, являющиеся представителями семейства Papillomaviridae. Вирусы передаются при микротравмах кожи и слизистых оболочек, а также половым путем. При родах вирусы передаются новорожденным. ВПЧ-инфекция относится к наиболее распространенной инфекции передающейся половым путём (ИППП). К группе риска по ВПЧ-инфекции можно отнести практически всех людей, живущих половой жизнью.

ВПЧ инфицируют и размножаются в  эпителии кожи, образуя доброкачественные бородавки, и в слизистых оболочках, вызывая генитальные, оральные и конъюнктивальные папилломы,может быть клинически выраженной, протекать субклинически или быть латентной. У женщин инфицируется и покрывается генитальными бородавками область преддверия влагалища, стенки влагалища, шейки матки, наружное отверстие уретры, анальная область. У мужчин поражается головка полового члена, крайняя плоть, мошонка, анальная область.

Показания к сдаче анализа:

1. Бородавки, кондиломы генитальной области.

2. Выявлении дисплазии эпителия при цитологическом исследовании.

3. Профилактические скрининговые исследования.

Материал для анализа

Мужчины — урогенитальный соскоб, женщины — соскоб из цервикального канала.

ВПЧ 16, 18 относятся к группе высокого и среднего риска озлокачествления пораженных клеток. 

Инфицирование осуществляется следующими путями:

1. Передача ВПЧ 18, 16 типа при случайных интимных отношениях без контрацептивов.

2. Контактный способ в бытовых условиях.

3. Передача папилломавируса 16, 18 типов плоду через материнскую плаценту.

 

Развитие вируса папилломы человека 16, 18 типов делят на несколько этапов:

1.Инкубационный период.  Характеризуется бессимптомным развитием инфекционного процесса. Длительность периода прогнозировать невозможно.

2. Этап активного роста новообразований. Наблюдается появление характерных признаков – папиллом 16 типа. Делительный процесс этих структур ускоряется и становится незакономерным, в результате возникает рост новообразований.

3. Дисплазия.

 Обнаружение предракового состояния – это косвенные показатели ВПЧ 16, 18 типов. На раннем этапе заболевание легко поддается терапии. Предупреждение озлокачествления заболевания требует срочных мер.

4. Злокачественная форма заболевания. После изменения клеточной структуры происходят мутации клеток под влиянием возбудителя папилломы 16, 18 и развивается онкологический процесс.

Папилломы человека 16, 18 типа представляют собой наросты округлой формы, связанные с телом посредством тонкой ножки. Образования имеют мягкую структуру, безболезненные. По цвету наросты практически не отличаются от здоровой кожи. На слизистых оболочках часто появляются остроконечные образование – кондиломы. Такие наросты чаще локализуются группами, внешне напоминающими коралл. В случае активизации заболевания могут проявляться более выраженные признаки вируса папилломы 16 типа: жжение и раздражительность в области гениталий, появление нехарактерных выделений с неприятным запахом. ВПЧ 18 типа вызывает около 60% случаев появления онкозаболевания женских и мужских половых органов.

Диагностика

Самым точным и диагностически важным методом является полимеразная цепная реакция или анализ ПЦР.

ПЦР основывается на определении ДНК вируса в исследуемой биологической среде, полученной от обследуемого. Это может быть кровь, слюна, моча, в которые для определения вируса вводят специальный реагент.

Типы 31, 33, 35  относятся к группе с высокой степенью онкогенного риска и чаще всего приводят к таким заболеваниям, как бовеноидный папулез и интраэпителиальную неоплазию шейки матки.

Бовеноидный папулез выявляется у мужчин, и риск развития этого заболевания повышен при чрезмерном количестве сексуальных партнерш.

Неоплазия шейки матки может быть легкой, умеренной и выраженной степени. В первом случае все изменения выявляются только при цитологическом исследовании мазка. Выраженная неоплазия считается уже интраэпителиальным раком. Неоплазия у женщин часто сочетается с образованием кондилом, возникающих под влиянием вируса 6 и 11 типов.

В случаях развития рака шейки матки, сначала появляется эрозия, затем дисплазия (3 степени, последняя – начало онкологии). Эти процессы, вызванные онкогенными ВПЧ 18, 33, 35 типов, Мужчины зачастую являются носителями ВПЧ 33, 51 и других типов. Иногда можно наблюдать появление некондиломатозных образований на теле, которые могут быстро вырастать, и так же быстро исчезать.

 

Показания к сдаче анализа

1. Болевые ощущения в нижней части живота, вовремя и после полового акта.

2.Наличие выделений, в том числе с примесью крови.

3. Диагностирование эрозии шейки матки.

4. Обнаружены остроконечные кондиломы во влагалище.

 

Диагностика

Для выявления ВПЧ у женщин, гинеколог проводит осмотр в кресле с использованием зеркала. Если на слизистой оболочке влагалища, стенки матки обнаружены плоские разрастания, или же на малых половых губах, вульве – остроконечные кондиломы, необходимо взять мазок для проведения цитологических исследований.

Когда разрастаний, вызванных ВПЧ , не обнаруживается, проводят кольпоскопию. Этот метод диагностики подразумевает изучение стенок влагалища и шейки матки под микроскопом. Если наружных проявлений не наблюдается, стенки смазывают 3% раствором уксусной кислоты – патологические образования белеют, а цвет здоровой слизистой оболочки не меняется.С помощью метода цепной реакции полимеразы (ПЦР) определяют наличие вируса в организме

ВПЧ 51, как и ВПЧ 31, относится к группе среднего онкогенного риска, путь передачи в основном половой, способствует появлению злокачественных образований половых органов. ВПЧ 51 типа помимо образований генитальных бородавок приводит к появлению гигантской кондиломы Бушке – Левенштенна. Риск возникновения злокачественных процессов повышается при частой смене половых партнёров и при гомосексуальных контактах.

ВПЧ 52 типа, как и ВПЧ 51, принадлежит к группе вирусов, провоцирующих онкологию. Основными причинами поражения организма является понижение работы защитных механизмов, эндокринные проблемы, курение, общие заболевания с угнетением иммунитета.

ВПЧ 56 типа. Попадает в организм через микротравмы на коже и через слизистую оболочку. Процесс чаще локализуется в матке, во влагалище, уретре, на головке полового члена. В группу риска попадают пациенты с пониженной иммунной системой, отягощенной наследственностью, с обострениями хронической патологии. ВПЧ 56 относится к группе высокого онкологического риска и при подтверждении диагностических обследований требует незамедлительного вмешательства.

Диагностика

Для выявления ВПЧ у женщин, гинеколог проводит осмотр в кресле с использованием зеркала. Если на слизистой оболочке влагалища, стенки матки обнаружены плоские разрастания, или же на малых половых губах, вульве – остроконечные кондиломы, необходимо взять мазок для проведения цитологических исследований.

Когда разрастаний, вызванных ВПЧ, не обнаруживается, проводят кольпоскопию. Этот метод диагностики подразумевает изучение стенок влагалища и шейки матки под микроскопом. Если наружных проявлений не наблюдается, стенки смазывают 3% раствором уксусной кислоты – патологические образования белеют, а цвет здоровой слизистой оболочки не меняется. С помощью метода цепной реакции полимеразы (ПЦР) определяют наличие вируса в организме

Папилломавирусы человека, в число которых входит ВПЧ 21 типа, поражают кожу и слизистые оболочки людей, инфекция обнаруживается в местах проникновения по наличию бородавок и кондилом

В группу возбудителей под этим названием входят штаммы, вызывающие на коже появление бородавок, доброкачественных опухолей на коже.

 Бородавки с вирусом, при наличии постоянно действующих факторов могут переродиться в раковые образования кожи. К таким причинам относятся:

1.Частое механическое раздражение папилломы.

2.Химическое воздействие на неё.

3.Резкое снижение иммунитета носителя вируса.

 

Заражение вирусом 21 типа происходит от контакта с больным человеком или бытовым путем – через вещи, на которые попал вирус

Симптоматика

Проявляются образованиями на руках в районе кистей, на пальцах и ладонях, шее, лице, у носа и губ,на подошвах.

По внешнему виду бородавки представляют собой плотный нарост ороговевшего эпителия телесного цвета, чуть светлее обычной окраски кожного покрова. Внутри нароста заметны черные точки – капилляры, которые были повреждены инфекцией. Форма бородавок преимущественно круглая, с ровными краями, они плотно прилегают к коже и не имеют ножки. Вокруг бородавок — здоровая кожа без всяких признаков покраснения, никаких болевых ощущений они не вызывают.

Перед произведением процедуры необходимо выполнить ряд требований:

1.Не жить половой жизнью два дня

2.Не принимать никаких лекарств.

3.Отказаться от химических веществ при купании

4.Не ходить в туалет 2 часа.

5.Не пить много жидкости.

 

Материал забора: Соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта.

Сдать анаиз на ВПЧ — 21 тип (6,11,44,16,18,26,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73, 82) в Екатеринбурге можно по адресам ул.Большакова д.68 и ул. Викулова 33/2

 

Папилломавирусы высокого канцерогенного риска. Генотипирование: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 56, 58, 59, 66 типы

Вирус папилломы человека (ВПЧ) — широко распространённое инфекционное заболевание мочеполовых органов, которое может стать причиной возникновения рака шейки матки у женщин и плоскоклеточного рака у мужчин.

Различные типы ВПЧ вызывают развитие:
цервикальной, вульвальной, влагалищной дисплазии шейки матки;
преинвазивного и инвазивного рака шейки матки, рака влагалища и перианальной области;
остроконечных кондилом половых органов, мочевых путей;
генитальных кондилом.
Пути распространения инфекции
Основной путь передачи ВПЧ — половой, но описаны случаи бытовой передачи инфекции. Женщины и мужчины подвергаются инфицированию с одинаковой частотой. Приблизительно у 70% обследованных, ВПЧ выявляется у обоих половых партнеров. Возможно внутриутробное инфицирование.

По данным некоторых исследователей, частота инфицирования вирусом прямо пропорциональна числу половых партнёров: при наличии одного партнера, ВПЧ выявляется у 17–20% женщин, при наличии 5 и более партнёров — у 70–80%.

Инкубационный период
Длительность инкубационного периода может длиться от 2 месяцев до 2–10 лет. Для ВПЧ характерно скрытое течение заболевания, при котором отсутствуют клинические проявления и при кольпоскопическом, цитологическом и гистологическом обследовании изменения не выявляются. В 30% случаев, в течение 6–12 месяцев может произойти избавление от вируса. Диагностика скрытой ВПЧ-инфекции осуществляется только методом ПЦР.

Клинические проявления

ВПЧ может по-разному воздействовать на эпителий: способствовать возникновению доброкачественных образований (папиллом, кондилом) или объединению ДНК папиллома-вируса с геном клетки, что приводит к дисплазии и неоплазии, в дальнейшем к раку. Наиболее частая область локализации рака — переходная зоне шейки матки в цервикальный канал.

Клинические формы папилломавирусной инфекции обнаруживают у 40–60% мужчин, являющихся половыми партнёрами инфицированных женщин. Поражения у них вызываются теми же типами ВПЧ, что и у женщин. В 2/3 случаев возникают характерные высыпания на коже и слизистых оболочках половых органов.

ПЦР анализ на ВПЧ 31,33 (мазок на ДНК вируса папилломы человека 16,18) со скидкой 50% в Lab4U

Срок исполнения

Анализ будет готов в течение 2 дней, исключая субботу, воскресенье и день забора. Срок может быть увеличен на 1 день в случае необходимости. Вы получите результаты на эл. почту сразу по готовности.

Срок исполнения: 2 дня, исключая субботу и воскресенье (кроме дня взятия биоматериала)

Подготовка к анализу

Заранее

Если вы беременны, перед сдачей мазков обязательно предупредите медицинский центр по телефону заранее.

Забор мазков на исследование осуществляется в кабинете гинеколога у женщин и уролога или венеролога у мужчин.

Забор у женщин не проводится во время менструации (на фоне кровянистых выделений) и не рекомендуется за 5 дней до начала предполагаемой менструации.

Общие правила подготовки:

  • обсудите с врачом прием антибактериальных препаратов и препаратов, содержащих микроорганизмы, т.к. это может приводить к ложноотрицательным и ложноположительным результатам,
  • рекомендуется проводить забор мазков не ранее, чем через 2 недели после законченного курса лечения,
  • 72 часа не вступайте в половой контакт,
  • для женщин 48 часов не проводите кольпоскопию и трансвагинальное УЗИ, не используйте местные хлорсодержащие и антибактериальные препараты.
В день сдачи
  • В день сдачи мазка не проводите гигиенические процедуры половых органов (для женщин также спринцевание влагалища, не используйте тампоны и влажные салфетки).
  • В течение 2-х часов до анализа воздержитесь от посещения туалета (при заборе мазка из уретры).

Процедура у мужчин
Для взятия мазка мужчина стоит, медработник убирает слизь и вводит в уретру одноразовый зонд на глубину до 3-4 см, осторожно двигая инструмент, извлекает его из уретры.

Процедура у женщин
Для взятия мазка женщина садится в гинекологическое кресло, медработник осматривает половые пути, вводит во влагалище зеркало — стерильный инструмент, убирает слизь.

Далее зондом или цитощеткой берёт материал из цервикального канала или с наружней части шейки матки (при наличии пораженных участков).

Информация об анализе

ДНК вируса папилломы человека тип 31 и/или 33 в пробе пациента — показатель инфицирования ВПЧ 31 и/или 33 типа. Относится к вирусам высокого онкогенного риска. Чувствительность и специфичность методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) — при определении ДНК ВПЧ, около 100%.

Метод исследования — ПЦР Real Time

Материал для исследования — Мужчины — соскоб из уретры, Женщины — соскоб из цервикального канала

Состав и результаты

Вирусы папилломы человека типы 31 и 33, определение ДНК

ДНК вируса папилломы человека тип 31 и/или 33 в пробе пациента — показатель инфицирования ВПЧ 31 и/или 33 типа. Вирусы папилломы человека (ВПЧ) — безоболочечные ДНК-вирусы, являющиеся представителями семейства Papillomaviridae. Вирусы передаются при микротравмах кожи и слизистых оболочек, а также половым путем. При родах вирусы передаются новорожденным. ВПЧ-инфекция относится к наиболее распространенной инфекции передающейся половым путём (ИППП) во всем мире. К группе риска по ВПЧ-инфекции можно отнести практически всех людей, живущих половой жизнью.

На сегодняшний день выделено более 100 типов ВПЧ, более 30 из которых способны инфицировать слизистую половых органов. ВПЧ могут оказывать продуктивное и трансформирующее воздействие на слизистую оболочку. Проявлением продуктивного воздействия являются папилломы и кондиломы, проявлением трансформирующего – дисплазии различной степени и рак. К вирусам высокого онкогенного риска относят типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68. Перечень типов ВПЧ высокого онкогенного риска постоянно расширяется за счет уточнения строения ДНК и выявления новых типов промежуточного риска. К вирусам низкого онкогенного риска относят 5 типов ВПЧ — 6, 11, 42, 43, 44.

ВПЧ инфицируют и размножаются в сквамозном эпителии кожи, образуя доброкачественные бородавки, и в слизистых оболочках, вызывая генитальные, оральные и конъюнктивальные папилломы, индуцируют пролиферацию эпителия. ВПЧ-инфекция может быть клинически выраженной, протекать субклинически или быть латентной. У женщин инфицируется и покрывается генитальными бородавками область преддверия влагалища, стенки влагалища, шейки матки, наружное отверстие уретры, анальная область. У мужчин поражается головка полового члена, крайняя плоть, мошонка, анальная область.

Особенностью ВПЧ является способность вызывать латентную инфекцию. ВПЧ может находиться внутриклеточно в неактивном состоянии до или после активной инфекции. При этом происходит транскрипция и экспрессия, но инфекционных вирусов не образуется. При нормальном иммунитете рецидивы ВПЧ-инфекции маловероятны. Однако при иммунодефиците (иммуносупрессивная терапии или ВИЧ-инфекция) увеличивает риск новообразований.

ВПЧ-инфекция является причиной рака шейки матки, опухолей половых органов, остроконечных кондилом и папилломатоза гортани. Ежегодно в мире, в основном в развивающихся странах, около 250 000 женщин умирает от рака шейки матки. При этом разные типы ВПЧ ассоциируются с разными заболеваниями. Например, ВПЧ типа 16 и 18 вызывают рак шейки матки, ВПЧ типа 2 и 27 – простые бородавки, ВПЧ типа 6 и 11 – остроконечные кондиломы и папилломатоз гортани.

Дисплазию эпителия шейки матки по Европейской классификации в зависимости от выраженности клеточной атипии делят на легкую, умеренную и тяжелую. По классификации, принятой в США, выделяют дисплазию низкой и высокой степени. Легкая дисплазия эпителия ассоциируется с ВПЧ как высокого, так и низкого онкогенного риска. Тяжелая дисплазия эпителия шейки матки ассоциируется с ВПЧ высокого онкогенного риска.

Чувствительность и специфичность метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) при определении ДНК ВПЧ около 100%.

ВПЧ, сдать анализ на ВПЧ (21 тип)

Метод определения ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Исследуемый материал Соскоб эпителиальных клеток урогенитального тракта

Доступен выезд на дом

Краткое описание исследования «Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (Вирус папилломы человека, Human papillomavirus, HPV) 21 типа (6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) + КВМ»  

Вирус папилломы человека (ВПЧ, Human papillomavirus, HPV) относится к малым ДНК-содержащим вирусам, которые инфицируют эпителиальные клетки и индуцируют пролиферативные поражения кожи и слизистых оболочек. В настоящее время известно около ста типов ВПЧ с различным онкогенным потенциалом, которые условно объединяют в группы высокого и низкого онкогенного риска. Более 90% всех цервикальных карцином позитивны к присутствию ВПЧ. Наиболее часто в биоматериале из опухолей шейки матки обнаруживают 16-й и 18-й типы. Выявление ДНК ВПЧ не подтверждает наличие злокачественного процесса, в большинстве (до 90%) случаев в течение 12-36 месяцев происходит элиминация вируса и самоизлечение. При длительной хронической персистенции вируса и в зависимости от его типа повышается риск развития онкологического процесса. Диагностика заболевания требует дополнительного цитологического, гистологического исследования и динамического наблюдения. 

Инфицирование ВПЧ 6, 11, 44 типов может привести к развитию остроконечных кондилом (аногенитальных бородавок). Возбудитель передается при половых контактах, а также может переходить от матери к плоду, вызывая папилломатоз гортани у ребенка. Инкубационный период составляет от нескольких недель до нескольких месяцев. Характер разрастаний и объем пораженных участков варьирует от практически незаметных до обширных. Возможна злокачественная трансформация инфицированных клеток. 

С какой целью проводят Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (Вирус папилломы человека) 21 типа

Количественное выявление ДНК ВПЧ в урогенитальном соскобе используется для подтверждения инфицированности и персистирования 21 типа ВПЧ низкого и высокого онкогенного риска, для оценки канцерогенного риска при дисплазии эпителия шейки матки, для контроля эффективности противовирусной терапии.  

Количественное определение ДНК ВПЧ позволяет врачу-клиницисту подобрать оптимальную схему лечения для каждого пациента и при необходимости контролировать эффективность терапии. 

Особенности проведения теста «Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (Вирус папилломы человека, Human papillomavirus, HPV) 21 типа (6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) + КВМ» 

Поскольку ВПЧ инфицирует эпителиальные клетки, необходимым условием получения достоверного результата является соблюдение техники взятия соскоба. В состав тестов по диагностике и мониторингу ВПЧ введен специальный параметр – контроль взятия материала (КВМ). КВМ – это тест по определению количества геномной ДНК человека в биоматериале, источником которой служат эпителиальные клетки, попавшие в пробу. 

Аналитические показатели:  

определяемый фрагмент – уникальная последовательность ДНК ВПЧ 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82 типов; специфичность определения – 100 %; 

чувствительность определения – 100 копий ДНК ВПЧ в образце.

Литература

Основная литература 

  1. Профилактика рака шейки матки: Руководство для врачей. — М.: Изд. «МЕДпресс-информ». 2008:41. 
  2. Заболевания шейки матки и генитальные инфекции. Под ред. проф. В.Н. Прилепской. — М.: Изд. «ГЭОТАР-Медиа». 2016:384.  
  3. Папилломавирусная инфекция. Пособие для врачей. Под ред. проф. д.б.н. В.М. Говоруна. 2009:55.  
  4. Bekkers R., Meijer C., et al. Effects of HPV detection in population-based screening programmers for cervical cancer: a Dutch moment. Gynecologic oncology. 2006;100(3):451-454. 
  5. Khan M. et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus (HPV) type 16 or 18 and the possible utility of type specific HPV testing in clinical practice. Journal of the National Cancer Institute. 2005; 97:1072-1079. 
  6. Snijders J., Meijer C. The value of viral load in HPV detection in screening. HPV today. 2006;8:8-9.

Как жить с вирусом папилломы?

Прошло больше сорока лет, когда в опухолевых клетках шейки матки был обнаружен вирус папилломы человека (ВПЧ), и около 10 лет, когда за это открытие была присуждена Нобелевская премия. Современные медико-биологические технологии позволяют идентифицировать более 100 типов ВПЧ. Из этого множества заслуживают пристального внимания ВПЧ высокого онкогенного риска (16,18,33,35,45,56 и другие типы). ВПЧ настолько распространен, что у 80-90% женщин, живущих половой жизнью, находят его в слизистой оболочке шейки матки. Но как разобраться, кому инфекция опасна, а кому нет.

Исход взаимодействия вируса и клеток эпителия определяется количеством вирусных агентов и состоянием защитной (иммунной) системы. Проникновение ВПЧ чаще всего происходит половым путем, поэтому, чем больше половых партнеров, тем больше вируса попадает в шейку матки. С помощью современных модификаций ПЦР-диагностики можно установить количество ВПЧ и определить вирусную нагрузку. Чем она выше, тем риск развития дисплазии шейки матки выше.

С момента внедрения ВПЧ в эпителий слизистой шейки матки до развития угрозы для жизни женщины проходит от 5 до 15 лет. Этот срок укорачивают факторы, угнетающие иммунную систему: длительные хронические стрессы, злоупотребление алкоголем и курением табака, диабет, прием иммунодепрессантов, частое ионизирующее облучение.

Выделяют три уровня вирусной нагрузки и три степени дисплазии

Рассмотрим варианты.
1. Вирусная нагрузка низкая, дисплазии нет. Иммунитет справиться с вирусом без дополнительного лечения. Нужен только контролировать, чтобы вирусная нагрузка не увеличилась.

2. Вирусная нагрузка средняя или высокая, дисплазии нет. Требуется комплексное лечение с последующей оценкой уровня вирусной нагрузки. Наблюдение в кабинете патологии шейки матки для раннего выявления дисплазии шейки матки.

3. Вирусная нагрузка низкая, дисплазия легкой или средней степени. Требуется комплексное лечение с последующей оценкой уровня вирусной нагрузки и степени дисплазии. Если эффекта нет, то требуется локальная деструкция шейки матки (коагуляция или эксцизия). При уменьшении степени дисплазии — наблюдение в кабинете патологии шейки матки для контроля над степенью дисплазии шейки матки.

4. Вирусная нагрузка средняя или высокая, дисплазии легкой и средней степени. Требуется комплексное лечение с последующей оценкой уровня вирусной нагрузки и степени дисплазии. Наблюдение в кабинете патологии шейки матки для контроля над степенью дисплазии шейки матки. При переходе легкой дисплазии в среднюю, или сохранение дисплазии средней степени после консервативного лечения, показана локальная деструкция шейки матки (коагуляция или эксцизия) или полное ее удаление при наличии других заболеваний на шейке матки.

5. Уровень вирусной нагрузки любой, дисплазия тяжелой степени. Лечение только оперативное: удаление шейки матки.
Для укрепления иммунной системы разработана вакцина против ВПЧ. Наибольшая эффективность достигается при вакцинации детей 12-13 лет или до начала половой жизни. Кроме этого, допускается вакцинирование женщин до 35 лет, живущих половой жизнью, при низком и среднем уровне вирусной нагрузки или с дисплазией легкой степени.

Присутствие ВПЧ в шейке матки – это не приговор и не рак. С ним можно жить, контролировать его, а врач поможет подобрать самую оптимальную схему наблюдения.

Записывайтесь на кольпоскопию шейки матки.

Лебедевский Валерий Степанович

Врач гинеколог Минкевич Константин Владимирович ответы на вопросы

Вопросы и ответы

Авторские орфография и пунктуация сохранены

 

 

 

 

Вопрос: Что такое кондиломы? и почему они появляются?

Ответ Минкевича К.В. : Кондиломы – это следствие инфицирования вирусом папилломы человека и передается половым путем. Кондиломы бывают в виде гребешковых или слизистых разрастаний.

 

Вопрос: Добрый день! Помогите разобраться чем же кондиломы отличаются от бородавок и папилом? Или это все одно и тоже, просто название зависит от места, где эти штуки появляются?

Ответ Минкевича К.В. : Кондиломы иначе называются генитальные бородавки, то есть следует из названия их локализация генитальная область. В других областях это не кондиломы. Папилломы это сосочковые разрастания и они могут локализоваться где угодно.

 

Вопрос: Добрый день. Удаляли папиллому на половых губах радиоволновым методом. Прошло 3 дня — дорожка из ранки покрылась бело-желтой корочкой, похожей на гной. Подмываюсь раствором марганцовки, пользуясь эпиген спреем. Так должно быть?

Ответ Минкевича К.В. : Не беспокойтесь, процесс эпителизации (заживления) именно так и проходит. «Бело-желтая корочка», которую Вы описываете, называется струп. Лучше используйте не марганцовку, а порошок «Банеоцин» 2 раза в день (утро-вечер).  

 

Вопрос: Добрый день!обнаружили ВПЧ онкогенного типа, назначили лечение свечами Полиоксидоний, отправили на лазерное удаление кондилом и сдачу анализа на определение вирусной нагрузки.После прохождения всех этих процедур как лучше предохраняться и каков шанс заражения партнера этим вирусом после лечения?А так же во время лечения стоит ли вообще вести половую жизнь или лучше воздержаться?Спасибо за ответ.

Ответ Минкевича К.В. : Волноваться не надо, ВПЧ имеет, большую распространенность и в большинстве случаев иммунная система с ним справляется самостоятельно, даже без лечения. Наличие кондилом в области половых органов подлежит удалению, и после этого половая жизнь не рекомендуется до момента эпителизации раневой поверхности, примерно от 2 до 3 недель. В дальнейшем ограничения в половой жизни нет, если у полового партнера нет кондилом на половом члене, если есть, то их тоже надо удалять. Поэтому наличие ВПЧ по анализам, без кондилом, не является отказом от половой жизни. Эффективного метода предохранения (100%) от передачи ВПЧ не существует, считается презерватив наиболее рациональным методом от передачи инфекции. После удаления кондилом риск передачи  ВПЧ бояться не надо.

 

Вопрос: Появился зуд в анусе.Затем почувствовала образование утолщения между анусом и влагалищем. Зудел именно этот участок. Что это? К какому врачу надо обращаться?

Ответ Минкевича К.В. : Обратитесь к гинекологу, с жалобами на появления возможного образования с зудом в области промежности.

 

Вопрос: Здравствуйте. у меня была произведена радиоволновая эксцизия шейки матки в пределах здоровых тканей. В данный момент прохожу лечение свечками. Но пришел анализ на гистологию и патоморфологический диагноз: плоская кондилома.L-SIL. Выписали уколы Аллокин альфа шесть инъекций через день. Уколы дорогие. Подскажите есть ли аналогичный препарат и стоит ли их колоть. Спасибо.

Ответ Минкевича К.В. : Основное лечение заболевания шейки матки (плоская кондилома) Вам выполнили, это ПЭЭ (радиоволновая эксцизия). Противовирусные препараты, к которым относится Аллокин-альфа, это лекарства с не доказанной эффективностью. Диагноз плоская кондилома, это следствие влияния вируса папилломы человека (ВПЧ), поэтому врачи после удаления измененной слизистой, для профилактики рецидива, назначают различные противовирусные препараты. Инъекции, которые Вам прописали, надо еще правильно выполнять – подкожно, в домашних условиях (помощь родственников) этого не сделать, поэтому придется ходить на процедуры, а это дополнительные траты. В своей практике, много лет назад, не получил хорошего результата при лечении кондилом, поэтому от этого препарата отказался. С целью профилактики назначаю противовирусные препараты, но предупреждаю пациентов, что лекарства  без доказанной эффективности. Препаратов выпускаемых в нашей стране много, рекомендую табл.  инозин пранобекс, спрей с  глицирризиновой кислотой.      

 

Вопрос: Здравствуйте! Меня зовут Татьяна, мне 24 года. Подскажите пожалуйста как избавиться от остроконечных кондилом? Каким образом можно это зделать. Есть ли в г. Чите клиника, где можно удалить кондиломы с помощью лазера. Помогите, очень жду ответа

Ответ Минкевича К.В. : Из г. Читы у меня не было врачей на учебе по применению лазера в гинекологии, поэтому порекомендовать врача или клинику не могу. Если не знаете куда обратиться, начните лечение с домашнего метода лечение. К Международным рекомендациям по лечению кондилом наружных половых органов относится применение крема имихимод (не индийского производства). Это противовирусный крем наносится на кожу и на кондиломы находящиеся на ней 3 раза в неделю (например: понед-среда-пятница) на ночь. Утром эту область необходимо вымыть  водой с мылом. Во время лечения исключить половую жизнь. Курс лечения до исчезновения кондилом, но не более 16 недель. Эффект от лечения через 4 недели, но может и позже.

 

Вопрос: здравствуйте. у меня появились остроконечные кандиломы. я их удалила, но очень боюсь рецедива. нужно ли обрабатывать кремом алдара просто поверхность кожи, где они были, чтобы не было рецедива? какое время? и исчезают ли кандиломы внутри влагалища, если обрабатывать только наружные половые губы?

Ответ Минкевича К.В. : После удаления кондилом, наносить крем Алдара на кожу, при их отсутствии не надо. В случае появления новых бородавок (рецидив кондилом) необходимо начать лечение кремом Алдара. Это правильный подход с отличным результатом, не проводящим к рецидиву. Что касается кондилом на слизистой влагалища, то в этом случае наиболее эффективный подход это лазерное удаление.

 

Вопрос: Добрый день! У меня обнаружили и удалили кондиломы около трех месяцев назад. С тех пор они не появлялись. Но я много читала про них и знаю, что они часто рецидивируют. Через какое время они появляются снова? Как часто нужно посещать гинеколога? И что можно предпринять чтобы избежать рецидива? Спасибо заранее!

Ответ Минкевича К.В. : Катя, эффективного средства для профилактики рецидива кондилом не существует. Многие врачи в нашей стране, и я в частности, рекомендуют прием противовирусных препаратов. Их эффективность не доказана, в некоторых случаях есть положительная результат, и у пациентов имеется безрецидивное течение. Этих препаратов достаточно много, предсказать, что сработает невозможно. В этих случаях надо полагаться на опыт гинеколога, у которого наблюдаетесь. Рецидив кондилом зависит от активности ВПЧ (вируса папилломы человека) чаще генотипов 6 или 11 и наступает в течение 6 месяцев.

 

Вопрос: Подскажите, пожалуйста, прочитала , что вы рекомендуете имихимод для лечения кондилом. У меня 2 года назад обнаружили ВПЧ. Кондиломы на коже в паху, а также у уретры мазала алдарой, они ушли почти все, и вирусная нагрузка снизилась. Оставшиеся у уретры прижгли солкодермом 2 раза. Через 3 месяца кондиломы снова появились, там же у уретры, на коже в паху и теперь и внутри влагалища. Поможет ли повторный курс алдары? И могли ли они снова разрастись, из-за прижигания солкодермом? Спасибо

Ответ Минкевича К.В. : Юлия, если первое лечение было эффективным, то и второй курс тоже должен быть результативным. Только в этот раз продлите курс лечения, но не более 16 недель. Солкодерм не вызывает рецидив кондилом. Если у Вас были сексуальные отношения, обратите внимание, нет ли похожих разрастаний на половом члене у партнера, если имеются, то необходимо проходить совместное лечение.

 

Вопрос: здравствуйте! скажите пожалуйста, есть ли что-то общее между кондиломами у мужа и кандидозом у жены?

Ответ Минкевича К.В. :Мария, связь может появиться, если на фоне кандидозного вульвовагинита, у Вас тоже проявятся эти образования. Сексуальные отношения, если у одного из партнеров имеются кондиломы, надо прервать до их излечения. Это вирусное заболевание чаще всего передается половым путем. Надо пройти осмотр у гинеколога и, если у Вас кондилом нет, пройти курс противогрибкового лечения. 

 

Вопрос: Добрый день! Мне 27 лет, не рожавшая, не было обортов и выкидешей. В 2012г. у меня обнаружили ВПЧ тип 11, На тот момент никак себя не проявлявший. До этого мне всегда ставили диагноз-эрозия шейки матки, никаких других заболеваний не было. Но в этом году появились кондиломы шейки матки, это выяснилось при осмотре. Я так думаю из-за сильно сниженного иммунитета, долго лечила воспаление почек. Цитология ничего не показала, как мне сказали результат хороший. Мне назначили циклоферон в/м и во влагалище. Я сделала 2 курса с перерывом 10 дней. После очередного осмотра врач сказал, что кондилом стало меньше и эрозия не такая сильная. Сейчас мне назначили спронцивание тысечелистником, чистотелом и тампоны с алоэ и медом, облипиховые тампоны. Скажите пожалуйста, насколько эффективно данное лечение? Обязательно ли лазерное удаление кондилом или все таки можно лечить медикаментозно? Могут ли сейчас паппиломы появиться на лице, теле? Может ли вирус опять уснуть и себя не проявлять и что для этого нужно еще сделать?

Ответ Минкевича К.В. : Вирус папилломы человека (ВПЧ) 6 или 11 типа чаще всего вызывают рост кондилом в аногенитальной области. Самое эффективный и щадящий способ лечения кондилом у нерожавших девушек, это лазерное воздействие. Консервативное лечение, как у Вас (циклоферон), тоже бывает эффективным. Дальнейший курс терапии спринцевание тысячелистником, чистотелом и тампоны с алоэ и медом, облепиховые тампоны, вряд ли может считаться борьбой с кондиломатозом. Курс лечения прописывает врач, после осмотра и полученных результатов обследования. Поэтому прогнозировать результат Вашего лечения без конкретного понимания проблемы нельзя. Кожные папилломы не имеют связи с кондиломами, располагающимися на половых органах. Лучшая профилактика кондилом, это их удаление и если они рецидивируют крем имихимод (не индийского производства).

 

Вопрос: Добрый день! Пришла на осмотр к гинекологу ,пришла просто провериться ,врач обнаружила у меня кондиломы на обеих стенках влагалища, я даже и не знала что за вирус ВПЧ ,сдала анализы на тип ,уреаплазмоз ,микоплазмоз, и еще на какие то инфекции; жду результатов очень боюсь, откуда с мужем живем 11 лет, хотели планировать второго ребенка, как сейчас быть что делать! Начиталась на форумах не знаю что и думать!

Ответ Минкевича К.В. : Для начала не нервничайте и дождитесь результатов анализов. Иногда врачи путают волнистую структуру слизистой влагалища и разрастания в виде кондилом. Чаще кондиломы образуются на наружных половых органах. Если Вы сомневаетесь что это кондиломы, сходите на прием к другому гинекологу, для подтверждения этого диагноза. 

 

Вопрос : Как избавится от кандилом в интимной зоне?

Ответ Минкевича К.В. : Надо обратиться к гинекологу и он в зависимости от их количества порекомендует метод лечения. Это может быть лазерное удаление, химическое прижигание (ферезол или кондилин), можно в домашних условиях применить крем имихимод. Он наносится на кожу 3 раза в неделю, через день на ночь и только на кожу. Эффект от лечения наступает примерно через 4 недели.

 

Вопрос: Здравствуйте! У меня кондиломы на внешних и внутренних половых губах. Не знаю, есть ли внутри. Подскажите, пожалуйста, лечите ли вы пациентов от вируса папиломы,каким методом и по какой цене возможно у вас их удалить? Заранее благодарю. Город новосибирск.

Ответ Минкевича К.В. : да, занимаюсь лечением патологии шейки матки, влагалища и вульвы в амбулаторных и стационарных условиях. В частности, лазерным, радиоволновым с аргоноплазменной аблацией лечением заболеваний, и кондилом тоже, этих локализаций. Пациентки приезжают на лечение из других регионов, но решение принимается после осмотра и что-то обещать заранее неправильно. Стоимость удаления можно узнать на сайте мед центра «МедЛаб» С-Петербург, где принимаю. 

 

Вопрос: Добрый день! От кондилом пользуюсь прописонным врачем кремом Аладра. Но пока никаких результатов. прошло 2 недели. Сколько мне ждать, чтобы увидеть продвижения в лечении?

Ответ Минкевича К.В. : Эффект от применения крема Алдара (не индийского производства) у каждого пациента наступает в разные сроки от 4 недель до 8 недель от начала применения, в зависимости от размера и количества кондилом. Окончательное избавление может наступить после завершения полного курса лечения – 16 недель.

 

Вопрос: Здравствуйте, у моей дочери именно такая проблема о которой написано в статье, удаляла много раз кандиломы лазером, но они появляются снова и снова, ребёнок в отчаянии, у неё раны в местах удаления, врач посоветовала следующее удаление провести с помощью азота.Я ничего об этом не знаю, как помочь дочери?Что вы посоветуете?

Ответ Минкевича К.В. : Криотерапию, удаление азотом, не посоветую, так как и после лазера могут быть рецидивы. В Вашем случае крем имихимод (не индийского производства) дает больше шансов избавиться от кондилом без удаления в домашних условиях. Крем (1 саше-пакетик) полностью наносится на кожу в области кондилом, если кондиломы локализуются на коже, то их тоже обработать. Нанесения крема проводится вечером, перед сном, 3 раза в неделю (например: понед-среда-пятница). Курс лечения 16 недель, первая положительная реакция может появиться через 4 недели от начала лечения. Обязательно дополнительно прочитайте инструкцию. 

 

Вопрос: Здравствуйте! К какому врачу нужно обратиться с проблемой кондиломы в паху. Спасибо!

Ответ Минкевича К.В. : Вам следует обратиться к гинекологу и если у врача возникнуть сомнения в диагностике, то следующим специалистом будет дерматовенеролог.

 

Вопрос: Здравствуйте! Моему новообразованию уже лет десять, оно находится снаружи на большой губе, на тоненькой ножке, диаметром 1,5 сантиметра — папиллома? или кондилома? , рядом других новообразований нет. Одно из моих хронических заболеваний — гипотиреоз 2ст. Мне 48 лет. Что бы Вы мне посоветовали? Могу ли я воспользоваться для лечения кремом имихимод?

Ответ Минкевича К.В. : Нет, самостоятельно Вы не можете пользоваться кремом имихимод. Необходима консультация дерматолога, потому что это может быть дерматологическое заболевание – невус. При этом заболевании крем не поможет.

 

Вопрос: Здравствуйте. Я лечила кондиломы анального канала. С начало лазером, затем операция , т.к. они были глубоко. Сейчас они появились снова. Скажите возможно ли эндоскопическое лечение без хирургии? Спасибо!

Ответ Минкевича К.В. : Кондиломы часто после удаления рецидивируют. Не волнуйтесь, раз уже было лазерное удаления и оперативное лечение, рекомендую крем имихимод. Это противовирусный препарат с хорошим эффектом, является препаратом 1 линии лечения кондилом в мире. Крем необходимо наносить на кожу в области ануса 3 раза в неделю, на ночь. Перед применением следуйте инструкции. Эффект наступает через 4-8 недель, и кондиломы исчезают.

 

Вопрос: здравствуйте, подскажите пожалуйста чем можно лечить кондиломы, они появились на интимных местах, дискомфорта нет, но немного в панике. В больницу обратиться пока не могу, не дешево это. Пробовала выжигать йодом, вроде стало проходить, может еще есть какие либо терапевтические препараты!? Подскажите пожалуйста! Заранее благодарна.

Ответ Минкевича К.В. : Если Вы не имеете возможность обратиться к гинекологу и Вы уверены что это кондиломы аногенитальной области, то существует домашнее лечение. Если это образование не кондиломы, то лечение не поможет. Обработка кондилом химическими растворами (кондилин или ферезол) или крем имихимод. Кондилином или ферезолом обрабатываются только сами бородавки (кондиломы). Крем наносится на кожу, где расположены кондиломы (можно и на сами кондиломы, если они расположены на коже) 3 раза в неделю, на ночь.  В любом случае лечение лучше не начинать без консультации врача.

 

Вопрос: Возможно ли удаление кондилом не хирургическими методами, а с помощью лекарственных препаратов

Ответ Минкевича К.В. : Возможно. Химическим методом, обработка кондилом кондилином или ферезолом. Более эффективный метод, это обработка кожи, где расположены кондиломы (можно и на сами кондиломы, если они расположены на коже) кремом имихимод. Крем наносится 3 раза в неделю, на ночь и кондиломы исчезают через 4-8 недель. Инструкцию перед применением необходимо изучить.

 

Вопрос: возможно заразиться остроконечными кондиломами во время орального секса? как они могут выглядеть во рту?

Ответ Минкевича К.В. : Если во время орального секса у полового партнера на члене были бородавки (кондиломы), то шанс заразиться высокий. На слизистой ротовой полости появляются разрастания (бородавки). Заражение вирусом папилломы человека при оральном сексе происходит не всегда, поэтому, если во рту не появилось образований волноваться не стоит. В этой ситуации необходима консультация стоматолога.

 

Вопрос: Удалили кондиломы влагалища лазером. Врач сказала подмываться с хлоргексидином-это как обычное подмывание? И как пользоваться бепантеном?

Ответ Минкевича К.В. : после удаления кондилом влагалища лазером обрабатывать влагалище хлоргексидином и бепантеном не надо. Для эпителизации раневой поверхности влагалища лучше подходят вагинальные свечи Гинофлор-Э или ничем не обрабатывайте.

 

Вопрос: Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста, эффективные средства для лечения кондилом.

Ответ Минкевича К.В. : быстрый и косметический способ удаления кондилом, это лазерное удаление. Медленный способ, это обработка химическими растворами (кондилин, ферезол). Длительный, но самый эффективный (меньше рецидивов кондилом) крем имихимод.

 

Вопрос: Здравствуйте! У меня год назад обнаружили ВПЧ 16 и 18 типов и остроконечные кондиломы (на малых половых губах), но врач удалять их особо не торопится: говорит, надо сначала разобраться с эрозией шейки матки, а потом уже с кондиломами решать. За последний месяц кондиломы увеличились по размеру, и их стало больше. Меня это очень пугает. Тем более, как мне сказали, эти типы ВПЧ могут вызвать рак. Скажите, действительно связаны ли как-то кондиломы с онкологией? Опасны ли они? Заранее спасибо!

Ответ Минкевича К.В. : Кондиломы очень редко озлокачествляются. Если у Вас цитологический мазок с шейки матки без атипии, надо как можно быстрее приступать к удалению кондилом наружных половых органов. Кондиломы очень быстро растут, и увеличиваются в размерах.

 

Вопрос: Здравствуйте, у меня кондилом нет, но у моего полового партнера (первый секс был месяц назад) обнаружили и удалили кондилому. Что мне делать? пройти обследование? Какова вероятность того, что я тоже заразилась? Можно ли лечить этот вирус до появления самих кондилом?

Ответ Минкевича К.В. : Вирус папилломы человека (ВПЧ) не всегда передается половым путем. Заранее лечиться не надо. Сдайте мазок ПЦР на ВПЧ и, даже если будет обнаружен вирус, лечиться не надо. С ним будет бороться Ваша иммунная система, и у большинства людей она его элиминирует (убивает) без всякого лечения. Лечение необходимо начинать, если появятся бородавки (кондиломы) на половых органах.

 

Вопрос: Добрый день. Подскажите, где можно купить крем, Имихимод! Я проживаю в Москве. Заранее спасибо всем.

Ответ Минкевича К.В. : Не знаю. Я живу в С-Петербурге, и мои пациенты покупают в аптеках. Наверное, о наличии крема узнают в справочном аптек или в интернете (где купить имихимод в Москве).

 

Вопрос: Здравствуйте. У меня обнаружили остроконечные кондиломы. Мой врач обязывает меня сдать анализы на хламидии и уреаплазму, мотивируя тем, что без них не может начать лечения. Обязательно ли их сдавать?

Ответ Минкевича К.В. : Чтобы лечить кондиломы аногенитальной области не обязательно сдавать анализы на скрытые инфекции, к которым относятся хламидии трахоматис и уреаплазма уреалитикум. Может быть, врач диагностировал у Вас воспалительный процесс, и хочет его исключить. Если удалить кондиломы  на фоне воспаления, то процесс эпителизации (заживления) будет длительным.

 

Вопрос: Как убрать кондилому на языке?есть ли какое лечение?

Ответ Минкевича К.В. : На языке кондиломы располагаются сбоку и на его корне (нижняя поверхность), где нежная слизистая. Сходите на прием к хирургу-стоматологу, который владеет лазерным удалением.

 

Вопрос: Здравствуйте. Недавно обнаружила у себя на слизистой около половых губ небольшие образования похожие на бородавки. Дело в том что у моего партнера на лобковой зоне имеются две бородавки, могла ли я заразиться ими от него? Мы вместе год, а у меня появились только недавно, сможем ли мы и дальше вести половую жизнь?

Ответ Минкевича К.В. : Без осмотра трудно оценить, что за образования появились, у Вас и есть у полового партнера. Вам необходима консультация гинеколога, потому что это могут быть не кондиломы, а атерома или воспаление волосяного фолликула или контагиозный моллюск. Любое образование требует диагностики, и может быть не одного специалиста, а нескольких (еще и дерматолога). Для начала сдайте мазок методом ПЦР на ВПЧ (вирус папилломы человека), который является источником роста кондилом. Если врач подтвердит диагноз кондиломатоз половых органов, их необходимо удалить

Вам и Вашему половому партнеру. Половую жизнь на это время необходимо прервать.

 

Вопрос: Здравствуйте. Лечила 6лет назад остроконечную кондилому, они были около уретры и влагалища. Почему опять появились?

Ответ Минкевича К.В. : Возможно 2 варианта рецидива. Первый вариант: видимые кондиломы в прошлый раз удалили, а вирус папилломы (ВПЧ) остался. Ослабление иммунитета (стресс, беременность и другие факторы) способствуют активности вируса и началу роста новых кондилом. Поэтому после лечения необходимо было следить 1 раз в год за наличием ВПЧ в организме (мазок ПЦР на ВПЧ). Второй вариант: Вы заразились вирусом снова.

 

Вопрос: Добрый день. Пару месяцев назад в нижней части ягодиц (не в промежности, а именно на коже- приблизительно в месте, где мы садимся) появились пара прыщиков. Сначала думала, обыкновенные гнойнички, мазала зеленкой, прижигала марганцовкой, спиртовым раствором. Не помогло. Они не чешутся, никак не беспокоят, единственно -увеличились в размере и стали будто ороговевшие. И через месяц еще три таких штучки на лобке появилось. К врачу не ходила, ужасно стесняюсь. Паникую, не при смене ли полового партнера произошло заражение. Проконсультируйте пожалуйста, что это может быть и как от этого избавиться?

Ответ Минкевича К.В. : Вам необходима консультация дерматолога. Судя по Вашему описанию это заболевание, называется контагиозный моллюск, но без осмотра я боюсь ошибиться. Половой партнер здесь не причем, и стесняться осмотра врача не надо. Это вирусное заболевание, заражение происходит бытовым способом, например, через песок на пляже. Лечение: лазерное удаление образований или их выдавливание в сочетании с приемом декариса. Чтобы был эффект от лечения, сначала проконсультируйтесь у специалиста.

 

Вопрос: здравствуйте. я обнаружила у себя какие то наросты в интимных местах. к какому врачу мне обратиться???

Ответ Минкевича К.В. : Вам необходима первичная консультация гинеколога, если врачу будет непонятно заболевание, тогда обратитесь к дерматовенерологу.

 

Вопрос: Здравствуйте, у меня кондилома, гинеколог сказала, что может пройти само, будто образовалось из-за молочницы, стоит ли верить этому или лучше обратиться дерматовенерологу? Спасибо

Ответ Минкевича К.В. : Появление кондилом, это результат инфицирования вирусом папилломы человека (ВПЧ). Этот вирус, как правило, передается половым путем. Дрожжевой кольпит (молочница), это следствие нарушения микрофлоры влагалища, что может произойти в результате инфицирования ВПЧ. Дрожжевой кольпит лечится назначением противогрибковых свечей, а кондиломы необходимо удалить. В интимных местах лечением кондилом занимаются в основном гинекологи, но можно лечиться и у дерматовенеролога. Какому врачу Вы доверяете, у того и лечитесь. Действительно в некоторых случаях кондиломы самостоятельно исчезают, но в любом случае врачи рекомендуют противовирусное лечение (местное или общее или комбинированное), чаще настаивают на удалении кондилом.

 

Вопрос: Девушке 20 лет, у нее влагалищные кондиломы, нам сказали их удалять, очень боимся их повторного появления и конечно рубцов. Живем в Санкт-Петербурге. Посоветуйте, что делать

Ответ Минкевича К.В. : Влагалищные кондиломы лучше удалять с помощью лазера. Тогда рубцов не будет, это эффективная косметическая операция. Рецидив не гарантирует любой метод удаления. Можете обратиться для осмотра, я консультирую в Санкт-Петербурге.

 

Вопрос: Здравствуйте! Если кондиломы только на слизистой, то как поможет крем, если его наносить только на кожу рядом? И может ли помочь крем избавиться от самого папиломовируса или только от кондилом? Слышала также, что крем алдара лучше покупать израильский, который в России не продается. В чем отличие от нашего? И где можно его заказать?

Ответ Минкевича К.В. : Крем имихимод действует на рецепторы естественного иммунитета, стимулируя выработку интерферона и привлекая в эту зону и другие клетки иммунной системы. Это приводит к уменьшению и исчезновению кондилом не только в месте нанесения крема, но в значительной зоне окружающее это место. Также крем способствует снижению количества ДНК вируса в клетках, что избавляет организм от ВПЧ. В нашей стране продается крем имихимод шведской и индийской компаний (индийского производства не покупайте). Шведский крем работает хорошо (давно знаю и применяю), про израильский не знаю. 

 

Вопрос: У меня был половой контакт с мужчиной, у которого на половом члене ниже головки была маленькая папилломка, мы не предохранялись, скажите есть ли опасения для меня прошло 2 месяца, может мне сдать анализ какой то?

Ответ Минкевича К.В. : Сдать анализ с шейки матки и вульвы на вирус папилломы человека (ВПЧ) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Наличие вируса папилломы, который действительно передается половым путем, не должен вызвать у Вас панику. Он очень распространен, и с вирусом борется иммунитет самого человека, и в 80% случаев справляется с ним без приема лекарств. Проявление вируса после полового контакта не предсказуемо, в среднем до 6 месяцев.

 

Вопрос: Добрый день, Константин Владимирович! Мне 23 года и недавно возникли образования на гениталиях. Я сходила к врачу, сказали, что это остроконечные кондиломы. Предложили сделать операцию. Но я ужасно боюсь. Хирургические методы для меня — крайность. Прочитала в Вопросах и Ваших ответах про крем Алдара. По Вашему мнению, мазь алдара достаточно эффективный способ удаления кондилом и может служить альтернативой деструктивному методу лечения? Или лучше обратиться к хирургу, который все вырежет за один раз? Также я вычитала, что после операций достаточно часты случаи повторного появления бородавок. Может есть какая-то статистика процента рецидивов после различных методов лечения? Под нож ложится не хочется, но еще меньше хочется быть ходячей заразой. Заранее благодарю за ответ и простите за столько Вопросов. Просто это очень важно для меня.

Ответ Минкевича К.В. : Действительно есть пациентки, которые воздерживаются от деструктивного лечения кондилом. Крем Алдара эффективный препарат и я бы порекомендовал начать с него, потому что после хирургического удаления минимум в 50% случаев возникает рецидив. Если не будет эффекта, то хурургия.

 

Вопрос: Могут быть кондиломы на голове, как лечить?

Ответ Минкевича К.В. : Кондилом на голове быть не может. Необходима консультация дерматолога, так как это может быть другое кожное разрастание, и вероятно связанное с другим типом вирусного  заболевания.

 

Вопрос: мне только 14, но я посмотрела и мне кажется что у меня кандиломы, но я не знаю точно. Я девственница, т.е половых связей естествненно не было. Я боюсь говорить маме даже о подозрениях, ибо физически я уже не девств. и она может не то подумать. помогите мне.

Ответ Минкевича К.В. : Лена, кондиломы, это заболевание, связанное с вирусом папилломы человека (ВПЧ) и передается только половым путем при сексуальных контактах. Пока Вы не живете половой жизнью генитальных кондилом у Вас быть не может. Имеются другие кожные вирусные заболевания, например контагиозный моллюск, которым можно заразиться на пляже, лежа на песке. Бывают кожные высыпания другой природы, Вам надо обратиться к дерматологу, для уточнения диагноза. 

 

Вопрос: Здравствуйте,у меня было очень много кондилом,даже возле ануса,и они резко начали пропадать,даже у входа во влагалище стали совсем маленькие,и я нащупала шишку во влагалище на расстоянии 8 см внизу,при пол.акте неприятные ощущения,что это может быть?очень боюсь,места себе не нахожу(((

Ответ Минкевича К.В. : Эля, трудно без осмотра сказать, что за образование у Вас во влагалище. Необходимо сходить к специалисту гинекологу, и после осмотра сделать вывод и поставить диагноз. От половой жизни, я бы посоветовал пока воздержаться.

 

Вопрос: Здравствуйте. Во время беременности у меня появились кондиломы . Врач выписала лекарства и назначила лечение мне и будущему мужу . Но я прочитала что если их вылечить они все равно могут опять появиться и вирус всегда будет в организме.  Мне хотелось бы знать если я их вылечу сложными ли будут роды и какова вероятность заразить ребенка и на сколько ?

Ответ Минкевича К.В. : Во время беременности действительно вирус папилломы человека активизируется, в результате появляются кондиломы в области гениталий. К сожалению, консервативное лечение во время беременности малоэффективное. Необходимо их удаление пока не разрослись. Метод удаления зависит от наличия аппаратуры (лазер, радиоволна), можно обрабатывать химическими препаратами (ваготил или другие). Наличие кондилом не является показанием к оперативному родоразрешению, но это зависит от их количества. Если будет гигантская сливная кондилома, то роды через естественные родовые пути будет невозможен. Поэтому не доводить до этого состояния и удалять пока они небольшие. Путь передачи вируса ребенку при родах не доказан. В редких случаях передается, но предсказать это невозможно. От половой жизни необходимо воздержаться во время беременности, если появились кондиломы и мужу лечение необходимо проводить, если у него на половом члене есть такие же кондиломы. При отсутствии кондилом на половом члене, лечение проводить не надо.

 

Вопрос: Здравствуйте. У меня нашли кондиломы онкогенного типа 33,35,56. Очень беспокоит зуд,они маленькие но их много. Что посоветуете сделать? хочу записаться к дерматовенерологу на удаление лазером,но думаю очень дорого будет стоить и не дай бог будет рецидив.

Ответ Минкевича К.В. : Обнаруженные у Вас типы кондилом, в большей степени влияют на изменения на шейки матки. Поэтому необходимо сдать мазок на онкоцитологию с шейки матки (Пап-тест). Генитальные кондиломы вызывают 6 и 11 типы. Зуд кондиломы не вызывают, вирус может вызывать дисбактериоз и нарушение микрофлоры. Зуд вызывает, как правило, грибковая инфекция (молочница), необходимо назначение местных противогрибковых препаратов. Мелкие разрастания на входе во влагалище называются папилломами, и удаления не требуют, только с косметической целью, если это Вас беспокоить. Без осмотра окончательно сказать, что у Вас невозможно и надо удалять или нет, не знаю. Своим пациенткам, при наличии папиллом и желании от них избавиться, назначаю крем имихимод. Обработка только кожи в области наружных половых органов в течение 4-х – 8 недель. Обработка 3 раза в неделю, на ночь, через 1 день. 

 

Вопрос: Здравствуйте. Сегодня была на узи по беременности, после на консультации узнала что у меня кондилома.  Хотела узнать может ли это перейти от меня мужу? И не опасно ли прижигать кондилому при беременности?

Ответ Минкевича К.В. : При наличии кондилом от половой жизни необходимо воздержаться. Мужу лечиться не надо, если у него нет разрастаний на половом члене, если есть, то обратиться к урологу или дерматологу. Вам необходимо кондиломы удалить, чем быстрее, тем лучше. Кондиломы очень быстро растут при беременности. Удаление кондилом проводится тем методом, которым владеет то мед учреждение, в котором Вы наблюдаетесь или Вас направят. Удаление проводится лазером или радиоволной, это не опасно при беременности.

 

Вопрос: Добрый день! Скажите пожалуйста….бывая на приёме у гинеколога,он должен был обратить внимание и сказать что у меня..кондилома на одной из малых половых губ….?! Я заметила изменение…после первых родов….но не знала что это и с чем связано…и теперб очень бы хотелось проконсультироваться и избавиться от этого недуга!!!!!

Ответ Минкевича К.В. : Светлана, чтобы сказать, что у Вас на половой губе, необходим осмотр и только после него можно поставить диагноз, и рекомендовать лечение. После родов, кондиломы которые появляется при беременности, как правило, сами исчезают. Если на одной половой губе имеется кондилома, то на противоположной губе (зеркальное отражение) должно появиться  такое же образование. Если такого нет, то вряд ли это кондилома.

 

Вопрос: Здравствуйте, доктор. Сегодня у меня обнаружили папиломы у самого влагалища на слизистой. Предложили сразу их убрать, я согласилась. Мне их намазали солкодермом, сказали, что это самое эффективное средство. Сказали, что рецидива быть не должно, если блокировать вирус. Выписали ликопид 10мг 1 раз в день 10 дней и в качестве профилактики эпиген перед контактом с партнером. Вопросы: действительно ли их можно удалить солкодермом? А поможет он от папилом на ладони? Действительно можно блокировать вирус с помощью лекарств? Какова вероятность заражения партнера, если мы всегда предохранялись презервативами?

Ответ Минкевича К.В. : Папилломы, это нежные сосочковые разрастания на слизистой. Эти разрастания на слизистой вульвы (при входе во влагалище) удалять по медицинским показаниям не надо, их удаляют по желанию пациентки с косметической целью. Иногда возникает у врачей путаница между папилломы (удалять не надо) и кондиломами – грубые гребешковые разрастания, их удалять надо. Солкодерм применяется для удаления единичных кондилом или папиллом. Противовирусные препараты Ликопид и Эпиген-спрей применяются, в сочетании с удалением кондилом, в частности и солкодермом, для профилактики рецидива заболевания. Во время лечения солкодермом необходимо воздерживаться от половой жизни. Любые противовирусные препараты не гарантируют от избавления от вируса папилломы человека (ВПЧ). Разрастания на коже ладоней не связаны с папилломами слизистой вульвы. Это тоже вирусное поражение, но другого типа. Выписанные Вам противовирусные препараты (ликопид и эпиген) нецелесообразно применять для лечения разрастаний на коже ладоней, вряд ли это поможет. В этом случае необходима консультация дерматолога, иногда их тоже лечат солкодермом. Наличие папиллом, но не кондилом, не может послужить отказом от половой жизни, даже без лечения.

 

Вопрос: здравствуйте.у меня появились кондиломы около входа во влагалище..гинеколог прописал мне мазь элоком.И ВСЁ..как вы считаете.это нормальное лечение? Спасибо

Ответ Минкевича К.В. : Я считаю, что мазь Элоком при наличии кондилом неправильный вектор лечения. Если это действительно кондиломы, то их необходимо удалять хирургическим методом или назначать местные лекарства, которые обладают противовирусным действием, например крем имихимод.

 

Вопрос: если обнаружены кондилома и эрозия шейки матки. что лечить в первую очередь?

Ответ Минкевича К.В. : В первую очередь надо лечить кондиломы, так как они распространяются, и вызывают дискомфорт. По поводу эрозии шейки матки проконсультируйтесь у другого врача, потому что за эрозию принимают нормальное состояние шейки матки, которое называется эктопией.

 

Вопрос: у меня появилась 1 остроконечная кондилома на половой губе, а потом сама исчезла. Это возможно?

Ответ Минкевича К.В. : Да такое возможно. Организм (иммунная система) самостоятельно борется с вирусом папилломы человека. Кондилома это результат этого вируса. Когда иммунитет справляется с вирусом, без лечения, тогда возможно и элиминация (исчезновения) кондилом. Это бывает не в 100% случаев, но возможно.

 

Вопрос: как вылечить кандиломы?

Ответ Минкевича К.В. : Подходы к лечению кондилом: хирургический в медицинском учреждении и терапия в домашних условиях. У всех методов есть недостатки, это рецидивы кондилом. Хирургический метод предполагает лазерное удаление, на коже это отличный косметический эффект. Может быть применено удаление с помощью аргоновой плазмы, тоже очень выгодно с косметической стороны. Криохирургия, метод хороший, но после него много рецидивов. В домашних условиях можно применить крем имихимод, с хорошим эффектом. Этот крем, применяется только на кожу, где имеются кондиломы в течение 4 недель. Обработка 3 раза в неделю на ночь.  

 

Вопрос: Здравствуйте, два дня назад в вагине хирургическим путем удалили остроконечные кондиломы. (срезали горячим ножом, в деталях не разбираюсь). Сейчас мучает сильный зуд в этой области. Это нормально? И как с ним бороться? может быть, это связано каким то образом с молочницей, котороя у меня периодически появляется?

Ответ Минкевича К.В. : Эта реакция слизистой на воздействие. Ожоговые раны болят, к сожалению, это последствие операции. Надо принимать обезболивающие препараты, например ректальные свечи с индометацином.

 

Вопрос: плоская кондилома-sil?

Ответ Минкевича К.В. : Да это LSIL. Поражение многослойного плоского эпителия низкой степени выраженности или дисплазия 1 степени.

 

Вопрос: Здравствуйте! Мне 20 лет. Ходила к врачу и мне сказали, что у меня кондилома. Опасная ли это болезнь и влияет ли она на беременность?

Ответ Минкевича К.В. : Наличие кондиломы не опасная болезнь, а неприятная. Наличие генитальных бородавок влияет на половое поведение, снижает качество жизни, и возникает озабоченность в плане будущей беременности. Сами кондиломы на плод не влияют, но их наличие при беременности вызывает проблемы. Кондиломы при беременности начинают активно разрастаться, что может вызвать неприятные ощущения в генитальной области и затруднения при ходьбе. Удаление кондилом при беременности могут быть многократными и только хирургическим методом. Поэтому генитальные бородавки должны быть излечены и желательно как можно быстрее, пока их количество не увеличилось.

 

Вопрос: Добрый вечер! Пользуюсь кремом Алдара для удаления кондилом и тут у меня возник Вопрос — а этого достаточно? Может витаминки какие попить или параллельно еще каким средством помазать? Что посоветуете?

Ответ Минкевича К.В. : Лечение кремом Алдара, это правильный выбор терапии. Дополнительного приема лекарств (например, витаминов) не требуется. Если лечение кремом не вызывает никаких местных реакций на коже, то необходимости делать перерыв в лечении или обрабатывать кожу другими мазями или спреями не надо.

 

Вопрос: 3 недели назад была в КВД. Врач удалял мне мне остроконечные кондиломы (влагалищные) жидким азотом. 10 дней назад опять побывала на приеме — врач прижег кондиломы повторно. Сейчас во влагалище (в местах кондилом) сильное жжение, как при ожоге. И я вижу, что кондиломы остались. И влагалище болит. Что можно сделать сейчас? Врач ушел в отпуск. Спасибо!

Ответ Минкевича К.В. : Криотерапия, которую Вам провел врач, один из методов лечения кондилом. Основным недостатком всех существующих методов лечения является то, что ни один из них не гарантирует полного избавления от генитальных бородавок. После криотерапии эффект от лечения наступает не сразу, а через некоторое время. Поэтому в настоящее время никаких повторных операций не выполняйте, а необходимо дождаться заживления раневой поверхности. С целью обезболивания ректальные свечи (в прямую кишку) с индометацином на ночь. Если после эпителизации слизистой влагалища кондиломы останутся, необходимо применить другой способ их лечения.

 

Вопрос: Добрый день! Подскажите как лечится остроконечные кондиломы? Сколько анализов надо сдавать (или определяется только зрительно). Надо ли лечить партнера, если у него нет видимых проявлений?

Ответ Минкевича К.В. : Наличие впервые появившихся остроконечных кондилом в аногенитальной области, является показанием к терапии в домашних условиях. Это лечение проводится по согласованию с Вашим лечащим врачом и под его контролем. К терапии первой линии в домашних условиях, является применение крема имихимод (не индийского производства), и приводит к исчезновению генитальных бородавок у большинства пациентов. Установления типа вируса папилломы человека (ВПЧ) перед началом лечения не обязательна, и не дает дополнительной клинической информации, если у врача нет сомнений, что данные образования кондиломы. Лечения полового партнера не требуется, если у него нет бородавок (кондилом) на половом члене.

 

Вопрос: Год назад моему мужу удалили кондилому в паховой области, использовали криодеструкцию. После чего прошел курс иммунотерапии, а месяц назад заметил новую кондилому, но уже в другом месте. Как быть, неужели нельзя вывести эту инфекцию окончательно? Что могло повлиять на появление нового образования?

Ответ Минкевича К.В. : Недостатком любого метода лечения является то, что ни один из них не гарантирует появление новых кондилом. Рецидивы возникают в месте лечения или в новых местах. Лечение по удалению необходимо повторить. Уровень рецидива зависит от иммунитета конкретного человека, и прием иммунных препаратов без доказателен, с точки зрения борьбы с вирусом. 

 

Вопрос: Во время беременности появилось 2 кондиломы в перианальной области, одна слишком уж «длинная», постоянно задевается. Также потом заметила сколько штук в зоне декольте и возле шеи. Теперь прошло 4месяца после родов, хотелось бы избавиться от них окончательно. Принимала метронидазол 10 дней и ставила параллельно полижинакс. Сдвигов нет. Что делать?

Ответ Минкевича К.В. : Консультацию по лечению кондилом проводит гинеколог, а образований на коже в области шеи и декольте дерматолог. Лечение может быть различным. Основные подходы: хирургическое удаление —  лазерное; электрохирургическое, включая радиоволновое; скальпелем, это быстрое избавление. Второй подход, это химическая обработка бородавок. Третий подход, длительный, это крем имихимод (не индийского производства), он применяется в домашних условиях и меньше всего после этого лечения возникают рецидивы.

 

Вопрос: Здравствуйте! Скажите, так ли принципиально отличается лечение бородавок на интимных местах от лечения бородавок на руках или ногах? Можно ли использовать одно средство? И если да, то тогда какое лучше использовать?

Ответ Минкевича К.В. : Лечение бородавок в аногенитальной области и в других местах хирургическим способом, например с помощью лазера, не отличается, но проводится врачами разных специальностей. Имеются нюансы в применении местных препаратов (например, крема имихимод), в лечении кондилом разных локализаций. Поэтому необходима консультация профильного специалиста.

 

Вопрос: Здравствуйте! Я беременна, и, естественно, грудь постоянно увеличивается, меняет форму и вид.Недавна заметила, что на соске (на самой вершине, она у меня всегда была немного потрескана) появилось что-то очень похожее на кондилому — один из миниатюрных «шариков» на соске увеличился и стал выпирать как-бы капелькой. Может ли быть это кондиломой на груди? Или такие изменения нормальны при беременности?

Ответ Минкевича К.В. : Без осмотра на этот Вопрос не ответить. При беременности в околососковой области происходят изменения кожной структуры, и это может быть вариантом нормы. Достаточно консультации врача на приеме в женской консультации.

 

Вопрос: Добрый день! Если у меня на руках есть бородавки, то я могу их перенести в интимные места? Точнее заразить сама себя? Или партнера, если я рукой докаснусь до органа?

Ответ Минкевича К.В. : Бородавки на руках, это тоже вирусные образования. Распространение этих бородавок действительно может происходить при контакте. Заражение происходит, если этот контакт имеет место между бородавкой и травмированным (поврежденным) участком кожи или слизистой. Это повреждение может быть незаметным для глаз. Поэтому лучше избавиться от бородавок не только с эстетической точки зрения, но и медицинской.

 

Вопрос: Y меня имеются три кондиломы на внутренних сторонах ног рядом с паховыми областями, они не мешают, а просто чисто психологически воспринимаются как бомба замедленного действия, вчера прочла, что у 1 из 100 пациентов кондиломы могут переродиться в злокачественные образования. Лечиться ли мне от них?

Ответ Минкевича К.В. : Образования на внутренних поверхностях бедра, не характерная локализация для кондилом. Поэтому проконсультируйтесь с дерматологом по поводу этих образований. Истинные единичные кондиломы практически не озлокачествляются.

 

Вопрос: Здравствуйте! У меня ВПЧ 39 тип, остроконечные кондиломы. Прохожу курс лечения. У партнера вирус не найден. Как такое может быть, если был и оральный секс и как- то давно (но уже с признаками ВПЧ у меня) незащищенный акт. Нужно ли ему всё равно пройти курс? Спасибо.

Ответ Минкевича К.В. : При отсутствии генитальных кондилом (остроконечных бородавок) на половом органе, половому партнеру проходит курс лечения (прием лекарств) не надо. Это значит, что у партнера иммунитет самостоятельно справляется с ВПЧ. 

 

Вопрос: Добрый день! Врач выписал средство от кондилом, но я что-то не особо могу разобрать название. Там есть слово то ли имиквод, то ли имиквимод. А впереди еще одно короткое слово. Его и не могу понять. Поиск в интернете ничего не дал, или я не умею искать(( Может вы подскажите что это может быть за средство?

Ответ Минкевича К.В. : Врач Вам назначил крем имихимод. Это препарат, который назначается при наличии кондилом в аногенитальной области.

 

Вопрос: Уважаемый Константин Владимирович! У меня к Вам такой Вопрос. У меня на малых губах наростики, похожи на попиломы, Как они могли у меня появиться? Я их обнаружила уже месяца 2 назад, но я боюсь идти к врачу т. к. ни разу там не была. Что мне вы посоветуете? Может можно принимать какие — нибудь лекарства?

Ответ Минкевича К.В. : Без осмотра не могу Вам ничего посоветовать. Это может быть нормой, просто раньше не обращали на это внимание, а может быть доброкачественным образованием. На прием к гинекологу необходимо сходить.

 

Вопрос: Понятно что не излечимо.Но если сделать операцию они исчезнут ,или так и будут всю жизнь появляться?У меня кандиломы в облости гениталий.Прижигала ,сново появляются.Что делать.Спасибо.

Ответ Минкевича К.В. : Кондиломы это не навсегда. С вирусом папилломы человека (ВПЧ), который вызывает рост кондилом, борется иммунная система человека, и в 80% случаев этот вирус побеждает. Любое деструктивное (оперативное) лечение не всегда приводит к полному избавлению от вируса, а убирает только видимые кондиломы, а вирус может находиться рядом в соседнем участке кожи или слизистой. После удаления начинают расти новые кондиломы, на новых местах, поэтому применяют противовирусные препараты для профилактики рецидива новых кондилом. Эти препараты тоже не обладают достаточной эффективностью, и какой препарат поможет, а их в нашей стране разнообразное количество, неизвестно. Эффективным противовирусным препаратом, который давно и успешно применяется за рубежом, а теперь и в нашей стране, крем имихимод (только не индийского производства). Если после удаления кондилом они рецидивируют, то больше удалять не надо, а применить этот крем и будет хороший результат. Наносится только на кожу 3 раза в неделю, через день, на ночь, в течение 4-х недель. 

 

Вопрос: Добрый день. У меня следующая проблема: в апреле месяце, я обратилась к своему геникологу с тем, что у меня в районе влагалища и ануса выросли кондиломы. Доктор взяла у меня анализы, ВПЧ не обнаружили, на 18 мая, назначили удаление. Согласно договоренности в назначенный день все удалили, одну кондилому отправили на гистологию. По результатам гистологии ничего опасного не обнаружили. В течение месяца я обрабатывала Эпиген спреем место, где были кондиломы, плюс еще я колола уколы противовирусные. Но после первой менструации после процедуры удаления, я заметила , что у меня снова появились кондиломы на тех же местах. И не прошло и месяца как случился рецедив, и сейчас их намного больше чем в прошлый раз, и они очень быстро растут. Мой гениколог назначил повторное удаление кондилом, после следующей менструации. У меня Вопрос, может мне нужно обратиться не к геникологу, а дерматологу и по какой причине произошел такой быстрый рецидив.

Ответ Минкевича К.В. : Лечить кондиломы можно у гинеколога или дерматолога, главное, чтобы врач был специалистом, и понимал в этой проблеме. Противовирусные инъекции в этой ситуации не всегда (редко) помогают. В ситуации, когда произошел рецидив кондилом после оперативного лечения, и они быстро разрастаются, необходимо их повторно удалить с назначением лучше до повторного удаления крема имихимод. Продолжить его после удаления в течение 4-х недель. Спросите, как его применять у врача или внимательно прочитайте инструкцию.

 

Вопрос: Здравствуйте, доктор. Сегодня у меня обнаружили папиломы у самого влагалища на слизистой. Предложили сразу их убрать, я согласилась. Мне их намазали солкодермом, сказали, что это самое эффективное средство. Сказали, что рецидива быть не должно, если блокировать вирус. Выписали ликопид 10мг 1 раз в день 10 дней и в качестве профилактики эпиген перед контактом с партнером. Вопросы: действительно ли их можно удалить солкодермом? А поможет он от папилом на ладони? Действительно можно блокировать вирус с помощью лекарств? Какова вероятность заражения партнера, если мы всегда предохранялись презервативами?

Ответ Минкевича К.В. : Папилломы не надо путать с кондиломами. Кондиломы удалять надо, а папилломы удаления не требуют, только по желанию пациентки. Папилломы, это не всегда проблема с вирусом, а особенность строения слизистой.

 

Вопрос: Крем алдара поможет вылечить кандиломы?

Ответ Минкевича К.В. : Хороший консервативный метод лечения кондилом. Наносится на кожу 3 раза в неделю (например: понед-среда-пятница), на ночь, в течение 4-х недель (минимум).

 

Вопрос: Здравствуйте, могут ли остроконечные кандиломы появиться сразу через несколько дней после не защищенного секса с зараженным партнером?

Ответ Минкевича К.В. : Остроконечные кондиломы могут появиться через несколько дней после незащищенного секса с половым партнером, у которого на половом члене имеются остроконечные кондиломы. Носительство вируса папилломы половым партнером, без видимых кондилом, вряд ли приведет к их разрастанию у партнерши через несколько дней. В этом случае сложно говорить, когда и от кого Вы заразились, если до этого были половые контакты с другими партнерами, и даже в презервативе. Половой контакт может спровоцировать вирус, который был уже в слизистых половых путей. 

 

Вопрос: Добрый день! Подскажите, пожалуйста, у меня были обнаружены кондиломы на половых губах и во влагалище. Удаляла в течении 3 месяцев уже три раза. Лазером и два раза электрокоагуляцией, но все равно при следующем осмотре гинеколог находит все новые и новые. После удаления я ставлю свечи генферон или виферон 5000 -10 дней, два раза в день. Пользуюсь спреем Эпиген. Колола уколы циклоферон. Подскажите, что еще можно сделать? Как от них избавиться? Можно ли планировать беременность( очень хотим) и какова вероятность ,что во время беременности они снова появяться?

Ответ Минкевича К.В. : Отсутствие эффекта от физиохирургических методов лечения (лазер, электрокоагуляция) не редкость. Рецидив после них бывает > 50% случаев. Поэтому лучше сочетать один из этих методов с местным применением крема имихимод. В этом случае рецидивов практически не бывает. В Вашем случае надо применить этот крем, который наносится только на кожу. Крем наносится  1 раз в 3 дня (например: понед-среда-пят) на ночь. Одна упаковка содержит 12 саше (пакетиков) на 4 недели, этого вполне хватает. Если ликвидировались не все, то максимальная продолжительность 16 недель. Внимательно прочитайте инструкцию и препарат с хорошим эффектом. Несмотря на то, что он наносится на кожу, кондиломы на слизистой тоже уйдут. Сочетать этот метод с другой симптоматической терапией не надо. Предсказать появятся кондиломы во время беременности не возможно, но бояться этого не надо. Эффект от этой терапии, я думаю гарантирует, что они не проявятся во время беременности.

 

Вопрос: Здраствуйте. Год назад у меня во время беременности появились кондиломы. Лечилась кондилином, отправили в другой гооод чтобы удалили, пока жду, но почему не могу забеременеть, это из за кондилом? Спасибо за Внимание.

Ответ Минкевича К.В. : При наличии кондилом иметь беременность не надо. Во время беременности они очень быстро разрастаются. Имеется крем имихимод, который эффективно удаляет кондиломы. Это лекарственная форма создана для домашнего лечения самим пациентом. С хорошим эффектом и безопасным применением. Хватает 1 упаковки, где имеется 12 саше (пакетиков) крема, который наносится на кожу , через день, на ночь. 

 

Вопрос: Добрый день!!скожити кондиломы и попеломы могут появляться внутри половых путей или только снаружи

Ответ Минкевича К.В. : Кондиломы, это грубые гребешковые разрастания, папилломы – нежные сосочковые образования. Осмотр гинеколога требуется, т.к. они поражают шейку матки, влагалище, наружные половые органы.

 

Вопрос: Здравствуйте! На протяжении уже полу года у меня в области ануса возникла остро кишечная кандилома, я не знала что это и не ходила к в рачам пока сегодня не решила поискать в интернете, почитав уже пару сайтов прихожу в ужас, не знаю что делать, мне 23 года я нахожусь в положении почти на седьмом месяце. На первом сайте увидела что можно прижечь йодом и тут же прижгла, правильно ли я сделала? Дайте совет что мне делать? как быть? Очень страшно после увиденных видео про кандиломы.

Ответ Минкевича К.В. : Лечение кондиломы йодом не показано. У Вас беременность 28 недель, поэтому впереди еще много времени и кондилома может значительно вырасти до родов. Поэтому Вам необходимо обратиться к врачу ЖК, и применить метод удаление кондиломы, тем методом, которым владеет врач или он направит в стационар, где ее удалят. Существуют различные методы лечения при беременности: консервативное – кондилин или хирургическое – лазер или радиоволновое удаление. 

 

Вопрос: Здравствуйте. У меня кондиломы уже 3 месяца на половых губах(только снаружи). Врач сказал удалять (удаляют радиоволнами). Это обязательная процедура или крем может заменить удаление лазером,радиоволнами или крио? И еще имихимод и алдара это одно и то же или нет?

Ответ Минкевича К.В. : Имихимод это действующее вещество крема Алдара (коммерческое название). Радиоволновой удалять не советую, грубо получается. Лазером хорошо, крио малоэффективно. Имихимод золотая середина, рекомендовал начать лечение с него.

 

Вопрос: я живу в калининградской области,в какой аптеке не спрашивала крем алдара такого даже незнают.как и где можно его купить?

Ответ Минкевича К.В. : Не знаю где его можно купить в Калининградской области. В аптеках Петербурга он есть, думаю, и в аптеках Калининграда он должен быть. Наберите в интернете поиск крем имихимод, это действующее вещество крема Алдара.

 

Вопрос: Здравствуйте. Я хотела бы проконсультироваться со специалистом по поводу лечения кондилом. Я обнаружила их примерно 3 недели назад в области влагалища и на внешней части полового органа. На тот момент я была беременна, но вскоре у меня произошло замирание беременности. Подскажите пожалуйста каким методом лучше начать лечение и следует ли принимать какие-либо препараты? За ранее большое спасибо.

Ответ Минкевича К.В. : Появление кондилом во время беременности означает, что Вы инфицированы вирусом папилломы человека (ВПЧ). Беременность снижает иммунную защиту организма женщины, и вирус активируется, когда беременность заканчивается, в Вашем случае прерывается, иммунитет восстанавливается. Организм сам начинает активно бороться с вирусом, и в большом количестве случаев кондиломы исчезают без всякого лечения. Если количество кондилом увеличивается или Вы желаете быстрее от них избавиться, советую крем имихимод. Наносить на кожу в области роста кондилом 3 раза в неделю на ночь в течение 4-х недель. Слизистую влагалища обрабатывать не надо, лечебный эффект будет от нанесения на кожу.  

 

Вопрос: Здравствуйте! Слышала много отзывов, что после удаления кондилом в интимных местах у женщин с помощью сургитрона невозможно вести полноценную половую жизнь (имеется ввиду после нескольких месяцев и даже лет после удаления), потому что очень больно!!!! Почему возникают такие последствия?

Ответ Минкевича К.В. : Сургитрон, это радиоволновое удаление бородавок (электровоздействие). После любого электровоздействия остаются рубцы, которые могут нарушать трофику (питание) тканей. Поэтому могут быть участки кожи или слизистой с повышенной чувствительностью, но со временем питание ткани несколько восстанавливается, и неприятные ощущения постепенно проходят.

 

Вопрос: папилломы везде: под мышками большие, по грудью маленькие, а теперь и на шее выросли. Как от них избавиться, ведь там где они находятся иногда очень сильно чешется.

Ответ Минкевича К.В. : Это вирусное влияние. В этих местах наиболее эффективный метод лечения лазерное удаление. Эффективно и хороший косметический результат. К сожалению, со временем будут появляться новые папилломы на коже, что потребует новых удалений. Это косметические лазерные процедуры.

 

Вопрос: Добрый вечер! Я болею сахарным диабетом уже четыре года (на инсулине) недавно пережила кому ( пять дней). После этих событий появились кондиломы и стали очень быстро расти и распространяться по всем половым органам,образовывая целые наросты, мучает ужасный зуд, но может он связан с высоким сахаром. Пробовала лечить Кондилином, но очень болезненно. Как я понимаю после комы и лекарств иммунитет пропал. Принимала лекарства повышающие иммунную систему. Как можно и вообще возможно избавиться от кандилом при моей болезни не прибегая к хирургическому вмешательству и возможен рак матки, если выявиться риск онкогенности, и высок ли он?

Ответ Минкевича К.В. : Во-первых, при сахарном диабете Вам необходимо отрегулировать сахар крови, тогда и иммунная система немного восстановиться. Во вторых, чтобы понять входите Вы в группу риска по раку шейки матки, надо сдать соскоб на вирус папилломы человека (ВПЧ). Наличие онкогенного типа ВПЧ не обязательно вызовет рак, но в этом случае 1 раз в год необходимо сдавать у гинеколога мазок на цитологию с шейки матки в сочетании с ВПЧ-тестом. Иммунитет может самостоятельно справится с вирусом без всякого лечения. Кондиломы вызывает не онкогенный тип вируса, который не вызывает рак, только рост кондилом. Учитывая наличие сахарного диабета попробуйте начать лечение кондилом кремом имихимод. Наносить его надо только на кожу всего 3 раза в неделю (понедельник-среда-пятница). Перед началом лечения почитайте инструкцию, чтобы правильно им пользоваться и как реагировать, если будет на него реакция.

 

Вопрос: Здравствуйте! У меня как то сразу несколько проблем образовалось. Цистит, нарушение микрофлоры и ВПЧ с кондиломой около влагалища. Врач прописал таблетки для восстановления микрофлоры, цистит вообще игнорируют, а к кондиломе относятся легкомысленно. Причем сказали что партнера я заразить не могу, а я вот читаю что легко переносится. У меня большую часть времени все зудит и чешется, не дождусь когда уже назначат что нибудь. Что мне делать дальше?

Ответ Минкевича К.В. : До начала лечения необходимо сдать анализы на скрытую инфекцию – хламидии, микоплазму гениталиум, при наличии цистита на уреаплазму уреалитикум. Лечение при цистите это антибактериальные препараты, которые надо уточнить у уролога. Жжение и зуд во входе во влагалище и во влагалище это проявление кандидозного вульвовагинита (молочница), необходимо применить противогрибковые препараты (свечи и мазь). Когда острая фаза воспаления немного утихнет, кондилому надо удалить. Если кондиломы начнут разрастаться до стихания острого воспаления, их необходимо начать удалять сразу. Методы удаления лучше лазер или аргоноплазменная аблация. При отсутствии воспаления может быть применен крем имихимод.

 

Определение ДНК вируса папилломы человека 16,18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59

Синонимы: ДНК ВПЧ ВКР (высокого канцерогенного риска).

Связанные тесты: клинико-визуальный осмотр, кольпоскопия, гистология, цитологическое исследование мазков (мазки по Папаниколау, ПАП-тест)/жидкостная цитология.

 Исследование по определению ДНК ВПЧ ВКР является основным методом диагностики по выявлению вируса папилломы человека в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта. Молекулярно – биологические методы (ПЦР) позволяют идентифицировать определенные типы ВПЧ и имеют высокую прогностическую значимость, особенно, если на фоне ВПЧ-инфекции уже имеется картина дисплазии эпителия шейки матки, что позволяет говорить о степени риска развития рака.

ВПЧ – инфекция наиболее часто встречающееся заболевание, передающееся половым путем.

Вирус поражает клетки эпителия кожи и слизистых оболочек. Основным путем заражения ВПЧ является половой путь передачи инфекции (с учетом анального секса и орально-генитальных контактов). Следует отметить, что у 70 % молодых людей в возрасте от 15 до 25 лет ВПЧ элиминируется в течение 18-24 месяцев, после 35 лет ВПЧ сохраняется более продолжительное время. Скорость исчезновения ВПЧ зависит от иммунореактивности клеток организма человека и значительно снижается при инфицировании несколькими типами ВПЧ.  Среди лиц, живущих активной половой жизнью, особенно в возрасте до 30 лет, ВПЧ-инфекция с одинаковой частотой поражает и мужчин и женщин. В то же время наиболее серьезные поражения она вызывает у женщин. ВПЧ считается инициирующим фактором в развитии рака шейки матки и рассматривается в качестве причины дистрофических и злокачественных заболеваний вульвы и влагалища.

Выявление и определение типа ВПЧ дает возможность оценивать риск развития неоплазии и дифференцировать персистенцию вируса от случая нового заражения. Риск развития опухолевого процесса в большой степени связан с типом ВПЧ; выявление ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска — 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 и 58 дают основание предполагать, что клетки эпителия могут подвергнуться злокачественному перерождению. Рак шейки матки (РШМ) имеет длительный период развития. Своевременная диагностика предраковых состояний шейки матки имеет важное значение в предотвращении злокачественных новообразований.

В каких случаях рекомендуется проводить исследование?
  • наличие субъективных и/или объективных симптомов заболевания;
  • скрининговые исследования на ИППП;
  • беременность;
  • скрининговое обследование в комплексе с цитологическим исследованием;
  • неопределенные и сомнительные результаты цитологических исследований;
  • дифференциальная диагностика с заболеваниями непапилломавирусной этиологии.

Используемый метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.

Материал для исследования

Соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала, влагалища, уретры.

Подготовка к исследованию

В предполагаемый день обследования проводиться туалет половых органов без применения моющих, дезинфицирующих средств, антибактериального мыла; исключается спринцевание влагалища у женщин; от последнего мочеиспускания до взятия материала должно пройти не менее 2 часов.

Просим обратить Ваше внимание!

Исследование проводится не ранее, чем:

  • через 2 дня после УЗИ-исследования с помощью влагалищного датчика, гинекологического осмотра;
  • через 5 дней после кольпоскопии и биопсии/жидкостной цитологии;
  • через 2 недели после применения всех видов местных лекарственных форм (свечи, мази и т.п.), антисептических средств и лекарственных препаратов (пробиотики, эубиотики), содержащих микроорганизмы;
  • через 3 недели после незащищенного полового контакта с партнером, в котором Вы не уверенны;
  • через 4 недели после применения системных антибактериальных препаратов и для контроля терапии.

В течение 2 – 3 дней до исследования необходимо воздержаться от незащищенных половых контактов.

За дополнительной информацией о возможности проведения исследования в конкретном случае рекомендуется обратиться по телефонам нашего центра.

Взятие клинического материала у беременных женщин проводится только врачом; необходимо  предварительно записаться на прием.

Формат выдачи результата:

Обнаружено / не обнаружено, тип ВПЧ.

Определение ДНК ВПЧ ВКР может говорить о высоком уровне онкогенного риска и необходимости наблюдения в лечебно-профилактических учреждениях.

Частота подтипов вируса папилломы человека (ВПЧ) 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки

Рак, вызывающий инфекцию. 2015; 10: 29.

, , и

Хуссейн Гаделькарим Ахмед

Подразделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Саудовский университет Аравия

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Салех Hussein Bensumaidea

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Ибрахим М.Ashankyty

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиля, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиля, Хаиль il, Королевство Саудовская Аравия

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Кафедра клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия 900 03 Автор, ответственный за переписку.

Поступило 24 марта 2015 г .; Принято 19 августа 2015 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете первоначального автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения. Отказ от лицензии Creative Commons Public Domain Dedication (http: // creativecommons.org / publicdomain / zero / 1.0 /) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Предпосылки

Выявление различных подтипов ВПЧ в неидентифицированных сообществах дает достаточно информации для скрининга и мониторинга потенциального воздействия программы вакцинации. Таким образом, целью этого исследования был скрининг на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Методология

Всего было получено 200 (150 злокачественных и 50 доброкачественных) образцов тканей у йеменских женщин с раком шейки матки, которые были исследованы на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ).

Результаты

Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были выявлены в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%). ), 5/150 (3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Частота этих подтипов ВПЧ среди йеменских женщин с раком шейки матки составила 24%.Заключение. Среди йеменских женщин с раком шейки матки преобладали ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45.

Ключевые слова: Рак шейки матки, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, Йемен

Введение

Рак шейки матки является третьим по распространенности раком у женщин во всем мире [1]. Онкогенный вирус папилломы человека (ВПЧ) является наиболее важным фактором риска, связанным с раком шейки матки [2]. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала.ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3]. Рак шейки матки — одно из самых распространенных онкологических заболеваний среди женщин во всем мире [4]. Рак шейки матки — это очень медленно прогрессирующее заболевание, которому требуется длительный период для перехода от нормального состояния к предраку и потенциально смертельному инвазивному раку. Между предраком и раком существует промежуток в 10–20 лет, который дает возможность скрининга, выявления и лечения предраковых состояний и предотвращения его прогрессирования в рак. Однако женщины с ослабленным иммунитетом чаще и быстрее прогрессируют до предрака и рака [5, 6].

Установлено, что инфекция, вызванная вирусом папилломы человека высокого риска (HR-HPV), является основной причиной рака шейки матки [7]. ВПЧ участвует в 99,7% случаев плоскоклеточного рака шейки матки во всем мире [8]. Вирус папилломы человека (ВПЧ) представляет собой небольшой ДНК-вирус, обычно поражающий слизистые оболочки и кератиноциты кожи. На сегодняшний день известно не менее 200 генотипов ВПЧ. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала. ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3].Типы ВПЧ низкого риска включают типы 6, 11, 42, 43 и 44. Типы ВПЧ высокого риска включают типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. , 73 и 82 [9].

Белки L1 и L2 образуют икосаэдрические капсиды для генерации вирионов потомства. На основании вариации последовательности вариантов L1, L2, HPV различаются по биологическим и химическим свойствам, а также по географическому распространению [10–12]. Внутритипные вариации последовательности также были обнаружены в генах E2, E4, E5, E6 и E7 HPV-16 [10]. Гены E6 и E7 кодируют вирусные онкобелки, нацеленные на Rb и p53, соответственно.Во время жизненного цикла вируса эти белки способствуют стабильному поддержанию эписом и стимулируют дифференцированные клетки к повторному переходу в S-фазу [12]. Онкогенность конкретных вариантов ВПЧ, по-видимому, различается географически и этнически [10, 11]. В 2012 году Международное агентство по изучению рака пришло к выводу, что существуют последовательные и достаточные эпидемиологические, экспериментальные и механистические доказательства канцерогенности для человека ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39, ВПЧ45 для рака шейки матки. Следовательно, эти типы были расценены как канцерогены 1А.Все они принадлежат к семейству α-Papillomaviridae, в зависимости от вида, α7 (HPV39, HPV45) и α9 (HPV31, HPV33, HPV35) [13].

Однако есть очень ограниченные исследования о ВПЧ и связанных с ними раковых заболеваниях в большинстве развивающихся стран, таких как Большой Ближний Восток, включая Йемен и соседние с ним страны, такие как Саудовская Аравия, Катар, Объединенные Арабские Эмираты [14]. Однако большинство исследований в этом контексте сосредоточено на подтипах ВПЧ 16 и 18, игнорируя другие подтипы ВПЧ высокого или низкого риска.Поэтому целью этого исследования было выяснить распространенность ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Материалы и методы

В данном исследовании было получено 200 образцов ткани поражений шейки матки, обработанных парафиновым воском и фиксированным формалином, у ранее прооперированных пациентов из национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамуте и Адене, Йемен. Все образцы и данные были получены из архива национальных онкологических центров, различных больниц и различных частных гистопатологических лабораторий в трех вышеупомянутых провинциях в период с 2008 по 2012 год (полный охват).Образцы рака включали: плоскоклеточный рак (SCC), аденокарциному (Ad), аденосквамо-карциному (AdSC).

Экстракция ДНК

ДНК экстрагировали из образцов, залитых парафином, путем погружения среза ткани в ксилол для растворения парафина из ткани, а затем регидратировали, используя серию промывок этанолом. Белки и вредные ферменты, такие как нуклеазы, переваривались протеиназой К. Для облегчения пищеварения добавляли буфер, содержащий денатурирующий агент (додецилсульфат натрия (SDS)) [15].Нуклеиновые кислоты очищали из лизата ткани с использованием насыщенного буфером фенола и высокоскоростного центрифугирования. После экстракции фенолом добавляли РНКазу А для устранения загрязняющей РНК. Дополнительные экстракции фенола после инкубации с РНКазой А использовали для удаления любого оставшегося фермента. Ацетат натрия и изопропанол добавляли для осаждения ДНК и использовали высокоскоростное центрифугирование для осаждения ДНК и облегчения удаления изопропанола. Отмывку 70% этанолом проводили для удаления избытка солей с последующим центрифугированием для повторного осаждения ДНК [16, 17].ДНК повторно суспендируют в дистиллированной воде, количественно определяют и хранят при -20 ° C. Очищенную ДНК впоследствии использовали в последующих приложениях ПЦР.

Количественное определение ДНК

Чтобы оценить количественное определение ДНК после экстракции ДНК, мы проанализировали результаты измерения ДНК с помощью спектрофотометра NanoDrop.

Амплификация ВПЧ

Типовые праймеры (праймеры для ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45) были использованы для обнаружения ДНК ВПЧ31, 33, 35, 39 и 45 в доброкачественных и злокачественных поражениях шейки матки с принятием классификации процедура классификации TNM Американского объединенного комитета по раку (AJCC) и система стадирования рака шейки матки Международной федерации гинекологии и акушерства (FIGO) [18].Амплификацию проводили с использованием набора HPV31, 33, 35, 39 и 45 от Sacace-Biotechnologies S.r.l. Казерта — Италия. Конечный реакционный объем 40 мкл, содержащий 20 мкл смеси-1 (содержится в пробирках для ПЦР), 10 мкл смеси-2 и 10 мкл экстрагированной ДНК (образец). Отрицательный контроль и положительные пробирки с ДНК HPV31,33,35,39 и 45 содержали 10 мкл буфера ДНК, наносили 10 мкл HPV31,33,35,39 и 45.

Образцы и контроли амплифицировали с использованием системы ПЦР Gene Amp 9700. Программа ПЦР описана в таблице.

Таблица 1

Этапы ПЦР. Время цикла Темп. Шаги ПЦР

Шаг Температура ° C Время Циклы
1 95 ° C Пауза
мин 1
3 95 ° C 30 с 42
63 ° C 30 с
72 ° C 40 с 72 ° C 1 мин 1
5 10 ° C Хранение

Гель-электрофорез

Продукты ПЦР визуализировали в 2% агарозном геле с 0.5 мкг / мл бромистого этидия. В гель загружали десять микролитров ДНК-лестницы длиной 100 п.о. и продукта ПЦР. Гель-электрофорез проводили при 120 В и 36 мА в течение 60 мин. Снимки сделаны с помощью системы документации Gel (Gel mega, цифровой фотоаппарат и программное обеспечение в компьютере).

Интерпретация результатов ПЦР

Согласно руководству производителя наборов HPV31, 33, 35, 39 и 45 (Sacace-Biotechnologies Srl Caserta — Италия), длина продукта ПЦР для ВПЧ 31 должна быть 520 п.н., ВПЧ 33 должна быть 227 п.н. , HPV 35 должно быть 280 п.н., HPV 39 должно быть 340 п.н., HPV 45 должно быть 475 п.н.

Анализ данных

Управление данными осуществлялось с помощью Статистического пакета для социальных наук (SPSS версия 16). SPSS использовался для анализа и выполнения точного критерия Фишера для определения статистической значимости (значение P <0,05 считалось значимым). Использовались 95% доверительный уровень и доверительные интервалы.

Этические соображения

Перед проведением исследования предложения исследования были одобрены этическим комитетом Суданского университета науки и технологий с этической точки зрения.Затем информированное согласие было согласовано генеральными менеджерами всех национальных онкологических центров, больниц и частных гистопатологических лабораторий, в которых проводилось исследование.

Результаты

В этом исследовании мы исследовали 200 фиксированных формалином блоков ткани парафинового воска, полученных от пациентов, ранее имевших поражение шейки матки (у 150 был диагностирован рак шейки матки и у 50 — доброкачественные поражения шейки матки). Возраст исследуемой группы составлял от 21 до 75 лет, средний возраст — 47 лет.Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 были идентифицированы в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%), 5/150 ( 3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Из 50 образцов ткани с доброкачественными поражениями шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были идентифицированы в 1/50 (2%), 1/50 (2%), 1/50 (2%), 0 / 50 (0%) и 1/50 (2%) соответственно, как показано на рис.

Описание подтипов ВПЧ по типу поражения

Коинфекция была выявлена ​​только между ВПЧ31 и ВПЧ45 в двух случаях (один злокачественный и один доброкачественный), что дает распространенность 36/150 (24%) для подтипов ВПЧ (31 , 33,35 и 45).

Таблица Суммирует распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ. Большинство подтипов ВПЧ были идентифицированы в тканях плоскоклеточного рака. HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 были идентифицированы в 8/11 (72,7%), 5/7 (71,4%), 5/7 (71,4%), 5/5 (100%), 8/11 (72,7%). %) соответственно, как показано на рис.

Таблица 2

Распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ

ВПЧ 11 740 139
Рак ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ125 + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
SCC 8 119 5 119 5 119 8 116
Ad 2 17 1 18 0 19 1 18
AdSC 1 2 1 2 2 1 0 3 1 2
Прочие 0 4 0 3 0 4 0 4 1 3
143 7 143 5 145 11 139

Описание типа рака шейки матки по подтипу ВПЧ

В таблице обобщены частоты инфицирования в разных возрастных группах.Для HPV31 самый высокий уровень инфицирования был обнаружен среди возрастных групп 36–45 лет, за которыми следуют 46–55 лет и 56+, что составляет 6/11 (54,4%), 4/11 (36,4%) и 1/11 (9%), соответственно. Для HPV33 самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп <35 лет, за которыми следуют 36–45 и 46–55 лет, что составляет 3/7 (42,9%), 2/7 (28,6%) и 2/7 (28,6%). %). Что касается ВПЧ35, самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп: 56+ лет, составляющих 3/7 (42,9%), за которыми следуют 45–55, 36–45 и <35 лет, составляющие 2/7 (28.6%), 1/7 (14,3%) и 1/7 (14,3%) соответственно. HPV39 показал высокие показатели инфицирования среди возрастных групп <35 и 46–55 лет, что составляет 2/5 (40%) для каждого. HPV45 указывает на высокий уровень инфицирования среди возрастных групп 36–45 лет, что составляет 4/11 (36,4%), за которыми следуют возрастные диапазоны 56+, <30 и 46–55 лет, что составляет 3/11 (27,3%), 2/11. (18,2%) и 2/11 (18,2%), именно в таком порядке.

Таблица 3

Распределение подтипов ВПЧ по возрасту

Возраст ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ45
ve + ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
> 35 0 31 28 1 3 2 29 2 29
36-45 6 54 2 57 1 0 60140 0 0
46-55 4 61 2 70 2 59 2 70 2 70
56+ 139 1 36 0 37 3 69 1 36 3 34
Всего 11 9013 901 7 19 193 5 195 11 189

Что касается места жительства, то большинство случаев рака шейки матки приходилось на Аль-Джанад, что составляет 52/200 (26%), за которым следует Аден, составляющий 45 человек. / 200 (22.5%), как показано на рис. Что касается места жительства и инфекции ВПЧ, подавляющее большинство инфекций было выявлено среди населения Аль-Джанад, что составляет 14/43 (32,6%), за которыми следуют Аден, Азал, Тохама Хадрамаут и Сабаа, что составляет 11/43 (25,6%). ), 8/43 (18,6%), 4/43 (9,3%), 3/43 (7%) и 3/43 (7%) соответственно, как показано в таблице, рис. Тем не менее, при подсчете процентной доли в пределах отдельного всего жилого дома, самая высокая доля инфекции была обнаружена в Сабаа, что составляет 33 человека.3%, за которыми следуют Аль-Джанад, Аден, Азал, Тохама и Хадрамаут, составляющие 27, 24,4, 20, 16,7 и 10%, в таком порядке, как показано на рис.

Описание исследуемой популяции по ВПЧ-инфекции и месту жительства

Таблица 4

Распределение подтипов ВПЧ по месту жительства

+ ve 2
Регион ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ13 ВПЧ39 -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
Azaal 36 1 39 2 38 1 39 4 36
Аден 3 42 45 2 45 2 43 4 41
Хадрамаут 1 29 1 29 0 30 0 30 1 19
Аль-Джанад 4 48 2 50 3 50 50 3 50
Tohama 1 24 3 21 0 24 0 24 0 24
901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 8 1 8 0 9 0 9
Всего 12 188 8 192 8 192 12 188

Описание исследуемой популяции по инфекции ВПЧ в пределах всей группы проживания

Обсуждение

Смертность шейки матки в Йемене высока заболеваемость раком, и в большинстве случаев диагностируется поздняя стадия заболевания.Фактически, в этом контексте данных по Йемену очень мало; из-за отсутствия достаточного количества национальных реестров. Хотя распространенность ВПЧ в Йемене неизвестна, но данные из соседних стран показывают повышенное бремя. В настоящем исследовании была проверена взаимосвязь между раком шейки матки и наличием генома HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 подтипов высокого риска (HR-HPV). Данные о распространении типа ВПЧ необходимы для оценки возможного воздействия нынешних и будущих стратегий профилактики ВПЧ.

Распространенность и распределение генотипов ВПЧ значительно различаются во всем мире, и эти различия могут быть связаны со сложным географическим и биологическим взаимодействием между различными типами ВПЧ и иммуногенетическими факторами хозяина.

Однако существует недостаток литературы о бремени ВПЧ в Йемене. Насколько нам известно, было только два исследования, посвященных распространению ВПЧ при раке шейки матки. Первый исследовал присутствие HPV16 и HPV18 в 84 образцах ткани рака шейки матки, которые ранее были классифицированы как содержащие HPV по иммуногистохимии с использованием K1H8 (анти-HPV).При использовании ПЦР-тестирования на подтипы ВПЧ 16 и 18; 62/84 (73,8%) были идентифицированы как положительные для подтипа 16 ВПЧ, а остальные 22/84 (26,2%) были отрицательными. Затем снова при тестировании образцов на подтип 18 ВПЧ; 23/84 (27,4%) были признаны положительными, а остальные 61/84 (72,6%) были признаны отрицательными [19]. Другое исследование, проведенное в Йемене, показало, что распространенность подтипов ВПЧ 52, 56, 58, 59 и 66 среди случаев составила 0,6, 0, 4, 3,3 и 0% соответственно [20].

И снова присутствие подтипов ВПЧ высокого риска (ВПЧ-ВПЧ) ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39 и ВПЧ45 ранее сообщалось в ряде исследований.Проспективные последующие исследования показали, что стойкие инфекции HR-HPV играют решающую роль в прогрессировании поражений CIN и в развитии рака шейки матки. Среднее время выведения отдельного типа HR-HPV составило 16,5 месяцев. HPV16 и HPV31 были наиболее стойкими инфекциями (время выведения = 18,1 и 16,2 месяца соответственно), тогда как инфекции HPV39 исчезли быстро. Среднее количество копий на клетку при инфекциях HPV18 / 45, HPV31, HPV33 / 52/58 и HPV39 было выше при персистирующих инфекциях HPV, чем при инфекциях HPV, которые прошли, но разница не была значительной [21].В исследовании, проведенном в Кувейте, по изучению распределения ВПЧ у 298 женщин с аномальной цитологией шейки матки, было обнаружено, что распространенность ВПЧ33 составляла 9,9% [22], что было очень высоким показателем по сравнению с нашими данными. Хотя мы обнаружили, что наиболее распространенными подтипами HPV были HPV31 и HPV45, недавнее исследование показало, что наиболее распространенным генотипом HPV является HPV31, за которым следует HPV35 [23].

Что касается взаимосвязи между возрастом и инфекцией ВПЧ в этом исследовании, было замечено, что ВПЧ31 и ВПЧ45 относительно встречались в более молодом возрасте по сравнению с ВПЧ35 и ВПЧ39; следовательно, ВПЧ33 чаще встречается среди пожилых женщин.Однако количество инфицированных женщин было настолько маленьким, чтобы определить конкретный возрастной диапазон для исследуемых женщин.

Более того, наблюдались значительные расхождения в распределении различных подтипов ВПЧ в разных регионах. Однако объяснение этих результатов требует дальнейшей оценки различных поведенческих, социальных и других демографических показателей на месте. Комплексный скрининг на подтипы ВПЧ, связанные с Пап. Тест может дать более достаточные результаты для будущего планирования потенциальной программы вакцинации в Йемене.

Однако ограничение настоящего исследования включает в себя его исследование, включающее ограниченные подтипы ВПЧ.

В заключение: HR-HPV31, HR-HPV33, HR-HPV35, HR-HPV39 и HR-HPV45 распространены среди йеменских женщин с раком шейки матки. Кроме того, срочно необходимы меры и стратегические планы по снижению бремени рака шейки матки в Йемене.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить сотрудников национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамауте и Адене за помощь в сборе образцов.

Сноски

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

HGA: Дизайн исследования, анализ данных, подготовка рукописи. SHB: Сбор данных и молекулярная идентификация. IMA: Анализ данных и подготовка рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Ссылки

1. Джемал А., Брей Ф., Центр М.М., Ферли Дж., Уорд Э., Форман Д.Глобальная статистика рака. CA Cancer J Clin. 2011; 61: 69–90. DOI: 10.3322 / caac.20107. [PubMed] [CrossRef] 2. Му Му Шве, Кий Чи Ньюнт, Окада С., Харано Т., Хлаинг Мьят Ту, Хла Мьят Мо Мо и др. Тенденция генотипов вируса папилломы человека в неоплазии шейки матки наблюдалась в недавно развивающемся поселке в Янгоне, Мьянма. Acta Med Okayama. 2015; 69 (1): 51–8. [PubMed] 3. Гул С., Мурад С., Джавед А. Распространенность вируса папилломы человека высокого риска в образцах дисплазии шейки матки и рака из городов-побратимов в Пакистане.Int J Infect Dis. 2015; 34: 14–9. DOI: 10.1016 / j.ijid.2015.02.018. [PubMed] [CrossRef]

4. Публикация ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения). Комплексная борьба с раком шейки матки: руководство по основной практике. 2-е изд. 24. 2014.

5. Клиффорд Дж. М., Рана Р. К., Франчески С., Смит Дж. С., Гоф Дж., Пимента Дж. М.. Распределение генотипов вируса папилломы человека при поражениях шейки матки низкой степени злокачественности: сравнение по географическим регионам и с раком шейки матки. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред. 2005. 14 (5): 1157–64.DOI: 10.1158 / 1055-9965.EPI-04-0812. [PubMed] [CrossRef] 6. Тинг Дж., Росич А.Ф., Тейлор С.М., Рахангдейл Л., Соетерс Х.М., Сан X и др. Распространенность поражений шейки матки во всем мире: систематический обзор. Epidemiol Infect. 2015; 143 (2): 225–41. DOI: 10.1017 / S0950268814001356. [PubMed] [CrossRef] 7. Сиддика А, Зайнаб М., Кадри I, Бхатти М.Ф., приход JL. Распространенность и генотипирование вируса папилломы человека высокого риска в образцах рака шейки матки из Пенджаба, Пакистан. Вирусы. 2014. 6 (7): 2762–77.DOI: 10.3390 / v6072762. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 8. Уолбумерс Дж. М., Якобс М. В., Манос М. М., Bosch FX, Куммер Дж. А., Шах К. В. и др. Вирус папилломы человека — необходимая причина инвазивного рака шейки матки во всем мире. J Pathol. 1999; 189: 12–9. [PubMed] 9. Кумар В., Аббас А.К., Фаусто Н., Митчелл Р. «Глава 19, женская половая система и грудь». Основная патология Роббинса. 8. Филадельфия: Сондерс; 2007. 10. Вереш Г.К., Сарка X, Донг П., Гергели Л., Пфистер Х. Функциональное значение вариации последовательности в гене E2 и длинной контрольной области вируса папилломы человека 16 типа.J Gen Virol. 1999; 80: 1035–43. [PubMed] 11. Лонгворт М.С., Лайминс Л.А. Патогенез вирусов папилломы человека в дифференциации эпителия. Microbiol Mol Biol Rev.2004; 68 (2): 362–72. DOI: 10.1128 / MMBR.68.2.362-372.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 12. Гокхале П.С., Сонавани А., Идикула-Томас С., Керкар С., Тонгаонкар Х., Мания-Праманик Дж. Варианты Е6 ВПЧ16: частота, связь с типами ВПЧ и анализ in silico выявленных новых вариантов. J Med Virol.2014; 86 (6): 968–74. DOI: 10.1002 / jmv.23924. [PubMed] [CrossRef] 13. Arbyn M, Tommasino M, Depuydt C, Dillner J. Являются ли 20 типов вируса папилломы человека причиной рака шейки матки? J Pathol. 2014. 234 (4): 431–5. DOI: 10.1002 / путь.4424. [PubMed] [CrossRef] 14. Сеуд М. Бремя заболеваний шейки матки, связанных с вирусом папилломы человека, в странах Среднего Востока и Северной Африки — всесторонний обзор литературы. J Low Genit Tract Dis. 2012; 16: 106–20. PMID: 22371041; DOI: 10.1097 / LGT.0b013e31823a0108.[PubMed] 15. Hilz H, Wiegers U, Adamietz P. Стимуляция действия протеиназы K денатурирующими агентами: применение для выделения нуклеиновых кислот и деградации «замаскированных» белков. Eur J Biochem. 1975; 56: 103–8. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1975.tb02211.x. [PubMed] [CrossRef] 16. Джозеф Сэмбрук DR. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Нью-Йорк: Лаборатория издательства Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор; 2001. 17. Пикор Л.А., Энфилд КСС, Кэмерон Х., Лам В.Л. Извлечение ДНК из парафинового материала для генетического и эпигенетического анализа.J Vis Exp. 2011; 49: e2763. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 18. Pecorelli S, Zigliani L, Odicino F. Пересмотренная стадия FIGO для карциномы шейки матки. Int J Gynaecol Obstet. 2009. 105 (2): 107–8. DOI: 10.1016 / j.ijgo.2009.02.009. [PubMed] [CrossRef] 19. Bensumaidea SH, Ahmed HG, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD. Корреляция иммуногистохимического и молекулярного обнаружения вирусов папилломы человека подтипов 16 и 18. Int J Sci Res. 2014; 3 (11): 2487–90. 20.Bensumaidea SH, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD, Ahmed HG. Распространенность подтипов вируса папилломы человека 52, 56, 58, 59 и 66 среди йеменских пациентов с раком шейки матки. Egypt Acad J Biol Sci. 2014; 6 (2): 21–6. 21. Кульмала С.М., Шабалова И.П., Петровичев Н., Сырьянен К.Дж., Гилленстен У.Б., Йоханссон BC и др. Типоспецифическая персистенция инфекций вируса папилломы человека высокого риска в новых независимых государствах бывшего советского союза когортного исследования. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред.2007. 16 (1): 17–22. [PubMed] 22. Аль-Авади Р., Чехадех В., Джарах М., Аль-Шахин А., Шарма П., Капила К. Распространение вируса папилломы человека среди женщин с аномальной цитологией шейки матки в Кувейте. Diagn Cytopathol. 2013. 41 (2): 107–14. DOI: 10.1002 / dc.21778. [PubMed] [CrossRef] 23. Цакогианнис Д., Папахаралампус М., Тоска Э., Кириакопулу З., Димитриу Т.Г., Рютер И.Г. и др. Дуплексный анализ ПЦР в реальном времени и анализ кривой плавления SYBR green I для молекулярной идентификации генотипов ВПЧ 16, 18, 31, 35, 51 и 66.Зонды Mol Cell. 2015; 29 (1): 13–8. [PubMed]

Частота подтипов вируса папилломы человека (ВПЧ) 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки

Рак, вызывающий инфекцию. 2015; 10: 29.

, , и

Хуссейн Гаделькарим Ахмед

Подразделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Саудовский университет Аравия

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Салех Hussein Bensumaidea

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Ибрахим М.Ashankyty

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиля, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиля, Хаиль il, Королевство Саудовская Аравия

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Кафедра клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия 900 03 Автор, ответственный за переписку.

Поступило 24 марта 2015 г .; Принято 19 августа 2015 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете первоначального автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения. Отказ от лицензии Creative Commons Public Domain Dedication (http: // creativecommons.org / publicdomain / zero / 1.0 /) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Предпосылки

Выявление различных подтипов ВПЧ в неидентифицированных сообществах дает достаточно информации для скрининга и мониторинга потенциального воздействия программы вакцинации. Таким образом, целью этого исследования был скрининг на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Методология

Всего было получено 200 (150 злокачественных и 50 доброкачественных) образцов тканей у йеменских женщин с раком шейки матки, которые были исследованы на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ).

Результаты

Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были выявлены в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%). ), 5/150 (3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Частота этих подтипов ВПЧ среди йеменских женщин с раком шейки матки составила 24%.Заключение. Среди йеменских женщин с раком шейки матки преобладали ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45.

Ключевые слова: Рак шейки матки, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, Йемен

Введение

Рак шейки матки является третьим по распространенности раком у женщин во всем мире [1]. Онкогенный вирус папилломы человека (ВПЧ) является наиболее важным фактором риска, связанным с раком шейки матки [2]. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала.ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3]. Рак шейки матки — одно из самых распространенных онкологических заболеваний среди женщин во всем мире [4]. Рак шейки матки — это очень медленно прогрессирующее заболевание, которому требуется длительный период для перехода от нормального состояния к предраку и потенциально смертельному инвазивному раку. Между предраком и раком существует промежуток в 10–20 лет, который дает возможность скрининга, выявления и лечения предраковых состояний и предотвращения его прогрессирования в рак. Однако женщины с ослабленным иммунитетом чаще и быстрее прогрессируют до предрака и рака [5, 6].

Установлено, что инфекция, вызванная вирусом папилломы человека высокого риска (HR-HPV), является основной причиной рака шейки матки [7]. ВПЧ участвует в 99,7% случаев плоскоклеточного рака шейки матки во всем мире [8]. Вирус папилломы человека (ВПЧ) представляет собой небольшой ДНК-вирус, обычно поражающий слизистые оболочки и кератиноциты кожи. На сегодняшний день известно не менее 200 генотипов ВПЧ. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала. ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3].Типы ВПЧ низкого риска включают типы 6, 11, 42, 43 и 44. Типы ВПЧ высокого риска включают типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. , 73 и 82 [9].

Белки L1 и L2 образуют икосаэдрические капсиды для генерации вирионов потомства. На основании вариации последовательности вариантов L1, L2, HPV различаются по биологическим и химическим свойствам, а также по географическому распространению [10–12]. Внутритипные вариации последовательности также были обнаружены в генах E2, E4, E5, E6 и E7 HPV-16 [10]. Гены E6 и E7 кодируют вирусные онкобелки, нацеленные на Rb и p53, соответственно.Во время жизненного цикла вируса эти белки способствуют стабильному поддержанию эписом и стимулируют дифференцированные клетки к повторному переходу в S-фазу [12]. Онкогенность конкретных вариантов ВПЧ, по-видимому, различается географически и этнически [10, 11]. В 2012 году Международное агентство по изучению рака пришло к выводу, что существуют последовательные и достаточные эпидемиологические, экспериментальные и механистические доказательства канцерогенности для человека ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39, ВПЧ45 для рака шейки матки. Следовательно, эти типы были расценены как канцерогены 1А.Все они принадлежат к семейству α-Papillomaviridae, в зависимости от вида, α7 (HPV39, HPV45) и α9 (HPV31, HPV33, HPV35) [13].

Однако есть очень ограниченные исследования о ВПЧ и связанных с ними раковых заболеваниях в большинстве развивающихся стран, таких как Большой Ближний Восток, включая Йемен и соседние с ним страны, такие как Саудовская Аравия, Катар, Объединенные Арабские Эмираты [14]. Однако большинство исследований в этом контексте сосредоточено на подтипах ВПЧ 16 и 18, игнорируя другие подтипы ВПЧ высокого или низкого риска.Поэтому целью этого исследования было выяснить распространенность ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Материалы и методы

В данном исследовании было получено 200 образцов ткани поражений шейки матки, обработанных парафиновым воском и фиксированным формалином, у ранее прооперированных пациентов из национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамуте и Адене, Йемен. Все образцы и данные были получены из архива национальных онкологических центров, различных больниц и различных частных гистопатологических лабораторий в трех вышеупомянутых провинциях в период с 2008 по 2012 год (полный охват).Образцы рака включали: плоскоклеточный рак (SCC), аденокарциному (Ad), аденосквамо-карциному (AdSC).

Экстракция ДНК

ДНК экстрагировали из образцов, залитых парафином, путем погружения среза ткани в ксилол для растворения парафина из ткани, а затем регидратировали, используя серию промывок этанолом. Белки и вредные ферменты, такие как нуклеазы, переваривались протеиназой К. Для облегчения пищеварения добавляли буфер, содержащий денатурирующий агент (додецилсульфат натрия (SDS)) [15].Нуклеиновые кислоты очищали из лизата ткани с использованием насыщенного буфером фенола и высокоскоростного центрифугирования. После экстракции фенолом добавляли РНКазу А для устранения загрязняющей РНК. Дополнительные экстракции фенола после инкубации с РНКазой А использовали для удаления любого оставшегося фермента. Ацетат натрия и изопропанол добавляли для осаждения ДНК и использовали высокоскоростное центрифугирование для осаждения ДНК и облегчения удаления изопропанола. Отмывку 70% этанолом проводили для удаления избытка солей с последующим центрифугированием для повторного осаждения ДНК [16, 17].ДНК повторно суспендируют в дистиллированной воде, количественно определяют и хранят при -20 ° C. Очищенную ДНК впоследствии использовали в последующих приложениях ПЦР.

Количественное определение ДНК

Чтобы оценить количественное определение ДНК после экстракции ДНК, мы проанализировали результаты измерения ДНК с помощью спектрофотометра NanoDrop.

Амплификация ВПЧ

Типовые праймеры (праймеры для ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45) были использованы для обнаружения ДНК ВПЧ31, 33, 35, 39 и 45 в доброкачественных и злокачественных поражениях шейки матки с принятием классификации процедура классификации TNM Американского объединенного комитета по раку (AJCC) и система стадирования рака шейки матки Международной федерации гинекологии и акушерства (FIGO) [18].Амплификацию проводили с использованием набора HPV31, 33, 35, 39 и 45 от Sacace-Biotechnologies S.r.l. Казерта — Италия. Конечный реакционный объем 40 мкл, содержащий 20 мкл смеси-1 (содержится в пробирках для ПЦР), 10 мкл смеси-2 и 10 мкл экстрагированной ДНК (образец). Отрицательный контроль и положительные пробирки с ДНК HPV31,33,35,39 и 45 содержали 10 мкл буфера ДНК, наносили 10 мкл HPV31,33,35,39 и 45.

Образцы и контроли амплифицировали с использованием системы ПЦР Gene Amp 9700. Программа ПЦР описана в таблице.

Таблица 1

Этапы ПЦР. Время цикла Темп. Шаги ПЦР

Шаг Температура ° C Время Циклы
1 95 ° C Пауза
мин 1
3 95 ° C 30 с 42
63 ° C 30 с
72 ° C 40 с 72 ° C 1 мин 1
5 10 ° C Хранение

Гель-электрофорез

Продукты ПЦР визуализировали в 2% агарозном геле с 0.5 мкг / мл бромистого этидия. В гель загружали десять микролитров ДНК-лестницы длиной 100 п.о. и продукта ПЦР. Гель-электрофорез проводили при 120 В и 36 мА в течение 60 мин. Снимки сделаны с помощью системы документации Gel (Gel mega, цифровой фотоаппарат и программное обеспечение в компьютере).

Интерпретация результатов ПЦР

Согласно руководству производителя наборов HPV31, 33, 35, 39 и 45 (Sacace-Biotechnologies Srl Caserta — Италия), длина продукта ПЦР для ВПЧ 31 должна быть 520 п.н., ВПЧ 33 должна быть 227 п.н. , HPV 35 должно быть 280 п.н., HPV 39 должно быть 340 п.н., HPV 45 должно быть 475 п.н.

Анализ данных

Управление данными осуществлялось с помощью Статистического пакета для социальных наук (SPSS версия 16). SPSS использовался для анализа и выполнения точного критерия Фишера для определения статистической значимости (значение P <0,05 считалось значимым). Использовались 95% доверительный уровень и доверительные интервалы.

Этические соображения

Перед проведением исследования предложения исследования были одобрены этическим комитетом Суданского университета науки и технологий с этической точки зрения.Затем информированное согласие было согласовано генеральными менеджерами всех национальных онкологических центров, больниц и частных гистопатологических лабораторий, в которых проводилось исследование.

Результаты

В этом исследовании мы исследовали 200 фиксированных формалином блоков ткани парафинового воска, полученных от пациентов, ранее имевших поражение шейки матки (у 150 был диагностирован рак шейки матки и у 50 — доброкачественные поражения шейки матки). Возраст исследуемой группы составлял от 21 до 75 лет, средний возраст — 47 лет.Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 были идентифицированы в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%), 5/150 ( 3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Из 50 образцов ткани с доброкачественными поражениями шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были идентифицированы в 1/50 (2%), 1/50 (2%), 1/50 (2%), 0 / 50 (0%) и 1/50 (2%) соответственно, как показано на рис.

Описание подтипов ВПЧ по типу поражения

Коинфекция была выявлена ​​только между ВПЧ31 и ВПЧ45 в двух случаях (один злокачественный и один доброкачественный), что дает распространенность 36/150 (24%) для подтипов ВПЧ (31 , 33,35 и 45).

Таблица Суммирует распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ. Большинство подтипов ВПЧ были идентифицированы в тканях плоскоклеточного рака. HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 были идентифицированы в 8/11 (72,7%), 5/7 (71,4%), 5/7 (71,4%), 5/5 (100%), 8/11 (72,7%). %) соответственно, как показано на рис.

Таблица 2

Распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ

ВПЧ 11 740 139
Рак ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ125 + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
SCC 8 119 5 119 5 119 8 116
Ad 2 17 1 18 0 19 1 18
AdSC 1 2 1 2 2 1 0 3 1 2
Прочие 0 4 0 3 0 4 0 4 1 3
143 7 143 5 145 11 139

Описание типа рака шейки матки по подтипу ВПЧ

В таблице обобщены частоты инфицирования в разных возрастных группах.Для HPV31 самый высокий уровень инфицирования был обнаружен среди возрастных групп 36–45 лет, за которыми следуют 46–55 лет и 56+, что составляет 6/11 (54,4%), 4/11 (36,4%) и 1/11 (9%), соответственно. Для HPV33 самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп <35 лет, за которыми следуют 36–45 и 46–55 лет, что составляет 3/7 (42,9%), 2/7 (28,6%) и 2/7 (28,6%). %). Что касается ВПЧ35, самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп: 56+ лет, составляющих 3/7 (42,9%), за которыми следуют 45–55, 36–45 и <35 лет, составляющие 2/7 (28.6%), 1/7 (14,3%) и 1/7 (14,3%) соответственно. HPV39 показал высокие показатели инфицирования среди возрастных групп <35 и 46–55 лет, что составляет 2/5 (40%) для каждого. HPV45 указывает на высокий уровень инфицирования среди возрастных групп 36–45 лет, что составляет 4/11 (36,4%), за которыми следуют возрастные диапазоны 56+, <30 и 46–55 лет, что составляет 3/11 (27,3%), 2/11. (18,2%) и 2/11 (18,2%), именно в таком порядке.

Таблица 3

Распределение подтипов ВПЧ по возрасту

Возраст ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ45
ve + ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
> 35 0 31 28 1 3 2 29 2 29
36-45 6 54 2 57 1 0 60140 0 0
46-55 4 61 2 70 2 59 2 70 2 70
56+ 139 1 36 0 37 3 69 1 36 3 34
Всего 11 9013 901 7 19 193 5 195 11 189

Что касается места жительства, то большинство случаев рака шейки матки приходилось на Аль-Джанад, что составляет 52/200 (26%), за которым следует Аден, составляющий 45 человек. / 200 (22.5%), как показано на рис. Что касается места жительства и инфекции ВПЧ, подавляющее большинство инфекций было выявлено среди населения Аль-Джанад, что составляет 14/43 (32,6%), за которыми следуют Аден, Азал, Тохама Хадрамаут и Сабаа, что составляет 11/43 (25,6%). ), 8/43 (18,6%), 4/43 (9,3%), 3/43 (7%) и 3/43 (7%) соответственно, как показано в таблице, рис. Тем не менее, при подсчете процентной доли в пределах отдельного всего жилого дома, самая высокая доля инфекции была обнаружена в Сабаа, что составляет 33 человека.3%, за которыми следуют Аль-Джанад, Аден, Азал, Тохама и Хадрамаут, составляющие 27, 24,4, 20, 16,7 и 10%, в таком порядке, как показано на рис.

Описание исследуемой популяции по ВПЧ-инфекции и месту жительства

Таблица 4

Распределение подтипов ВПЧ по месту жительства

+ ve 2
Регион ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ13 ВПЧ39 -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
Azaal 36 1 39 2 38 1 39 4 36
Аден 3 42 45 2 45 2 43 4 41
Хадрамаут 1 29 1 29 0 30 0 30 1 19
Аль-Джанад 4 48 2 50 3 50 50 3 50
Tohama 1 24 3 21 0 24 0 24 0 24
901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 8 1 8 0 9 0 9
Всего 12 188 8 192 8 192 12 188

Описание исследуемой популяции по инфекции ВПЧ в пределах всей группы проживания

Обсуждение

Смертность шейки матки в Йемене высока заболеваемость раком, и в большинстве случаев диагностируется поздняя стадия заболевания.Фактически, в этом контексте данных по Йемену очень мало; из-за отсутствия достаточного количества национальных реестров. Хотя распространенность ВПЧ в Йемене неизвестна, но данные из соседних стран показывают повышенное бремя. В настоящем исследовании была проверена взаимосвязь между раком шейки матки и наличием генома HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 подтипов высокого риска (HR-HPV). Данные о распространении типа ВПЧ необходимы для оценки возможного воздействия нынешних и будущих стратегий профилактики ВПЧ.

Распространенность и распределение генотипов ВПЧ значительно различаются во всем мире, и эти различия могут быть связаны со сложным географическим и биологическим взаимодействием между различными типами ВПЧ и иммуногенетическими факторами хозяина.

Однако существует недостаток литературы о бремени ВПЧ в Йемене. Насколько нам известно, было только два исследования, посвященных распространению ВПЧ при раке шейки матки. Первый исследовал присутствие HPV16 и HPV18 в 84 образцах ткани рака шейки матки, которые ранее были классифицированы как содержащие HPV по иммуногистохимии с использованием K1H8 (анти-HPV).При использовании ПЦР-тестирования на подтипы ВПЧ 16 и 18; 62/84 (73,8%) были идентифицированы как положительные для подтипа 16 ВПЧ, а остальные 22/84 (26,2%) были отрицательными. Затем снова при тестировании образцов на подтип 18 ВПЧ; 23/84 (27,4%) были признаны положительными, а остальные 61/84 (72,6%) были признаны отрицательными [19]. Другое исследование, проведенное в Йемене, показало, что распространенность подтипов ВПЧ 52, 56, 58, 59 и 66 среди случаев составила 0,6, 0, 4, 3,3 и 0% соответственно [20].

И снова присутствие подтипов ВПЧ высокого риска (ВПЧ-ВПЧ) ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39 и ВПЧ45 ранее сообщалось в ряде исследований.Проспективные последующие исследования показали, что стойкие инфекции HR-HPV играют решающую роль в прогрессировании поражений CIN и в развитии рака шейки матки. Среднее время выведения отдельного типа HR-HPV составило 16,5 месяцев. HPV16 и HPV31 были наиболее стойкими инфекциями (время выведения = 18,1 и 16,2 месяца соответственно), тогда как инфекции HPV39 исчезли быстро. Среднее количество копий на клетку при инфекциях HPV18 / 45, HPV31, HPV33 / 52/58 и HPV39 было выше при персистирующих инфекциях HPV, чем при инфекциях HPV, которые прошли, но разница не была значительной [21].В исследовании, проведенном в Кувейте, по изучению распределения ВПЧ у 298 женщин с аномальной цитологией шейки матки, было обнаружено, что распространенность ВПЧ33 составляла 9,9% [22], что было очень высоким показателем по сравнению с нашими данными. Хотя мы обнаружили, что наиболее распространенными подтипами HPV были HPV31 и HPV45, недавнее исследование показало, что наиболее распространенным генотипом HPV является HPV31, за которым следует HPV35 [23].

Что касается взаимосвязи между возрастом и инфекцией ВПЧ в этом исследовании, было замечено, что ВПЧ31 и ВПЧ45 относительно встречались в более молодом возрасте по сравнению с ВПЧ35 и ВПЧ39; следовательно, ВПЧ33 чаще встречается среди пожилых женщин.Однако количество инфицированных женщин было настолько маленьким, чтобы определить конкретный возрастной диапазон для исследуемых женщин.

Более того, наблюдались значительные расхождения в распределении различных подтипов ВПЧ в разных регионах. Однако объяснение этих результатов требует дальнейшей оценки различных поведенческих, социальных и других демографических показателей на месте. Комплексный скрининг на подтипы ВПЧ, связанные с Пап. Тест может дать более достаточные результаты для будущего планирования потенциальной программы вакцинации в Йемене.

Однако ограничение настоящего исследования включает в себя его исследование, включающее ограниченные подтипы ВПЧ.

В заключение: HR-HPV31, HR-HPV33, HR-HPV35, HR-HPV39 и HR-HPV45 распространены среди йеменских женщин с раком шейки матки. Кроме того, срочно необходимы меры и стратегические планы по снижению бремени рака шейки матки в Йемене.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить сотрудников национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамауте и Адене за помощь в сборе образцов.

Сноски

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

HGA: Дизайн исследования, анализ данных, подготовка рукописи. SHB: Сбор данных и молекулярная идентификация. IMA: Анализ данных и подготовка рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Ссылки

1. Джемал А., Брей Ф., Центр М.М., Ферли Дж., Уорд Э., Форман Д.Глобальная статистика рака. CA Cancer J Clin. 2011; 61: 69–90. DOI: 10.3322 / caac.20107. [PubMed] [CrossRef] 2. Му Му Шве, Кий Чи Ньюнт, Окада С., Харано Т., Хлаинг Мьят Ту, Хла Мьят Мо Мо и др. Тенденция генотипов вируса папилломы человека в неоплазии шейки матки наблюдалась в недавно развивающемся поселке в Янгоне, Мьянма. Acta Med Okayama. 2015; 69 (1): 51–8. [PubMed] 3. Гул С., Мурад С., Джавед А. Распространенность вируса папилломы человека высокого риска в образцах дисплазии шейки матки и рака из городов-побратимов в Пакистане.Int J Infect Dis. 2015; 34: 14–9. DOI: 10.1016 / j.ijid.2015.02.018. [PubMed] [CrossRef]

4. Публикация ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения). Комплексная борьба с раком шейки матки: руководство по основной практике. 2-е изд. 24. 2014.

5. Клиффорд Дж. М., Рана Р. К., Франчески С., Смит Дж. С., Гоф Дж., Пимента Дж. М.. Распределение генотипов вируса папилломы человека при поражениях шейки матки низкой степени злокачественности: сравнение по географическим регионам и с раком шейки матки. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред. 2005. 14 (5): 1157–64.DOI: 10.1158 / 1055-9965.EPI-04-0812. [PubMed] [CrossRef] 6. Тинг Дж., Росич А.Ф., Тейлор С.М., Рахангдейл Л., Соетерс Х.М., Сан X и др. Распространенность поражений шейки матки во всем мире: систематический обзор. Epidemiol Infect. 2015; 143 (2): 225–41. DOI: 10.1017 / S0950268814001356. [PubMed] [CrossRef] 7. Сиддика А, Зайнаб М., Кадри I, Бхатти М.Ф., приход JL. Распространенность и генотипирование вируса папилломы человека высокого риска в образцах рака шейки матки из Пенджаба, Пакистан. Вирусы. 2014. 6 (7): 2762–77.DOI: 10.3390 / v6072762. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 8. Уолбумерс Дж. М., Якобс М. В., Манос М. М., Bosch FX, Куммер Дж. А., Шах К. В. и др. Вирус папилломы человека — необходимая причина инвазивного рака шейки матки во всем мире. J Pathol. 1999; 189: 12–9. [PubMed] 9. Кумар В., Аббас А.К., Фаусто Н., Митчелл Р. «Глава 19, женская половая система и грудь». Основная патология Роббинса. 8. Филадельфия: Сондерс; 2007. 10. Вереш Г.К., Сарка X, Донг П., Гергели Л., Пфистер Х. Функциональное значение вариации последовательности в гене E2 и длинной контрольной области вируса папилломы человека 16 типа.J Gen Virol. 1999; 80: 1035–43. [PubMed] 11. Лонгворт М.С., Лайминс Л.А. Патогенез вирусов папилломы человека в дифференциации эпителия. Microbiol Mol Biol Rev.2004; 68 (2): 362–72. DOI: 10.1128 / MMBR.68.2.362-372.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 12. Гокхале П.С., Сонавани А., Идикула-Томас С., Керкар С., Тонгаонкар Х., Мания-Праманик Дж. Варианты Е6 ВПЧ16: частота, связь с типами ВПЧ и анализ in silico выявленных новых вариантов. J Med Virol.2014; 86 (6): 968–74. DOI: 10.1002 / jmv.23924. [PubMed] [CrossRef] 13. Arbyn M, Tommasino M, Depuydt C, Dillner J. Являются ли 20 типов вируса папилломы человека причиной рака шейки матки? J Pathol. 2014. 234 (4): 431–5. DOI: 10.1002 / путь.4424. [PubMed] [CrossRef] 14. Сеуд М. Бремя заболеваний шейки матки, связанных с вирусом папилломы человека, в странах Среднего Востока и Северной Африки — всесторонний обзор литературы. J Low Genit Tract Dis. 2012; 16: 106–20. PMID: 22371041; DOI: 10.1097 / LGT.0b013e31823a0108.[PubMed] 15. Hilz H, Wiegers U, Adamietz P. Стимуляция действия протеиназы K денатурирующими агентами: применение для выделения нуклеиновых кислот и деградации «замаскированных» белков. Eur J Biochem. 1975; 56: 103–8. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1975.tb02211.x. [PubMed] [CrossRef] 16. Джозеф Сэмбрук DR. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Нью-Йорк: Лаборатория издательства Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор; 2001. 17. Пикор Л.А., Энфилд КСС, Кэмерон Х., Лам В.Л. Извлечение ДНК из парафинового материала для генетического и эпигенетического анализа.J Vis Exp. 2011; 49: e2763. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 18. Pecorelli S, Zigliani L, Odicino F. Пересмотренная стадия FIGO для карциномы шейки матки. Int J Gynaecol Obstet. 2009. 105 (2): 107–8. DOI: 10.1016 / j.ijgo.2009.02.009. [PubMed] [CrossRef] 19. Bensumaidea SH, Ahmed HG, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD. Корреляция иммуногистохимического и молекулярного обнаружения вирусов папилломы человека подтипов 16 и 18. Int J Sci Res. 2014; 3 (11): 2487–90. 20.Bensumaidea SH, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD, Ahmed HG. Распространенность подтипов вируса папилломы человека 52, 56, 58, 59 и 66 среди йеменских пациентов с раком шейки матки. Egypt Acad J Biol Sci. 2014; 6 (2): 21–6. 21. Кульмала С.М., Шабалова И.П., Петровичев Н., Сырьянен К.Дж., Гилленстен У.Б., Йоханссон BC и др. Типоспецифическая персистенция инфекций вируса папилломы человека высокого риска в новых независимых государствах бывшего советского союза когортного исследования. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред.2007. 16 (1): 17–22. [PubMed] 22. Аль-Авади Р., Чехадех В., Джарах М., Аль-Шахин А., Шарма П., Капила К. Распространение вируса папилломы человека среди женщин с аномальной цитологией шейки матки в Кувейте. Diagn Cytopathol. 2013. 41 (2): 107–14. DOI: 10.1002 / dc.21778. [PubMed] [CrossRef] 23. Цакогианнис Д., Папахаралампус М., Тоска Э., Кириакопулу З., Димитриу Т.Г., Рютер И.Г. и др. Дуплексный анализ ПЦР в реальном времени и анализ кривой плавления SYBR green I для молекулярной идентификации генотипов ВПЧ 16, 18, 31, 35, 51 и 66.Зонды Mol Cell. 2015; 29 (1): 13–8. [PubMed]

Частота подтипов вируса папилломы человека (ВПЧ) 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки

Рак, вызывающий инфекцию. 2015; 10: 29.

, , и

Хуссейн Гаделькарим Ахмед

Подразделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Саудовский университет Аравия

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Салех Hussein Bensumaidea

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Ибрахим М.Ashankyty

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиля, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиля, Хаиль il, Королевство Саудовская Аравия

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Кафедра клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия 900 03 Автор, ответственный за переписку.

Поступило 24 марта 2015 г .; Принято 19 августа 2015 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете первоначального автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения. Отказ от лицензии Creative Commons Public Domain Dedication (http: // creativecommons.org / publicdomain / zero / 1.0 /) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Предпосылки

Выявление различных подтипов ВПЧ в неидентифицированных сообществах дает достаточно информации для скрининга и мониторинга потенциального воздействия программы вакцинации. Таким образом, целью этого исследования был скрининг на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Методология

Всего было получено 200 (150 злокачественных и 50 доброкачественных) образцов тканей у йеменских женщин с раком шейки матки, которые были исследованы на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ).

Результаты

Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были выявлены в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%). ), 5/150 (3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Частота этих подтипов ВПЧ среди йеменских женщин с раком шейки матки составила 24%.Заключение. Среди йеменских женщин с раком шейки матки преобладали ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45.

Ключевые слова: Рак шейки матки, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, Йемен

Введение

Рак шейки матки является третьим по распространенности раком у женщин во всем мире [1]. Онкогенный вирус папилломы человека (ВПЧ) является наиболее важным фактором риска, связанным с раком шейки матки [2]. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала.ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3]. Рак шейки матки — одно из самых распространенных онкологических заболеваний среди женщин во всем мире [4]. Рак шейки матки — это очень медленно прогрессирующее заболевание, которому требуется длительный период для перехода от нормального состояния к предраку и потенциально смертельному инвазивному раку. Между предраком и раком существует промежуток в 10–20 лет, который дает возможность скрининга, выявления и лечения предраковых состояний и предотвращения его прогрессирования в рак. Однако женщины с ослабленным иммунитетом чаще и быстрее прогрессируют до предрака и рака [5, 6].

Установлено, что инфекция, вызванная вирусом папилломы человека высокого риска (HR-HPV), является основной причиной рака шейки матки [7]. ВПЧ участвует в 99,7% случаев плоскоклеточного рака шейки матки во всем мире [8]. Вирус папилломы человека (ВПЧ) представляет собой небольшой ДНК-вирус, обычно поражающий слизистые оболочки и кератиноциты кожи. На сегодняшний день известно не менее 200 генотипов ВПЧ. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала. ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3].Типы ВПЧ низкого риска включают типы 6, 11, 42, 43 и 44. Типы ВПЧ высокого риска включают типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. , 73 и 82 [9].

Белки L1 и L2 образуют икосаэдрические капсиды для генерации вирионов потомства. На основании вариации последовательности вариантов L1, L2, HPV различаются по биологическим и химическим свойствам, а также по географическому распространению [10–12]. Внутритипные вариации последовательности также были обнаружены в генах E2, E4, E5, E6 и E7 HPV-16 [10]. Гены E6 и E7 кодируют вирусные онкобелки, нацеленные на Rb и p53, соответственно.Во время жизненного цикла вируса эти белки способствуют стабильному поддержанию эписом и стимулируют дифференцированные клетки к повторному переходу в S-фазу [12]. Онкогенность конкретных вариантов ВПЧ, по-видимому, различается географически и этнически [10, 11]. В 2012 году Международное агентство по изучению рака пришло к выводу, что существуют последовательные и достаточные эпидемиологические, экспериментальные и механистические доказательства канцерогенности для человека ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39, ВПЧ45 для рака шейки матки. Следовательно, эти типы были расценены как канцерогены 1А.Все они принадлежат к семейству α-Papillomaviridae, в зависимости от вида, α7 (HPV39, HPV45) и α9 (HPV31, HPV33, HPV35) [13].

Однако есть очень ограниченные исследования о ВПЧ и связанных с ними раковых заболеваниях в большинстве развивающихся стран, таких как Большой Ближний Восток, включая Йемен и соседние с ним страны, такие как Саудовская Аравия, Катар, Объединенные Арабские Эмираты [14]. Однако большинство исследований в этом контексте сосредоточено на подтипах ВПЧ 16 и 18, игнорируя другие подтипы ВПЧ высокого или низкого риска.Поэтому целью этого исследования было выяснить распространенность ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Материалы и методы

В данном исследовании было получено 200 образцов ткани поражений шейки матки, обработанных парафиновым воском и фиксированным формалином, у ранее прооперированных пациентов из национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамуте и Адене, Йемен. Все образцы и данные были получены из архива национальных онкологических центров, различных больниц и различных частных гистопатологических лабораторий в трех вышеупомянутых провинциях в период с 2008 по 2012 год (полный охват).Образцы рака включали: плоскоклеточный рак (SCC), аденокарциному (Ad), аденосквамо-карциному (AdSC).

Экстракция ДНК

ДНК экстрагировали из образцов, залитых парафином, путем погружения среза ткани в ксилол для растворения парафина из ткани, а затем регидратировали, используя серию промывок этанолом. Белки и вредные ферменты, такие как нуклеазы, переваривались протеиназой К. Для облегчения пищеварения добавляли буфер, содержащий денатурирующий агент (додецилсульфат натрия (SDS)) [15].Нуклеиновые кислоты очищали из лизата ткани с использованием насыщенного буфером фенола и высокоскоростного центрифугирования. После экстракции фенолом добавляли РНКазу А для устранения загрязняющей РНК. Дополнительные экстракции фенола после инкубации с РНКазой А использовали для удаления любого оставшегося фермента. Ацетат натрия и изопропанол добавляли для осаждения ДНК и использовали высокоскоростное центрифугирование для осаждения ДНК и облегчения удаления изопропанола. Отмывку 70% этанолом проводили для удаления избытка солей с последующим центрифугированием для повторного осаждения ДНК [16, 17].ДНК повторно суспендируют в дистиллированной воде, количественно определяют и хранят при -20 ° C. Очищенную ДНК впоследствии использовали в последующих приложениях ПЦР.

Количественное определение ДНК

Чтобы оценить количественное определение ДНК после экстракции ДНК, мы проанализировали результаты измерения ДНК с помощью спектрофотометра NanoDrop.

Амплификация ВПЧ

Типовые праймеры (праймеры для ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45) были использованы для обнаружения ДНК ВПЧ31, 33, 35, 39 и 45 в доброкачественных и злокачественных поражениях шейки матки с принятием классификации процедура классификации TNM Американского объединенного комитета по раку (AJCC) и система стадирования рака шейки матки Международной федерации гинекологии и акушерства (FIGO) [18].Амплификацию проводили с использованием набора HPV31, 33, 35, 39 и 45 от Sacace-Biotechnologies S.r.l. Казерта — Италия. Конечный реакционный объем 40 мкл, содержащий 20 мкл смеси-1 (содержится в пробирках для ПЦР), 10 мкл смеси-2 и 10 мкл экстрагированной ДНК (образец). Отрицательный контроль и положительные пробирки с ДНК HPV31,33,35,39 и 45 содержали 10 мкл буфера ДНК, наносили 10 мкл HPV31,33,35,39 и 45.

Образцы и контроли амплифицировали с использованием системы ПЦР Gene Amp 9700. Программа ПЦР описана в таблице.

Таблица 1

Этапы ПЦР. Время цикла Темп. Шаги ПЦР

Шаг Температура ° C Время Циклы
1 95 ° C Пауза
мин 1
3 95 ° C 30 с 42
63 ° C 30 с
72 ° C 40 с 72 ° C 1 мин 1
5 10 ° C Хранение

Гель-электрофорез

Продукты ПЦР визуализировали в 2% агарозном геле с 0.5 мкг / мл бромистого этидия. В гель загружали десять микролитров ДНК-лестницы длиной 100 п.о. и продукта ПЦР. Гель-электрофорез проводили при 120 В и 36 мА в течение 60 мин. Снимки сделаны с помощью системы документации Gel (Gel mega, цифровой фотоаппарат и программное обеспечение в компьютере).

Интерпретация результатов ПЦР

Согласно руководству производителя наборов HPV31, 33, 35, 39 и 45 (Sacace-Biotechnologies Srl Caserta — Италия), длина продукта ПЦР для ВПЧ 31 должна быть 520 п.н., ВПЧ 33 должна быть 227 п.н. , HPV 35 должно быть 280 п.н., HPV 39 должно быть 340 п.н., HPV 45 должно быть 475 п.н.

Анализ данных

Управление данными осуществлялось с помощью Статистического пакета для социальных наук (SPSS версия 16). SPSS использовался для анализа и выполнения точного критерия Фишера для определения статистической значимости (значение P <0,05 считалось значимым). Использовались 95% доверительный уровень и доверительные интервалы.

Этические соображения

Перед проведением исследования предложения исследования были одобрены этическим комитетом Суданского университета науки и технологий с этической точки зрения.Затем информированное согласие было согласовано генеральными менеджерами всех национальных онкологических центров, больниц и частных гистопатологических лабораторий, в которых проводилось исследование.

Результаты

В этом исследовании мы исследовали 200 фиксированных формалином блоков ткани парафинового воска, полученных от пациентов, ранее имевших поражение шейки матки (у 150 был диагностирован рак шейки матки и у 50 — доброкачественные поражения шейки матки). Возраст исследуемой группы составлял от 21 до 75 лет, средний возраст — 47 лет.Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 были идентифицированы в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%), 5/150 ( 3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Из 50 образцов ткани с доброкачественными поражениями шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были идентифицированы в 1/50 (2%), 1/50 (2%), 1/50 (2%), 0 / 50 (0%) и 1/50 (2%) соответственно, как показано на рис.

Описание подтипов ВПЧ по типу поражения

Коинфекция была выявлена ​​только между ВПЧ31 и ВПЧ45 в двух случаях (один злокачественный и один доброкачественный), что дает распространенность 36/150 (24%) для подтипов ВПЧ (31 , 33,35 и 45).

Таблица Суммирует распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ. Большинство подтипов ВПЧ были идентифицированы в тканях плоскоклеточного рака. HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 были идентифицированы в 8/11 (72,7%), 5/7 (71,4%), 5/7 (71,4%), 5/5 (100%), 8/11 (72,7%). %) соответственно, как показано на рис.

Таблица 2

Распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ

ВПЧ 11 740 139
Рак ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ125 + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
SCC 8 119 5 119 5 119 8 116
Ad 2 17 1 18 0 19 1 18
AdSC 1 2 1 2 2 1 0 3 1 2
Прочие 0 4 0 3 0 4 0 4 1 3
143 7 143 5 145 11 139

Описание типа рака шейки матки по подтипу ВПЧ

В таблице обобщены частоты инфицирования в разных возрастных группах.Для HPV31 самый высокий уровень инфицирования был обнаружен среди возрастных групп 36–45 лет, за которыми следуют 46–55 лет и 56+, что составляет 6/11 (54,4%), 4/11 (36,4%) и 1/11 (9%), соответственно. Для HPV33 самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп <35 лет, за которыми следуют 36–45 и 46–55 лет, что составляет 3/7 (42,9%), 2/7 (28,6%) и 2/7 (28,6%). %). Что касается ВПЧ35, самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп: 56+ лет, составляющих 3/7 (42,9%), за которыми следуют 45–55, 36–45 и <35 лет, составляющие 2/7 (28.6%), 1/7 (14,3%) и 1/7 (14,3%) соответственно. HPV39 показал высокие показатели инфицирования среди возрастных групп <35 и 46–55 лет, что составляет 2/5 (40%) для каждого. HPV45 указывает на высокий уровень инфицирования среди возрастных групп 36–45 лет, что составляет 4/11 (36,4%), за которыми следуют возрастные диапазоны 56+, <30 и 46–55 лет, что составляет 3/11 (27,3%), 2/11. (18,2%) и 2/11 (18,2%), именно в таком порядке.

Таблица 3

Распределение подтипов ВПЧ по возрасту

Возраст ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ45
ve + ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
> 35 0 31 28 1 3 2 29 2 29
36-45 6 54 2 57 1 0 60140 0 0
46-55 4 61 2 70 2 59 2 70 2 70
56+ 139 1 36 0 37 3 69 1 36 3 34
Всего 11 9013 901 7 19 193 5 195 11 189

Что касается места жительства, то большинство случаев рака шейки матки приходилось на Аль-Джанад, что составляет 52/200 (26%), за которым следует Аден, составляющий 45 человек. / 200 (22.5%), как показано на рис. Что касается места жительства и инфекции ВПЧ, подавляющее большинство инфекций было выявлено среди населения Аль-Джанад, что составляет 14/43 (32,6%), за которыми следуют Аден, Азал, Тохама Хадрамаут и Сабаа, что составляет 11/43 (25,6%). ), 8/43 (18,6%), 4/43 (9,3%), 3/43 (7%) и 3/43 (7%) соответственно, как показано в таблице, рис. Тем не менее, при подсчете процентной доли в пределах отдельного всего жилого дома, самая высокая доля инфекции была обнаружена в Сабаа, что составляет 33 человека.3%, за которыми следуют Аль-Джанад, Аден, Азал, Тохама и Хадрамаут, составляющие 27, 24,4, 20, 16,7 и 10%, в таком порядке, как показано на рис.

Описание исследуемой популяции по ВПЧ-инфекции и месту жительства

Таблица 4

Распределение подтипов ВПЧ по месту жительства

+ ve 2
Регион ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ13 ВПЧ39 -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
Azaal 36 1 39 2 38 1 39 4 36
Аден 3 42 45 2 45 2 43 4 41
Хадрамаут 1 29 1 29 0 30 0 30 1 19
Аль-Джанад 4 48 2 50 3 50 50 3 50
Tohama 1 24 3 21 0 24 0 24 0 24
901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 8 1 8 0 9 0 9
Всего 12 188 8 192 8 192 12 188

Описание исследуемой популяции по инфекции ВПЧ в пределах всей группы проживания

Обсуждение

Смертность шейки матки в Йемене высока заболеваемость раком, и в большинстве случаев диагностируется поздняя стадия заболевания.Фактически, в этом контексте данных по Йемену очень мало; из-за отсутствия достаточного количества национальных реестров. Хотя распространенность ВПЧ в Йемене неизвестна, но данные из соседних стран показывают повышенное бремя. В настоящем исследовании была проверена взаимосвязь между раком шейки матки и наличием генома HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 подтипов высокого риска (HR-HPV). Данные о распространении типа ВПЧ необходимы для оценки возможного воздействия нынешних и будущих стратегий профилактики ВПЧ.

Распространенность и распределение генотипов ВПЧ значительно различаются во всем мире, и эти различия могут быть связаны со сложным географическим и биологическим взаимодействием между различными типами ВПЧ и иммуногенетическими факторами хозяина.

Однако существует недостаток литературы о бремени ВПЧ в Йемене. Насколько нам известно, было только два исследования, посвященных распространению ВПЧ при раке шейки матки. Первый исследовал присутствие HPV16 и HPV18 в 84 образцах ткани рака шейки матки, которые ранее были классифицированы как содержащие HPV по иммуногистохимии с использованием K1H8 (анти-HPV).При использовании ПЦР-тестирования на подтипы ВПЧ 16 и 18; 62/84 (73,8%) были идентифицированы как положительные для подтипа 16 ВПЧ, а остальные 22/84 (26,2%) были отрицательными. Затем снова при тестировании образцов на подтип 18 ВПЧ; 23/84 (27,4%) были признаны положительными, а остальные 61/84 (72,6%) были признаны отрицательными [19]. Другое исследование, проведенное в Йемене, показало, что распространенность подтипов ВПЧ 52, 56, 58, 59 и 66 среди случаев составила 0,6, 0, 4, 3,3 и 0% соответственно [20].

И снова присутствие подтипов ВПЧ высокого риска (ВПЧ-ВПЧ) ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39 и ВПЧ45 ранее сообщалось в ряде исследований.Проспективные последующие исследования показали, что стойкие инфекции HR-HPV играют решающую роль в прогрессировании поражений CIN и в развитии рака шейки матки. Среднее время выведения отдельного типа HR-HPV составило 16,5 месяцев. HPV16 и HPV31 были наиболее стойкими инфекциями (время выведения = 18,1 и 16,2 месяца соответственно), тогда как инфекции HPV39 исчезли быстро. Среднее количество копий на клетку при инфекциях HPV18 / 45, HPV31, HPV33 / 52/58 и HPV39 было выше при персистирующих инфекциях HPV, чем при инфекциях HPV, которые прошли, но разница не была значительной [21].В исследовании, проведенном в Кувейте, по изучению распределения ВПЧ у 298 женщин с аномальной цитологией шейки матки, было обнаружено, что распространенность ВПЧ33 составляла 9,9% [22], что было очень высоким показателем по сравнению с нашими данными. Хотя мы обнаружили, что наиболее распространенными подтипами HPV были HPV31 и HPV45, недавнее исследование показало, что наиболее распространенным генотипом HPV является HPV31, за которым следует HPV35 [23].

Что касается взаимосвязи между возрастом и инфекцией ВПЧ в этом исследовании, было замечено, что ВПЧ31 и ВПЧ45 относительно встречались в более молодом возрасте по сравнению с ВПЧ35 и ВПЧ39; следовательно, ВПЧ33 чаще встречается среди пожилых женщин.Однако количество инфицированных женщин было настолько маленьким, чтобы определить конкретный возрастной диапазон для исследуемых женщин.

Более того, наблюдались значительные расхождения в распределении различных подтипов ВПЧ в разных регионах. Однако объяснение этих результатов требует дальнейшей оценки различных поведенческих, социальных и других демографических показателей на месте. Комплексный скрининг на подтипы ВПЧ, связанные с Пап. Тест может дать более достаточные результаты для будущего планирования потенциальной программы вакцинации в Йемене.

Однако ограничение настоящего исследования включает в себя его исследование, включающее ограниченные подтипы ВПЧ.

В заключение: HR-HPV31, HR-HPV33, HR-HPV35, HR-HPV39 и HR-HPV45 распространены среди йеменских женщин с раком шейки матки. Кроме того, срочно необходимы меры и стратегические планы по снижению бремени рака шейки матки в Йемене.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить сотрудников национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамауте и Адене за помощь в сборе образцов.

Сноски

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

HGA: Дизайн исследования, анализ данных, подготовка рукописи. SHB: Сбор данных и молекулярная идентификация. IMA: Анализ данных и подготовка рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Ссылки

1. Джемал А., Брей Ф., Центр М.М., Ферли Дж., Уорд Э., Форман Д.Глобальная статистика рака. CA Cancer J Clin. 2011; 61: 69–90. DOI: 10.3322 / caac.20107. [PubMed] [CrossRef] 2. Му Му Шве, Кий Чи Ньюнт, Окада С., Харано Т., Хлаинг Мьят Ту, Хла Мьят Мо Мо и др. Тенденция генотипов вируса папилломы человека в неоплазии шейки матки наблюдалась в недавно развивающемся поселке в Янгоне, Мьянма. Acta Med Okayama. 2015; 69 (1): 51–8. [PubMed] 3. Гул С., Мурад С., Джавед А. Распространенность вируса папилломы человека высокого риска в образцах дисплазии шейки матки и рака из городов-побратимов в Пакистане.Int J Infect Dis. 2015; 34: 14–9. DOI: 10.1016 / j.ijid.2015.02.018. [PubMed] [CrossRef]

4. Публикация ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения). Комплексная борьба с раком шейки матки: руководство по основной практике. 2-е изд. 24. 2014.

5. Клиффорд Дж. М., Рана Р. К., Франчески С., Смит Дж. С., Гоф Дж., Пимента Дж. М.. Распределение генотипов вируса папилломы человека при поражениях шейки матки низкой степени злокачественности: сравнение по географическим регионам и с раком шейки матки. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред. 2005. 14 (5): 1157–64.DOI: 10.1158 / 1055-9965.EPI-04-0812. [PubMed] [CrossRef] 6. Тинг Дж., Росич А.Ф., Тейлор С.М., Рахангдейл Л., Соетерс Х.М., Сан X и др. Распространенность поражений шейки матки во всем мире: систематический обзор. Epidemiol Infect. 2015; 143 (2): 225–41. DOI: 10.1017 / S0950268814001356. [PubMed] [CrossRef] 7. Сиддика А, Зайнаб М., Кадри I, Бхатти М.Ф., приход JL. Распространенность и генотипирование вируса папилломы человека высокого риска в образцах рака шейки матки из Пенджаба, Пакистан. Вирусы. 2014. 6 (7): 2762–77.DOI: 10.3390 / v6072762. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 8. Уолбумерс Дж. М., Якобс М. В., Манос М. М., Bosch FX, Куммер Дж. А., Шах К. В. и др. Вирус папилломы человека — необходимая причина инвазивного рака шейки матки во всем мире. J Pathol. 1999; 189: 12–9. [PubMed] 9. Кумар В., Аббас А.К., Фаусто Н., Митчелл Р. «Глава 19, женская половая система и грудь». Основная патология Роббинса. 8. Филадельфия: Сондерс; 2007. 10. Вереш Г.К., Сарка X, Донг П., Гергели Л., Пфистер Х. Функциональное значение вариации последовательности в гене E2 и длинной контрольной области вируса папилломы человека 16 типа.J Gen Virol. 1999; 80: 1035–43. [PubMed] 11. Лонгворт М.С., Лайминс Л.А. Патогенез вирусов папилломы человека в дифференциации эпителия. Microbiol Mol Biol Rev.2004; 68 (2): 362–72. DOI: 10.1128 / MMBR.68.2.362-372.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 12. Гокхале П.С., Сонавани А., Идикула-Томас С., Керкар С., Тонгаонкар Х., Мания-Праманик Дж. Варианты Е6 ВПЧ16: частота, связь с типами ВПЧ и анализ in silico выявленных новых вариантов. J Med Virol.2014; 86 (6): 968–74. DOI: 10.1002 / jmv.23924. [PubMed] [CrossRef] 13. Arbyn M, Tommasino M, Depuydt C, Dillner J. Являются ли 20 типов вируса папилломы человека причиной рака шейки матки? J Pathol. 2014. 234 (4): 431–5. DOI: 10.1002 / путь.4424. [PubMed] [CrossRef] 14. Сеуд М. Бремя заболеваний шейки матки, связанных с вирусом папилломы человека, в странах Среднего Востока и Северной Африки — всесторонний обзор литературы. J Low Genit Tract Dis. 2012; 16: 106–20. PMID: 22371041; DOI: 10.1097 / LGT.0b013e31823a0108.[PubMed] 15. Hilz H, Wiegers U, Adamietz P. Стимуляция действия протеиназы K денатурирующими агентами: применение для выделения нуклеиновых кислот и деградации «замаскированных» белков. Eur J Biochem. 1975; 56: 103–8. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1975.tb02211.x. [PubMed] [CrossRef] 16. Джозеф Сэмбрук DR. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Нью-Йорк: Лаборатория издательства Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор; 2001. 17. Пикор Л.А., Энфилд КСС, Кэмерон Х., Лам В.Л. Извлечение ДНК из парафинового материала для генетического и эпигенетического анализа.J Vis Exp. 2011; 49: e2763. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 18. Pecorelli S, Zigliani L, Odicino F. Пересмотренная стадия FIGO для карциномы шейки матки. Int J Gynaecol Obstet. 2009. 105 (2): 107–8. DOI: 10.1016 / j.ijgo.2009.02.009. [PubMed] [CrossRef] 19. Bensumaidea SH, Ahmed HG, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD. Корреляция иммуногистохимического и молекулярного обнаружения вирусов папилломы человека подтипов 16 и 18. Int J Sci Res. 2014; 3 (11): 2487–90. 20.Bensumaidea SH, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD, Ahmed HG. Распространенность подтипов вируса папилломы человека 52, 56, 58, 59 и 66 среди йеменских пациентов с раком шейки матки. Egypt Acad J Biol Sci. 2014; 6 (2): 21–6. 21. Кульмала С.М., Шабалова И.П., Петровичев Н., Сырьянен К.Дж., Гилленстен У.Б., Йоханссон BC и др. Типоспецифическая персистенция инфекций вируса папилломы человека высокого риска в новых независимых государствах бывшего советского союза когортного исследования. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред.2007. 16 (1): 17–22. [PubMed] 22. Аль-Авади Р., Чехадех В., Джарах М., Аль-Шахин А., Шарма П., Капила К. Распространение вируса папилломы человека среди женщин с аномальной цитологией шейки матки в Кувейте. Diagn Cytopathol. 2013. 41 (2): 107–14. DOI: 10.1002 / dc.21778. [PubMed] [CrossRef] 23. Цакогианнис Д., Папахаралампус М., Тоска Э., Кириакопулу З., Димитриу Т.Г., Рютер И.Г. и др. Дуплексный анализ ПЦР в реальном времени и анализ кривой плавления SYBR green I для молекулярной идентификации генотипов ВПЧ 16, 18, 31, 35, 51 и 66.Зонды Mol Cell. 2015; 29 (1): 13–8. [PubMed]

Частота подтипов вируса папилломы человека (ВПЧ) 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки

Рак, вызывающий инфекцию. 2015; 10: 29.

, , и

Хуссейн Гаделькарим Ахмед

Подразделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Саудовский университет Аравия

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Салех Hussein Bensumaidea

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Ибрахим М.Ashankyty

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиля, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиля, Хаиль il, Королевство Саудовская Аравия

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Кафедра клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия 900 03 Автор, ответственный за переписку.

Поступило 24 марта 2015 г .; Принято 19 августа 2015 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете первоначального автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения. Отказ от лицензии Creative Commons Public Domain Dedication (http: // creativecommons.org / publicdomain / zero / 1.0 /) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Предпосылки

Выявление различных подтипов ВПЧ в неидентифицированных сообществах дает достаточно информации для скрининга и мониторинга потенциального воздействия программы вакцинации. Таким образом, целью этого исследования был скрининг на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Методология

Всего было получено 200 (150 злокачественных и 50 доброкачественных) образцов тканей у йеменских женщин с раком шейки матки, которые были исследованы на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ).

Результаты

Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были выявлены в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%). ), 5/150 (3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Частота этих подтипов ВПЧ среди йеменских женщин с раком шейки матки составила 24%.Заключение. Среди йеменских женщин с раком шейки матки преобладали ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45.

Ключевые слова: Рак шейки матки, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, Йемен

Введение

Рак шейки матки является третьим по распространенности раком у женщин во всем мире [1]. Онкогенный вирус папилломы человека (ВПЧ) является наиболее важным фактором риска, связанным с раком шейки матки [2]. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала.ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3]. Рак шейки матки — одно из самых распространенных онкологических заболеваний среди женщин во всем мире [4]. Рак шейки матки — это очень медленно прогрессирующее заболевание, которому требуется длительный период для перехода от нормального состояния к предраку и потенциально смертельному инвазивному раку. Между предраком и раком существует промежуток в 10–20 лет, который дает возможность скрининга, выявления и лечения предраковых состояний и предотвращения его прогрессирования в рак. Однако женщины с ослабленным иммунитетом чаще и быстрее прогрессируют до предрака и рака [5, 6].

Установлено, что инфекция, вызванная вирусом папилломы человека высокого риска (HR-HPV), является основной причиной рака шейки матки [7]. ВПЧ участвует в 99,7% случаев плоскоклеточного рака шейки матки во всем мире [8]. Вирус папилломы человека (ВПЧ) представляет собой небольшой ДНК-вирус, обычно поражающий слизистые оболочки и кератиноциты кожи. На сегодняшний день известно не менее 200 генотипов ВПЧ. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала. ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3].Типы ВПЧ низкого риска включают типы 6, 11, 42, 43 и 44. Типы ВПЧ высокого риска включают типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. , 73 и 82 [9].

Белки L1 и L2 образуют икосаэдрические капсиды для генерации вирионов потомства. На основании вариации последовательности вариантов L1, L2, HPV различаются по биологическим и химическим свойствам, а также по географическому распространению [10–12]. Внутритипные вариации последовательности также были обнаружены в генах E2, E4, E5, E6 и E7 HPV-16 [10]. Гены E6 и E7 кодируют вирусные онкобелки, нацеленные на Rb и p53, соответственно.Во время жизненного цикла вируса эти белки способствуют стабильному поддержанию эписом и стимулируют дифференцированные клетки к повторному переходу в S-фазу [12]. Онкогенность конкретных вариантов ВПЧ, по-видимому, различается географически и этнически [10, 11]. В 2012 году Международное агентство по изучению рака пришло к выводу, что существуют последовательные и достаточные эпидемиологические, экспериментальные и механистические доказательства канцерогенности для человека ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39, ВПЧ45 для рака шейки матки. Следовательно, эти типы были расценены как канцерогены 1А.Все они принадлежат к семейству α-Papillomaviridae, в зависимости от вида, α7 (HPV39, HPV45) и α9 (HPV31, HPV33, HPV35) [13].

Однако есть очень ограниченные исследования о ВПЧ и связанных с ними раковых заболеваниях в большинстве развивающихся стран, таких как Большой Ближний Восток, включая Йемен и соседние с ним страны, такие как Саудовская Аравия, Катар, Объединенные Арабские Эмираты [14]. Однако большинство исследований в этом контексте сосредоточено на подтипах ВПЧ 16 и 18, игнорируя другие подтипы ВПЧ высокого или низкого риска.Поэтому целью этого исследования было выяснить распространенность ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Материалы и методы

В данном исследовании было получено 200 образцов ткани поражений шейки матки, обработанных парафиновым воском и фиксированным формалином, у ранее прооперированных пациентов из национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамуте и Адене, Йемен. Все образцы и данные были получены из архива национальных онкологических центров, различных больниц и различных частных гистопатологических лабораторий в трех вышеупомянутых провинциях в период с 2008 по 2012 год (полный охват).Образцы рака включали: плоскоклеточный рак (SCC), аденокарциному (Ad), аденосквамо-карциному (AdSC).

Экстракция ДНК

ДНК экстрагировали из образцов, залитых парафином, путем погружения среза ткани в ксилол для растворения парафина из ткани, а затем регидратировали, используя серию промывок этанолом. Белки и вредные ферменты, такие как нуклеазы, переваривались протеиназой К. Для облегчения пищеварения добавляли буфер, содержащий денатурирующий агент (додецилсульфат натрия (SDS)) [15].Нуклеиновые кислоты очищали из лизата ткани с использованием насыщенного буфером фенола и высокоскоростного центрифугирования. После экстракции фенолом добавляли РНКазу А для устранения загрязняющей РНК. Дополнительные экстракции фенола после инкубации с РНКазой А использовали для удаления любого оставшегося фермента. Ацетат натрия и изопропанол добавляли для осаждения ДНК и использовали высокоскоростное центрифугирование для осаждения ДНК и облегчения удаления изопропанола. Отмывку 70% этанолом проводили для удаления избытка солей с последующим центрифугированием для повторного осаждения ДНК [16, 17].ДНК повторно суспендируют в дистиллированной воде, количественно определяют и хранят при -20 ° C. Очищенную ДНК впоследствии использовали в последующих приложениях ПЦР.

Количественное определение ДНК

Чтобы оценить количественное определение ДНК после экстракции ДНК, мы проанализировали результаты измерения ДНК с помощью спектрофотометра NanoDrop.

Амплификация ВПЧ

Типовые праймеры (праймеры для ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45) были использованы для обнаружения ДНК ВПЧ31, 33, 35, 39 и 45 в доброкачественных и злокачественных поражениях шейки матки с принятием классификации процедура классификации TNM Американского объединенного комитета по раку (AJCC) и система стадирования рака шейки матки Международной федерации гинекологии и акушерства (FIGO) [18].Амплификацию проводили с использованием набора HPV31, 33, 35, 39 и 45 от Sacace-Biotechnologies S.r.l. Казерта — Италия. Конечный реакционный объем 40 мкл, содержащий 20 мкл смеси-1 (содержится в пробирках для ПЦР), 10 мкл смеси-2 и 10 мкл экстрагированной ДНК (образец). Отрицательный контроль и положительные пробирки с ДНК HPV31,33,35,39 и 45 содержали 10 мкл буфера ДНК, наносили 10 мкл HPV31,33,35,39 и 45.

Образцы и контроли амплифицировали с использованием системы ПЦР Gene Amp 9700. Программа ПЦР описана в таблице.

Таблица 1

Этапы ПЦР. Время цикла Темп. Шаги ПЦР

Шаг Температура ° C Время Циклы
1 95 ° C Пауза
мин 1
3 95 ° C 30 с 42
63 ° C 30 с
72 ° C 40 с 72 ° C 1 мин 1
5 10 ° C Хранение

Гель-электрофорез

Продукты ПЦР визуализировали в 2% агарозном геле с 0.5 мкг / мл бромистого этидия. В гель загружали десять микролитров ДНК-лестницы длиной 100 п.о. и продукта ПЦР. Гель-электрофорез проводили при 120 В и 36 мА в течение 60 мин. Снимки сделаны с помощью системы документации Gel (Gel mega, цифровой фотоаппарат и программное обеспечение в компьютере).

Интерпретация результатов ПЦР

Согласно руководству производителя наборов HPV31, 33, 35, 39 и 45 (Sacace-Biotechnologies Srl Caserta — Италия), длина продукта ПЦР для ВПЧ 31 должна быть 520 п.н., ВПЧ 33 должна быть 227 п.н. , HPV 35 должно быть 280 п.н., HPV 39 должно быть 340 п.н., HPV 45 должно быть 475 п.н.

Анализ данных

Управление данными осуществлялось с помощью Статистического пакета для социальных наук (SPSS версия 16). SPSS использовался для анализа и выполнения точного критерия Фишера для определения статистической значимости (значение P <0,05 считалось значимым). Использовались 95% доверительный уровень и доверительные интервалы.

Этические соображения

Перед проведением исследования предложения исследования были одобрены этическим комитетом Суданского университета науки и технологий с этической точки зрения.Затем информированное согласие было согласовано генеральными менеджерами всех национальных онкологических центров, больниц и частных гистопатологических лабораторий, в которых проводилось исследование.

Результаты

В этом исследовании мы исследовали 200 фиксированных формалином блоков ткани парафинового воска, полученных от пациентов, ранее имевших поражение шейки матки (у 150 был диагностирован рак шейки матки и у 50 — доброкачественные поражения шейки матки). Возраст исследуемой группы составлял от 21 до 75 лет, средний возраст — 47 лет.Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 были идентифицированы в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%), 5/150 ( 3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Из 50 образцов ткани с доброкачественными поражениями шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были идентифицированы в 1/50 (2%), 1/50 (2%), 1/50 (2%), 0 / 50 (0%) и 1/50 (2%) соответственно, как показано на рис.

Описание подтипов ВПЧ по типу поражения

Коинфекция была выявлена ​​только между ВПЧ31 и ВПЧ45 в двух случаях (один злокачественный и один доброкачественный), что дает распространенность 36/150 (24%) для подтипов ВПЧ (31 , 33,35 и 45).

Таблица Суммирует распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ. Большинство подтипов ВПЧ были идентифицированы в тканях плоскоклеточного рака. HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 были идентифицированы в 8/11 (72,7%), 5/7 (71,4%), 5/7 (71,4%), 5/5 (100%), 8/11 (72,7%). %) соответственно, как показано на рис.

Таблица 2

Распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ

ВПЧ 11 740 139
Рак ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ125 + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
SCC 8 119 5 119 5 119 8 116
Ad 2 17 1 18 0 19 1 18
AdSC 1 2 1 2 2 1 0 3 1 2
Прочие 0 4 0 3 0 4 0 4 1 3
143 7 143 5 145 11 139

Описание типа рака шейки матки по подтипу ВПЧ

В таблице обобщены частоты инфицирования в разных возрастных группах.Для HPV31 самый высокий уровень инфицирования был обнаружен среди возрастных групп 36–45 лет, за которыми следуют 46–55 лет и 56+, что составляет 6/11 (54,4%), 4/11 (36,4%) и 1/11 (9%), соответственно. Для HPV33 самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп <35 лет, за которыми следуют 36–45 и 46–55 лет, что составляет 3/7 (42,9%), 2/7 (28,6%) и 2/7 (28,6%). %). Что касается ВПЧ35, самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп: 56+ лет, составляющих 3/7 (42,9%), за которыми следуют 45–55, 36–45 и <35 лет, составляющие 2/7 (28.6%), 1/7 (14,3%) и 1/7 (14,3%) соответственно. HPV39 показал высокие показатели инфицирования среди возрастных групп <35 и 46–55 лет, что составляет 2/5 (40%) для каждого. HPV45 указывает на высокий уровень инфицирования среди возрастных групп 36–45 лет, что составляет 4/11 (36,4%), за которыми следуют возрастные диапазоны 56+, <30 и 46–55 лет, что составляет 3/11 (27,3%), 2/11. (18,2%) и 2/11 (18,2%), именно в таком порядке.

Таблица 3

Распределение подтипов ВПЧ по возрасту

Возраст ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ45
ve + ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
> 35 0 31 28 1 3 2 29 2 29
36-45 6 54 2 57 1 0 60140 0 0
46-55 4 61 2 70 2 59 2 70 2 70
56+ 139 1 36 0 37 3 69 1 36 3 34
Всего 11 9013 901 7 19 193 5 195 11 189

Что касается места жительства, то большинство случаев рака шейки матки приходилось на Аль-Джанад, что составляет 52/200 (26%), за которым следует Аден, составляющий 45 человек. / 200 (22.5%), как показано на рис. Что касается места жительства и инфекции ВПЧ, подавляющее большинство инфекций было выявлено среди населения Аль-Джанад, что составляет 14/43 (32,6%), за которыми следуют Аден, Азал, Тохама Хадрамаут и Сабаа, что составляет 11/43 (25,6%). ), 8/43 (18,6%), 4/43 (9,3%), 3/43 (7%) и 3/43 (7%) соответственно, как показано в таблице, рис. Тем не менее, при подсчете процентной доли в пределах отдельного всего жилого дома, самая высокая доля инфекции была обнаружена в Сабаа, что составляет 33 человека.3%, за которыми следуют Аль-Джанад, Аден, Азал, Тохама и Хадрамаут, составляющие 27, 24,4, 20, 16,7 и 10%, в таком порядке, как показано на рис.

Описание исследуемой популяции по ВПЧ-инфекции и месту жительства

Таблица 4

Распределение подтипов ВПЧ по месту жительства

+ ve 2
Регион ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ13 ВПЧ39 -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
Azaal 36 1 39 2 38 1 39 4 36
Аден 3 42 45 2 45 2 43 4 41
Хадрамаут 1 29 1 29 0 30 0 30 1 19
Аль-Джанад 4 48 2 50 3 50 50 3 50
Tohama 1 24 3 21 0 24 0 24 0 24
901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 8 1 8 0 9 0 9
Всего 12 188 8 192 8 192 12 188

Описание исследуемой популяции по инфекции ВПЧ в пределах всей группы проживания

Обсуждение

Смертность шейки матки в Йемене высока заболеваемость раком, и в большинстве случаев диагностируется поздняя стадия заболевания.Фактически, в этом контексте данных по Йемену очень мало; из-за отсутствия достаточного количества национальных реестров. Хотя распространенность ВПЧ в Йемене неизвестна, но данные из соседних стран показывают повышенное бремя. В настоящем исследовании была проверена взаимосвязь между раком шейки матки и наличием генома HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 подтипов высокого риска (HR-HPV). Данные о распространении типа ВПЧ необходимы для оценки возможного воздействия нынешних и будущих стратегий профилактики ВПЧ.

Распространенность и распределение генотипов ВПЧ значительно различаются во всем мире, и эти различия могут быть связаны со сложным географическим и биологическим взаимодействием между различными типами ВПЧ и иммуногенетическими факторами хозяина.

Однако существует недостаток литературы о бремени ВПЧ в Йемене. Насколько нам известно, было только два исследования, посвященных распространению ВПЧ при раке шейки матки. Первый исследовал присутствие HPV16 и HPV18 в 84 образцах ткани рака шейки матки, которые ранее были классифицированы как содержащие HPV по иммуногистохимии с использованием K1H8 (анти-HPV).При использовании ПЦР-тестирования на подтипы ВПЧ 16 и 18; 62/84 (73,8%) были идентифицированы как положительные для подтипа 16 ВПЧ, а остальные 22/84 (26,2%) были отрицательными. Затем снова при тестировании образцов на подтип 18 ВПЧ; 23/84 (27,4%) были признаны положительными, а остальные 61/84 (72,6%) были признаны отрицательными [19]. Другое исследование, проведенное в Йемене, показало, что распространенность подтипов ВПЧ 52, 56, 58, 59 и 66 среди случаев составила 0,6, 0, 4, 3,3 и 0% соответственно [20].

И снова присутствие подтипов ВПЧ высокого риска (ВПЧ-ВПЧ) ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39 и ВПЧ45 ранее сообщалось в ряде исследований.Проспективные последующие исследования показали, что стойкие инфекции HR-HPV играют решающую роль в прогрессировании поражений CIN и в развитии рака шейки матки. Среднее время выведения отдельного типа HR-HPV составило 16,5 месяцев. HPV16 и HPV31 были наиболее стойкими инфекциями (время выведения = 18,1 и 16,2 месяца соответственно), тогда как инфекции HPV39 исчезли быстро. Среднее количество копий на клетку при инфекциях HPV18 / 45, HPV31, HPV33 / 52/58 и HPV39 было выше при персистирующих инфекциях HPV, чем при инфекциях HPV, которые прошли, но разница не была значительной [21].В исследовании, проведенном в Кувейте, по изучению распределения ВПЧ у 298 женщин с аномальной цитологией шейки матки, было обнаружено, что распространенность ВПЧ33 составляла 9,9% [22], что было очень высоким показателем по сравнению с нашими данными. Хотя мы обнаружили, что наиболее распространенными подтипами HPV были HPV31 и HPV45, недавнее исследование показало, что наиболее распространенным генотипом HPV является HPV31, за которым следует HPV35 [23].

Что касается взаимосвязи между возрастом и инфекцией ВПЧ в этом исследовании, было замечено, что ВПЧ31 и ВПЧ45 относительно встречались в более молодом возрасте по сравнению с ВПЧ35 и ВПЧ39; следовательно, ВПЧ33 чаще встречается среди пожилых женщин.Однако количество инфицированных женщин было настолько маленьким, чтобы определить конкретный возрастной диапазон для исследуемых женщин.

Более того, наблюдались значительные расхождения в распределении различных подтипов ВПЧ в разных регионах. Однако объяснение этих результатов требует дальнейшей оценки различных поведенческих, социальных и других демографических показателей на месте. Комплексный скрининг на подтипы ВПЧ, связанные с Пап. Тест может дать более достаточные результаты для будущего планирования потенциальной программы вакцинации в Йемене.

Однако ограничение настоящего исследования включает в себя его исследование, включающее ограниченные подтипы ВПЧ.

В заключение: HR-HPV31, HR-HPV33, HR-HPV35, HR-HPV39 и HR-HPV45 распространены среди йеменских женщин с раком шейки матки. Кроме того, срочно необходимы меры и стратегические планы по снижению бремени рака шейки матки в Йемене.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить сотрудников национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамауте и Адене за помощь в сборе образцов.

Сноски

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

HGA: Дизайн исследования, анализ данных, подготовка рукописи. SHB: Сбор данных и молекулярная идентификация. IMA: Анализ данных и подготовка рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Ссылки

1. Джемал А., Брей Ф., Центр М.М., Ферли Дж., Уорд Э., Форман Д.Глобальная статистика рака. CA Cancer J Clin. 2011; 61: 69–90. DOI: 10.3322 / caac.20107. [PubMed] [CrossRef] 2. Му Му Шве, Кий Чи Ньюнт, Окада С., Харано Т., Хлаинг Мьят Ту, Хла Мьят Мо Мо и др. Тенденция генотипов вируса папилломы человека в неоплазии шейки матки наблюдалась в недавно развивающемся поселке в Янгоне, Мьянма. Acta Med Okayama. 2015; 69 (1): 51–8. [PubMed] 3. Гул С., Мурад С., Джавед А. Распространенность вируса папилломы человека высокого риска в образцах дисплазии шейки матки и рака из городов-побратимов в Пакистане.Int J Infect Dis. 2015; 34: 14–9. DOI: 10.1016 / j.ijid.2015.02.018. [PubMed] [CrossRef]

4. Публикация ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения). Комплексная борьба с раком шейки матки: руководство по основной практике. 2-е изд. 24. 2014.

5. Клиффорд Дж. М., Рана Р. К., Франчески С., Смит Дж. С., Гоф Дж., Пимента Дж. М.. Распределение генотипов вируса папилломы человека при поражениях шейки матки низкой степени злокачественности: сравнение по географическим регионам и с раком шейки матки. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред. 2005. 14 (5): 1157–64.DOI: 10.1158 / 1055-9965.EPI-04-0812. [PubMed] [CrossRef] 6. Тинг Дж., Росич А.Ф., Тейлор С.М., Рахангдейл Л., Соетерс Х.М., Сан X и др. Распространенность поражений шейки матки во всем мире: систематический обзор. Epidemiol Infect. 2015; 143 (2): 225–41. DOI: 10.1017 / S0950268814001356. [PubMed] [CrossRef] 7. Сиддика А, Зайнаб М., Кадри I, Бхатти М.Ф., приход JL. Распространенность и генотипирование вируса папилломы человека высокого риска в образцах рака шейки матки из Пенджаба, Пакистан. Вирусы. 2014. 6 (7): 2762–77.DOI: 10.3390 / v6072762. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 8. Уолбумерс Дж. М., Якобс М. В., Манос М. М., Bosch FX, Куммер Дж. А., Шах К. В. и др. Вирус папилломы человека — необходимая причина инвазивного рака шейки матки во всем мире. J Pathol. 1999; 189: 12–9. [PubMed] 9. Кумар В., Аббас А.К., Фаусто Н., Митчелл Р. «Глава 19, женская половая система и грудь». Основная патология Роббинса. 8. Филадельфия: Сондерс; 2007. 10. Вереш Г.К., Сарка X, Донг П., Гергели Л., Пфистер Х. Функциональное значение вариации последовательности в гене E2 и длинной контрольной области вируса папилломы человека 16 типа.J Gen Virol. 1999; 80: 1035–43. [PubMed] 11. Лонгворт М.С., Лайминс Л.А. Патогенез вирусов папилломы человека в дифференциации эпителия. Microbiol Mol Biol Rev.2004; 68 (2): 362–72. DOI: 10.1128 / MMBR.68.2.362-372.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 12. Гокхале П.С., Сонавани А., Идикула-Томас С., Керкар С., Тонгаонкар Х., Мания-Праманик Дж. Варианты Е6 ВПЧ16: частота, связь с типами ВПЧ и анализ in silico выявленных новых вариантов. J Med Virol.2014; 86 (6): 968–74. DOI: 10.1002 / jmv.23924. [PubMed] [CrossRef] 13. Arbyn M, Tommasino M, Depuydt C, Dillner J. Являются ли 20 типов вируса папилломы человека причиной рака шейки матки? J Pathol. 2014. 234 (4): 431–5. DOI: 10.1002 / путь.4424. [PubMed] [CrossRef] 14. Сеуд М. Бремя заболеваний шейки матки, связанных с вирусом папилломы человека, в странах Среднего Востока и Северной Африки — всесторонний обзор литературы. J Low Genit Tract Dis. 2012; 16: 106–20. PMID: 22371041; DOI: 10.1097 / LGT.0b013e31823a0108.[PubMed] 15. Hilz H, Wiegers U, Adamietz P. Стимуляция действия протеиназы K денатурирующими агентами: применение для выделения нуклеиновых кислот и деградации «замаскированных» белков. Eur J Biochem. 1975; 56: 103–8. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1975.tb02211.x. [PubMed] [CrossRef] 16. Джозеф Сэмбрук DR. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Нью-Йорк: Лаборатория издательства Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор; 2001. 17. Пикор Л.А., Энфилд КСС, Кэмерон Х., Лам В.Л. Извлечение ДНК из парафинового материала для генетического и эпигенетического анализа.J Vis Exp. 2011; 49: e2763. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 18. Pecorelli S, Zigliani L, Odicino F. Пересмотренная стадия FIGO для карциномы шейки матки. Int J Gynaecol Obstet. 2009. 105 (2): 107–8. DOI: 10.1016 / j.ijgo.2009.02.009. [PubMed] [CrossRef] 19. Bensumaidea SH, Ahmed HG, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD. Корреляция иммуногистохимического и молекулярного обнаружения вирусов папилломы человека подтипов 16 и 18. Int J Sci Res. 2014; 3 (11): 2487–90. 20.Bensumaidea SH, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD, Ahmed HG. Распространенность подтипов вируса папилломы человека 52, 56, 58, 59 и 66 среди йеменских пациентов с раком шейки матки. Egypt Acad J Biol Sci. 2014; 6 (2): 21–6. 21. Кульмала С.М., Шабалова И.П., Петровичев Н., Сырьянен К.Дж., Гилленстен У.Б., Йоханссон BC и др. Типоспецифическая персистенция инфекций вируса папилломы человека высокого риска в новых независимых государствах бывшего советского союза когортного исследования. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред.2007. 16 (1): 17–22. [PubMed] 22. Аль-Авади Р., Чехадех В., Джарах М., Аль-Шахин А., Шарма П., Капила К. Распространение вируса папилломы человека среди женщин с аномальной цитологией шейки матки в Кувейте. Diagn Cytopathol. 2013. 41 (2): 107–14. DOI: 10.1002 / dc.21778. [PubMed] [CrossRef] 23. Цакогианнис Д., Папахаралампус М., Тоска Э., Кириакопулу З., Димитриу Т.Г., Рютер И.Г. и др. Дуплексный анализ ПЦР в реальном времени и анализ кривой плавления SYBR green I для молекулярной идентификации генотипов ВПЧ 16, 18, 31, 35, 51 и 66.Зонды Mol Cell. 2015; 29 (1): 13–8. [PubMed]

Частота подтипов вируса папилломы человека (ВПЧ) 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки

Рак, вызывающий инфекцию. 2015; 10: 29.

, , и

Хуссейн Гаделькарим Ахмед

Подразделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Саудовский университет Аравия

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Салех Hussein Bensumaidea

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Ибрахим М.Ashankyty

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиля, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиля, Хаиль il, Королевство Саудовская Аравия

Отделение молекулярной диагностики и индивидуальной терапии, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия

Отделение патологии, Медицинский колледж, Университет Хаиля, 2240 Хайль, Королевство Саудовская Аравия

Кафедра гистопатологии и цитологии, FMLS, Университет Хартума, Хартум, Судан

Кафедра патологии, Медицинский колледж, Университет науки и технологий Хадрамаут, Хадрамаут, Йемен

Кафедра клинических лабораторных наук, Колледж прикладных медицинских наук, Университет Хаиль, Хаиль, Королевство Саудовская Аравия 900 03 Автор, ответственный за переписку.

Поступило 24 марта 2015 г .; Принято 19 августа 2015 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете первоначального автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения. Отказ от лицензии Creative Commons Public Domain Dedication (http: // creativecommons.org / publicdomain / zero / 1.0 /) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Предпосылки

Выявление различных подтипов ВПЧ в неидентифицированных сообществах дает достаточно информации для скрининга и мониторинга потенциального воздействия программы вакцинации. Таким образом, целью этого исследования был скрининг на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Методология

Всего было получено 200 (150 злокачественных и 50 доброкачественных) образцов тканей у йеменских женщин с раком шейки матки, которые были исследованы на наличие подтипов ВПЧ 31,33,35,39 и 45 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ).

Результаты

Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были выявлены в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%). ), 5/150 (3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Частота этих подтипов ВПЧ среди йеменских женщин с раком шейки матки составила 24%.Заключение. Среди йеменских женщин с раком шейки матки преобладали ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45.

Ключевые слова: Рак шейки матки, HPV31, HPV33, HPV35, HPV39, HPV45, Йемен

Введение

Рак шейки матки является третьим по распространенности раком у женщин во всем мире [1]. Онкогенный вирус папилломы человека (ВПЧ) является наиболее важным фактором риска, связанным с раком шейки матки [2]. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала.ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3]. Рак шейки матки — одно из самых распространенных онкологических заболеваний среди женщин во всем мире [4]. Рак шейки матки — это очень медленно прогрессирующее заболевание, которому требуется длительный период для перехода от нормального состояния к предраку и потенциально смертельному инвазивному раку. Между предраком и раком существует промежуток в 10–20 лет, который дает возможность скрининга, выявления и лечения предраковых состояний и предотвращения его прогрессирования в рак. Однако женщины с ослабленным иммунитетом чаще и быстрее прогрессируют до предрака и рака [5, 6].

Установлено, что инфекция, вызванная вирусом папилломы человека высокого риска (HR-HPV), является основной причиной рака шейки матки [7]. ВПЧ участвует в 99,7% случаев плоскоклеточного рака шейки матки во всем мире [8]. Вирус папилломы человека (ВПЧ) представляет собой небольшой ДНК-вирус, обычно поражающий слизистые оболочки и кератиноциты кожи. На сегодняшний день известно не менее 200 генотипов ВПЧ. ВПЧ разделены на группы высокого и низкого риска на основе их онкогенного потенциала. ВПЧ высокого риска считается ведущей этиологической причиной рака шейки матки [3].Типы ВПЧ низкого риска включают типы 6, 11, 42, 43 и 44. Типы ВПЧ высокого риска включают типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. , 73 и 82 [9].

Белки L1 и L2 образуют икосаэдрические капсиды для генерации вирионов потомства. На основании вариации последовательности вариантов L1, L2, HPV различаются по биологическим и химическим свойствам, а также по географическому распространению [10–12]. Внутритипные вариации последовательности также были обнаружены в генах E2, E4, E5, E6 и E7 HPV-16 [10]. Гены E6 и E7 кодируют вирусные онкобелки, нацеленные на Rb и p53, соответственно.Во время жизненного цикла вируса эти белки способствуют стабильному поддержанию эписом и стимулируют дифференцированные клетки к повторному переходу в S-фазу [12]. Онкогенность конкретных вариантов ВПЧ, по-видимому, различается географически и этнически [10, 11]. В 2012 году Международное агентство по изучению рака пришло к выводу, что существуют последовательные и достаточные эпидемиологические, экспериментальные и механистические доказательства канцерогенности для человека ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39, ВПЧ45 для рака шейки матки. Следовательно, эти типы были расценены как канцерогены 1А.Все они принадлежат к семейству α-Papillomaviridae, в зависимости от вида, α7 (HPV39, HPV45) и α9 (HPV31, HPV33, HPV35) [13].

Однако есть очень ограниченные исследования о ВПЧ и связанных с ними раковых заболеваниях в большинстве развивающихся стран, таких как Большой Ближний Восток, включая Йемен и соседние с ним страны, такие как Саудовская Аравия, Катар, Объединенные Арабские Эмираты [14]. Однако большинство исследований в этом контексте сосредоточено на подтипах ВПЧ 16 и 18, игнорируя другие подтипы ВПЧ высокого или низкого риска.Поэтому целью этого исследования было выяснить распространенность ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 среди йеменских женщин с раком шейки матки.

Материалы и методы

В данном исследовании было получено 200 образцов ткани поражений шейки матки, обработанных парафиновым воском и фиксированным формалином, у ранее прооперированных пациентов из национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамуте и Адене, Йемен. Все образцы и данные были получены из архива национальных онкологических центров, различных больниц и различных частных гистопатологических лабораторий в трех вышеупомянутых провинциях в период с 2008 по 2012 год (полный охват).Образцы рака включали: плоскоклеточный рак (SCC), аденокарциному (Ad), аденосквамо-карциному (AdSC).

Экстракция ДНК

ДНК экстрагировали из образцов, залитых парафином, путем погружения среза ткани в ксилол для растворения парафина из ткани, а затем регидратировали, используя серию промывок этанолом. Белки и вредные ферменты, такие как нуклеазы, переваривались протеиназой К. Для облегчения пищеварения добавляли буфер, содержащий денатурирующий агент (додецилсульфат натрия (SDS)) [15].Нуклеиновые кислоты очищали из лизата ткани с использованием насыщенного буфером фенола и высокоскоростного центрифугирования. После экстракции фенолом добавляли РНКазу А для устранения загрязняющей РНК. Дополнительные экстракции фенола после инкубации с РНКазой А использовали для удаления любого оставшегося фермента. Ацетат натрия и изопропанол добавляли для осаждения ДНК и использовали высокоскоростное центрифугирование для осаждения ДНК и облегчения удаления изопропанола. Отмывку 70% этанолом проводили для удаления избытка солей с последующим центрифугированием для повторного осаждения ДНК [16, 17].ДНК повторно суспендируют в дистиллированной воде, количественно определяют и хранят при -20 ° C. Очищенную ДНК впоследствии использовали в последующих приложениях ПЦР.

Количественное определение ДНК

Чтобы оценить количественное определение ДНК после экстракции ДНК, мы проанализировали результаты измерения ДНК с помощью спектрофотометра NanoDrop.

Амплификация ВПЧ

Типовые праймеры (праймеры для ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45) были использованы для обнаружения ДНК ВПЧ31, 33, 35, 39 и 45 в доброкачественных и злокачественных поражениях шейки матки с принятием классификации процедура классификации TNM Американского объединенного комитета по раку (AJCC) и система стадирования рака шейки матки Международной федерации гинекологии и акушерства (FIGO) [18].Амплификацию проводили с использованием набора HPV31, 33, 35, 39 и 45 от Sacace-Biotechnologies S.r.l. Казерта — Италия. Конечный реакционный объем 40 мкл, содержащий 20 мкл смеси-1 (содержится в пробирках для ПЦР), 10 мкл смеси-2 и 10 мкл экстрагированной ДНК (образец). Отрицательный контроль и положительные пробирки с ДНК HPV31,33,35,39 и 45 содержали 10 мкл буфера ДНК, наносили 10 мкл HPV31,33,35,39 и 45.

Образцы и контроли амплифицировали с использованием системы ПЦР Gene Amp 9700. Программа ПЦР описана в таблице.

Таблица 1

Этапы ПЦР. Время цикла Темп. Шаги ПЦР

Шаг Температура ° C Время Циклы
1 95 ° C Пауза
мин 1
3 95 ° C 30 с 42
63 ° C 30 с
72 ° C 40 с 72 ° C 1 мин 1
5 10 ° C Хранение

Гель-электрофорез

Продукты ПЦР визуализировали в 2% агарозном геле с 0.5 мкг / мл бромистого этидия. В гель загружали десять микролитров ДНК-лестницы длиной 100 п.о. и продукта ПЦР. Гель-электрофорез проводили при 120 В и 36 мА в течение 60 мин. Снимки сделаны с помощью системы документации Gel (Gel mega, цифровой фотоаппарат и программное обеспечение в компьютере).

Интерпретация результатов ПЦР

Согласно руководству производителя наборов HPV31, 33, 35, 39 и 45 (Sacace-Biotechnologies Srl Caserta — Италия), длина продукта ПЦР для ВПЧ 31 должна быть 520 п.н., ВПЧ 33 должна быть 227 п.н. , HPV 35 должно быть 280 п.н., HPV 39 должно быть 340 п.н., HPV 45 должно быть 475 п.н.

Анализ данных

Управление данными осуществлялось с помощью Статистического пакета для социальных наук (SPSS версия 16). SPSS использовался для анализа и выполнения точного критерия Фишера для определения статистической значимости (значение P <0,05 считалось значимым). Использовались 95% доверительный уровень и доверительные интервалы.

Этические соображения

Перед проведением исследования предложения исследования были одобрены этическим комитетом Суданского университета науки и технологий с этической точки зрения.Затем информированное согласие было согласовано генеральными менеджерами всех национальных онкологических центров, больниц и частных гистопатологических лабораторий, в которых проводилось исследование.

Результаты

В этом исследовании мы исследовали 200 фиксированных формалином блоков ткани парафинового воска, полученных от пациентов, ранее имевших поражение шейки матки (у 150 был диагностирован рак шейки матки и у 50 — доброкачественные поражения шейки матки). Возраст исследуемой группы составлял от 21 до 75 лет, средний возраст — 47 лет.Из 150 образцов ткани рака шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ 35, ВПЧ 39 и ВПЧ 45 были идентифицированы в 10/150 (6,7%), 6/150 (4%), 6/150 (4%), 5/150 ( 3,3%) и 10/150 (6,7%) соответственно. Из 50 образцов ткани с доброкачественными поражениями шейки матки ВПЧ 31, ВПЧ 33, ВПЧ35, ВПЧ 39 и ВПЧ45 были идентифицированы в 1/50 (2%), 1/50 (2%), 1/50 (2%), 0 / 50 (0%) и 1/50 (2%) соответственно, как показано на рис.

Описание подтипов ВПЧ по типу поражения

Коинфекция была выявлена ​​только между ВПЧ31 и ВПЧ45 в двух случаях (один злокачественный и один доброкачественный), что дает распространенность 36/150 (24%) для подтипов ВПЧ (31 , 33,35 и 45).

Таблица Суммирует распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ. Большинство подтипов ВПЧ были идентифицированы в тканях плоскоклеточного рака. HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 были идентифицированы в 8/11 (72,7%), 5/7 (71,4%), 5/7 (71,4%), 5/5 (100%), 8/11 (72,7%). %) соответственно, как показано на рис.

Таблица 2

Распределение случаев рака шейки матки по типу рака и подтипу ВПЧ

ВПЧ 11 740 139
Рак ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ125 + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
SCC 8 119 5 119 5 119 8 116
Ad 2 17 1 18 0 19 1 18
AdSC 1 2 1 2 2 1 0 3 1 2
Прочие 0 4 0 3 0 4 0 4 1 3
143 7 143 5 145 11 139

Описание типа рака шейки матки по подтипу ВПЧ

В таблице обобщены частоты инфицирования в разных возрастных группах.Для HPV31 самый высокий уровень инфицирования был обнаружен среди возрастных групп 36–45 лет, за которыми следуют 46–55 лет и 56+, что составляет 6/11 (54,4%), 4/11 (36,4%) и 1/11 (9%), соответственно. Для HPV33 самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп <35 лет, за которыми следуют 36–45 и 46–55 лет, что составляет 3/7 (42,9%), 2/7 (28,6%) и 2/7 (28,6%). %). Что касается ВПЧ35, самые высокие уровни инфицирования наблюдались среди возрастных групп: 56+ лет, составляющих 3/7 (42,9%), за которыми следуют 45–55, 36–45 и <35 лет, составляющие 2/7 (28.6%), 1/7 (14,3%) и 1/7 (14,3%) соответственно. HPV39 показал высокие показатели инфицирования среди возрастных групп <35 и 46–55 лет, что составляет 2/5 (40%) для каждого. HPV45 указывает на высокий уровень инфицирования среди возрастных групп 36–45 лет, что составляет 4/11 (36,4%), за которыми следуют возрастные диапазоны 56+, <30 и 46–55 лет, что составляет 3/11 (27,3%), 2/11. (18,2%) и 2/11 (18,2%), именно в таком порядке.

Таблица 3

Распределение подтипов ВПЧ по возрасту

Возраст ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ39 ВПЧ45
ve + ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
> 35 0 31 28 1 3 2 29 2 29
36-45 6 54 2 57 1 0 60140 0 0
46-55 4 61 2 70 2 59 2 70 2 70
56+ 139 1 36 0 37 3 69 1 36 3 34
Всего 11 9013 901 7 19 193 5 195 11 189

Что касается места жительства, то большинство случаев рака шейки матки приходилось на Аль-Джанад, что составляет 52/200 (26%), за которым следует Аден, составляющий 45 человек. / 200 (22.5%), как показано на рис. Что касается места жительства и инфекции ВПЧ, подавляющее большинство инфекций было выявлено среди населения Аль-Джанад, что составляет 14/43 (32,6%), за которыми следуют Аден, Азал, Тохама Хадрамаут и Сабаа, что составляет 11/43 (25,6%). ), 8/43 (18,6%), 4/43 (9,3%), 3/43 (7%) и 3/43 (7%) соответственно, как показано в таблице, рис. Тем не менее, при подсчете процентной доли в пределах отдельного всего жилого дома, самая высокая доля инфекции была обнаружена в Сабаа, что составляет 33 человека.3%, за которыми следуют Аль-Джанад, Аден, Азал, Тохама и Хадрамаут, составляющие 27, 24,4, 20, 16,7 и 10%, в таком порядке, как показано на рис.

Описание исследуемой популяции по ВПЧ-инфекции и месту жительства

Таблица 4

Распределение подтипов ВПЧ по месту жительства

+ ve 2
Регион ВПЧ31 ВПЧ33 ВПЧ35 ВПЧ13 ВПЧ39 -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve + ve -ve
Azaal 36 1 39 2 38 1 39 4 36
Аден 3 42 45 2 45 2 43 4 41
Хадрамаут 1 29 1 29 0 30 0 30 1 19
Аль-Джанад 4 48 2 50 3 50 50 3 50
Tohama 1 24 3 21 0 24 0 24 0 24
901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 901 8 1 8 0 9 0 9
Всего 12 188 8 192 8 192 12 188

Описание исследуемой популяции по инфекции ВПЧ в пределах всей группы проживания

Обсуждение

Смертность шейки матки в Йемене высока заболеваемость раком, и в большинстве случаев диагностируется поздняя стадия заболевания.Фактически, в этом контексте данных по Йемену очень мало; из-за отсутствия достаточного количества национальных реестров. Хотя распространенность ВПЧ в Йемене неизвестна, но данные из соседних стран показывают повышенное бремя. В настоящем исследовании была проверена взаимосвязь между раком шейки матки и наличием генома HPV31, HPV33, HPV35, HPV39 и HPV45 подтипов высокого риска (HR-HPV). Данные о распространении типа ВПЧ необходимы для оценки возможного воздействия нынешних и будущих стратегий профилактики ВПЧ.

Распространенность и распределение генотипов ВПЧ значительно различаются во всем мире, и эти различия могут быть связаны со сложным географическим и биологическим взаимодействием между различными типами ВПЧ и иммуногенетическими факторами хозяина.

Однако существует недостаток литературы о бремени ВПЧ в Йемене. Насколько нам известно, было только два исследования, посвященных распространению ВПЧ при раке шейки матки. Первый исследовал присутствие HPV16 и HPV18 в 84 образцах ткани рака шейки матки, которые ранее были классифицированы как содержащие HPV по иммуногистохимии с использованием K1H8 (анти-HPV).При использовании ПЦР-тестирования на подтипы ВПЧ 16 и 18; 62/84 (73,8%) были идентифицированы как положительные для подтипа 16 ВПЧ, а остальные 22/84 (26,2%) были отрицательными. Затем снова при тестировании образцов на подтип 18 ВПЧ; 23/84 (27,4%) были признаны положительными, а остальные 61/84 (72,6%) были признаны отрицательными [19]. Другое исследование, проведенное в Йемене, показало, что распространенность подтипов ВПЧ 52, 56, 58, 59 и 66 среди случаев составила 0,6, 0, 4, 3,3 и 0% соответственно [20].

И снова присутствие подтипов ВПЧ высокого риска (ВПЧ-ВПЧ) ВПЧ31, ВПЧ33, ВПЧ35, ВПЧ39 и ВПЧ45 ранее сообщалось в ряде исследований.Проспективные последующие исследования показали, что стойкие инфекции HR-HPV играют решающую роль в прогрессировании поражений CIN и в развитии рака шейки матки. Среднее время выведения отдельного типа HR-HPV составило 16,5 месяцев. HPV16 и HPV31 были наиболее стойкими инфекциями (время выведения = 18,1 и 16,2 месяца соответственно), тогда как инфекции HPV39 исчезли быстро. Среднее количество копий на клетку при инфекциях HPV18 / 45, HPV31, HPV33 / 52/58 и HPV39 было выше при персистирующих инфекциях HPV, чем при инфекциях HPV, которые прошли, но разница не была значительной [21].В исследовании, проведенном в Кувейте, по изучению распределения ВПЧ у 298 женщин с аномальной цитологией шейки матки, было обнаружено, что распространенность ВПЧ33 составляла 9,9% [22], что было очень высоким показателем по сравнению с нашими данными. Хотя мы обнаружили, что наиболее распространенными подтипами HPV были HPV31 и HPV45, недавнее исследование показало, что наиболее распространенным генотипом HPV является HPV31, за которым следует HPV35 [23].

Что касается взаимосвязи между возрастом и инфекцией ВПЧ в этом исследовании, было замечено, что ВПЧ31 и ВПЧ45 относительно встречались в более молодом возрасте по сравнению с ВПЧ35 и ВПЧ39; следовательно, ВПЧ33 чаще встречается среди пожилых женщин.Однако количество инфицированных женщин было настолько маленьким, чтобы определить конкретный возрастной диапазон для исследуемых женщин.

Более того, наблюдались значительные расхождения в распределении различных подтипов ВПЧ в разных регионах. Однако объяснение этих результатов требует дальнейшей оценки различных поведенческих, социальных и других демографических показателей на месте. Комплексный скрининг на подтипы ВПЧ, связанные с Пап. Тест может дать более достаточные результаты для будущего планирования потенциальной программы вакцинации в Йемене.

Однако ограничение настоящего исследования включает в себя его исследование, включающее ограниченные подтипы ВПЧ.

В заключение: HR-HPV31, HR-HPV33, HR-HPV35, HR-HPV39 и HR-HPV45 распространены среди йеменских женщин с раком шейки матки. Кроме того, срочно необходимы меры и стратегические планы по снижению бремени рака шейки матки в Йемене.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить сотрудников национальных онкологических центров и различных гистопатологических лабораторий в Сане, Хадрамауте и Адене за помощь в сборе образцов.

Сноски

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

HGA: Дизайн исследования, анализ данных, подготовка рукописи. SHB: Сбор данных и молекулярная идентификация. IMA: Анализ данных и подготовка рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Ссылки

1. Джемал А., Брей Ф., Центр М.М., Ферли Дж., Уорд Э., Форман Д.Глобальная статистика рака. CA Cancer J Clin. 2011; 61: 69–90. DOI: 10.3322 / caac.20107. [PubMed] [CrossRef] 2. Му Му Шве, Кий Чи Ньюнт, Окада С., Харано Т., Хлаинг Мьят Ту, Хла Мьят Мо Мо и др. Тенденция генотипов вируса папилломы человека в неоплазии шейки матки наблюдалась в недавно развивающемся поселке в Янгоне, Мьянма. Acta Med Okayama. 2015; 69 (1): 51–8. [PubMed] 3. Гул С., Мурад С., Джавед А. Распространенность вируса папилломы человека высокого риска в образцах дисплазии шейки матки и рака из городов-побратимов в Пакистане.Int J Infect Dis. 2015; 34: 14–9. DOI: 10.1016 / j.ijid.2015.02.018. [PubMed] [CrossRef]

4. Публикация ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения). Комплексная борьба с раком шейки матки: руководство по основной практике. 2-е изд. 24. 2014.

5. Клиффорд Дж. М., Рана Р. К., Франчески С., Смит Дж. С., Гоф Дж., Пимента Дж. М.. Распределение генотипов вируса папилломы человека при поражениях шейки матки низкой степени злокачественности: сравнение по географическим регионам и с раком шейки матки. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред. 2005. 14 (5): 1157–64.DOI: 10.1158 / 1055-9965.EPI-04-0812. [PubMed] [CrossRef] 6. Тинг Дж., Росич А.Ф., Тейлор С.М., Рахангдейл Л., Соетерс Х.М., Сан X и др. Распространенность поражений шейки матки во всем мире: систематический обзор. Epidemiol Infect. 2015; 143 (2): 225–41. DOI: 10.1017 / S0950268814001356. [PubMed] [CrossRef] 7. Сиддика А, Зайнаб М., Кадри I, Бхатти М.Ф., приход JL. Распространенность и генотипирование вируса папилломы человека высокого риска в образцах рака шейки матки из Пенджаба, Пакистан. Вирусы. 2014. 6 (7): 2762–77.DOI: 10.3390 / v6072762. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 8. Уолбумерс Дж. М., Якобс М. В., Манос М. М., Bosch FX, Куммер Дж. А., Шах К. В. и др. Вирус папилломы человека — необходимая причина инвазивного рака шейки матки во всем мире. J Pathol. 1999; 189: 12–9. [PubMed] 9. Кумар В., Аббас А.К., Фаусто Н., Митчелл Р. «Глава 19, женская половая система и грудь». Основная патология Роббинса. 8. Филадельфия: Сондерс; 2007. 10. Вереш Г.К., Сарка X, Донг П., Гергели Л., Пфистер Х. Функциональное значение вариации последовательности в гене E2 и длинной контрольной области вируса папилломы человека 16 типа.J Gen Virol. 1999; 80: 1035–43. [PubMed] 11. Лонгворт М.С., Лайминс Л.А. Патогенез вирусов папилломы человека в дифференциации эпителия. Microbiol Mol Biol Rev.2004; 68 (2): 362–72. DOI: 10.1128 / MMBR.68.2.362-372.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] 12. Гокхале П.С., Сонавани А., Идикула-Томас С., Керкар С., Тонгаонкар Х., Мания-Праманик Дж. Варианты Е6 ВПЧ16: частота, связь с типами ВПЧ и анализ in silico выявленных новых вариантов. J Med Virol.2014; 86 (6): 968–74. DOI: 10.1002 / jmv.23924. [PubMed] [CrossRef] 13. Arbyn M, Tommasino M, Depuydt C, Dillner J. Являются ли 20 типов вируса папилломы человека причиной рака шейки матки? J Pathol. 2014. 234 (4): 431–5. DOI: 10.1002 / путь.4424. [PubMed] [CrossRef] 14. Сеуд М. Бремя заболеваний шейки матки, связанных с вирусом папилломы человека, в странах Среднего Востока и Северной Африки — всесторонний обзор литературы. J Low Genit Tract Dis. 2012; 16: 106–20. PMID: 22371041; DOI: 10.1097 / LGT.0b013e31823a0108.[PubMed] 15. Hilz H, Wiegers U, Adamietz P. Стимуляция действия протеиназы K денатурирующими агентами: применение для выделения нуклеиновых кислот и деградации «замаскированных» белков. Eur J Biochem. 1975; 56: 103–8. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1975.tb02211.x. [PubMed] [CrossRef] 16. Джозеф Сэмбрук DR. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Нью-Йорк: Лаборатория издательства Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор; 2001. 17. Пикор Л.А., Энфилд КСС, Кэмерон Х., Лам В.Л. Извлечение ДНК из парафинового материала для генетического и эпигенетического анализа.J Vis Exp. 2011; 49: e2763. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 18. Pecorelli S, Zigliani L, Odicino F. Пересмотренная стадия FIGO для карциномы шейки матки. Int J Gynaecol Obstet. 2009. 105 (2): 107–8. DOI: 10.1016 / j.ijgo.2009.02.009. [PubMed] [CrossRef] 19. Bensumaidea SH, Ahmed HG, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD. Корреляция иммуногистохимического и молекулярного обнаружения вирусов папилломы человека подтипов 16 и 18. Int J Sci Res. 2014; 3 (11): 2487–90. 20.Bensumaidea SH, Bafakeer SS, Abd-al-Aziz MS, Alshammari FD, Ahmed HG. Распространенность подтипов вируса папилломы человека 52, 56, 58, 59 и 66 среди йеменских пациентов с раком шейки матки. Egypt Acad J Biol Sci. 2014; 6 (2): 21–6. 21. Кульмала С.М., Шабалова И.П., Петровичев Н., Сырьянен К.Дж., Гилленстен У.Б., Йоханссон BC и др. Типоспецифическая персистенция инфекций вируса папилломы человека высокого риска в новых независимых государствах бывшего советского союза когортного исследования. Биомаркеры эпидемиологии рака Пред.2007. 16 (1): 17–22. [PubMed] 22. Аль-Авади Р., Чехадех В., Джарах М., Аль-Шахин А., Шарма П., Капила К. Распространение вируса папилломы человека среди женщин с аномальной цитологией шейки матки в Кувейте. Diagn Cytopathol. 2013. 41 (2): 107–14. DOI: 10.1002 / dc.21778. [PubMed] [CrossRef] 23. Цакогианнис Д., Папахаралампус М., Тоска Э., Кириакопулу З., Димитриу Т.Г., Рютер И.Г. и др. Дуплексный анализ ПЦР в реальном времени и анализ кривой плавления SYBR green I для молекулярной идентификации генотипов ВПЧ 16, 18, 31, 35, 51 и 66.Зонды Mol Cell. 2015; 29 (1): 13–8. [PubMed]

Вирус папилломы человека, тип 33 — обзор

Эпидемиология

Среди сексуально активных женщин инфицирование ВПЧ является обычным явлением, с частотой 15-40%. 64 Факторы риска заражения включают половые контакты в раннем возрасте, большое количество половых партнеров и низкий социально-экономический статус. 65 Более 25 типов ВПЧ могут инфицировать слизистые оболочки полости рта и аногенитальной области. Типы ВПЧ различаются родством их последовательностей ДНК, которое может быть определено с помощью ПЦР. 66 Частота типов высокого риска зависит от географических, демографических и клинико-патологических факторов. 67 Международная ассоциация исследований рака (IARC) провела международное исследование, которое показало, что наиболее распространенными типами ВПЧ высокого риска, поражающими шейку матки, являются ВПЧ-16 (53%), ВПЧ-18 (15%), ВПЧ. -45 (9%), HPV-31 (6%) и HPV-33 (3%). 68 В одном исследовании, проведенном в Бразилии, были идентифицированы типы ВПЧ у женщин с аномальными цитологическими результатами в мазках Папаниколау, и было обнаружено, что распространенность типов составляет 43.8% ВПЧ-16, 12,5% ВПЧ-58, 10% ВПЧ-31, 6,3% ВПЧ-53, 3,8% ВПЧ-18 и 3,8% ВПЧ-33. 69 Заболеваемость раком шейки матки выше в тропических районах, таких как графство Киадондо в Уганде, где это самый распространенный вид рака у женщин, со стандартизованным по возрасту показателем заболеваемости 16,25 случая на 100 000 женщин, что составляет около 20%. всех видов рака у женщин. 70 В одном исследовании уровни экспрессии области лигазной цепной реакции изолятов ВПЧ-16 от пациентов из Уганды и активности трансформации изолятов E6 и E7 предполагали более высокую онкогенную активность, которая могла бы объяснить более высокую частоту и более быстрое прогрессирование наблюдаемых поражений. при раке шейки матки и полового члена в Уганде. 71

Распространенность цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН) выше у ВИЧ-положительных женщин, чем у ВИЧ-отрицательных женщин. 72 Одно исследование, сравнивающее показатели CIN у ВИЧ-положительных и ВИЧ-отрицательных женщин, показало, что 7% из примерно 400 ВИЧ-положительных женщин имели высокий уровень CIN по сравнению с 1% из примерно 300 ВИЧ-отрицательных женщин, но ВИЧ-положительных женщин. не было обнаружено повышенного риска инвазивного рака шейки матки. 72 ВИЧ-положительный статус — серьезный фактор риска для CIN, и люди с числом CD4 + менее 200 × 10 6 / л имеют наибольший риск. 72 У ВИЧ-положительных женщин также в 16 раз выше частота всех поражений нижних отделов половых путей, за исключением шейки матки, по сравнению с ВИЧ-отрицательными женщинами (рис. 16.5). 73 Также было показано, что ВИЧ-положительные женщины с большей вероятностью будут инфицированы типами ВПЧ высокого риска, будут инфицированы несколькими типами ВПЧ и с большей вероятностью будут иметь стойкую инфекцию ВПЧ, что коррелирует с низким уровнем риска. Число CD4 + и более высокая нагрузка РНК плазмы ВИЧ. 74 Кроме того, у ВИЧ-2-позитивных женщин выше вероятность иметь КИН высокой степени, чем у ВИЧ-1-позитивных женщин. 75

Распространенность оральной инфекции ВПЧ неизвестна, но есть доказательства того, что ВПЧ участвует в патогенезе рака полости рта. 76 Инфекции могут передаваться половым путем при пальцевом или орально-генитальном контакте. В исследовании, сравнивающем распространенность ВПЧ у ВИЧ-отрицательных и ВИЧ-положительных пациентов, типы ВПЧ высокого риска были обнаружены в 2,1% миндалин и 6,3% образцов для полоскания рта: ВПЧ-16 был наиболее распространенным типом высокого риска. , а распространенность пероральных типов ВПЧ высокого риска была выше у ВИЧ-положительных пациентов, чем у ВИЧ-отрицательных (13.7% против 4,5%). 77

Подобно CIN, плоскоклеточные интраэпителиальные поражения заднего прохода (SIL) и рак полового члена (рис. 16.6) связаны с инфекцией HPV. 71, 78 Анальная ВПЧ-инфекция и SIL (рис. 16.7) чаще встречаются у ВИЧ-положительных мужчин, практикующих секс с мужчинами (МСМ), чем у ВИЧ-отрицательных МСМ, а также распространенность и заболеваемость анальной ВПЧ-инфекцией и SIL увеличивается с уменьшением количества CD4 +. 79 ВААРТ, похоже, не влияет на частоту анального ВПЧ и SIL.В поперечном исследовании не было обнаружено различий в распространенности анальной инфекции HPV и SIL между ВИЧ-серопозитивными пациентами, получавшими ВААРТ в среднем 32 месяца, и теми, кто не получал ВААРТ. 80 Другое проспективное исследование продемонстрировало отсутствие значительного регресса SIL анального канала после 6 месяцев ВААРТ и минимальное влияние на выявление ВПЧ. 81 Это говорит о том, что если ВААРТ не изменит частоту или прогрессирование анального SIL, в будущем может увеличиться частота анального рака, поскольку у анальных HPV-инфекций и SIL будет больше времени для прогрессирования до рака, с большим количеством ВИЧ-серопозитивных. пациенты, живущие дольше благодаря ВААРТ.Рак полового члена чаще встречается в тропиках, и с 1950-х годов он был наиболее диагностируемым видом рака у мужчин Уганды, с частотой 41% в районе Буньоро. 82

Epidermodysplasia verruciformis (EV) — это генетическое заболевание, связанное с повышенной восприимчивостью к инфекции определенными типами HPV, которые называются типами EV-HPV и включают HPV 5, 8, 9, 12, 14, 15, 17, 19 –25, 36–38, 47 и 49. 83 Примерно у половины пациентов, обычно у лиц старше 30 лет, поражения могут трансформироваться в карциномы, в первую очередь плоскоклеточные карциномы (SCC).

Полиморфизм вируса папилломы человека 33 типа и плоскоклеточные интраэпителиальные поражения шейки матки высокой степени | Журнал инфекционных болезней

Аннотация

Предпосылки Мы исследовали связь между полиморфизмом вируса папилломы человека (ВПЧ) –33 и плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями (SIL)

Методы Эндоцервикальные образцы от 89 женщин, инфицированных ВПЧ-33, из 5347, набранных для 2 Исследование случай-контроль и 2 когортных исследования были дополнительно проанализированы с помощью секвенирования длинной контрольной области (LCR), E6 и E7 с помощью полимеразной цепной реакции

Результаты Из 89 образцов 64 были нормальными, 7 имели SIL низкой степени ( в том числе 3, определенные гистопатологическим анализом), 15 имели SIL высокого уровня (HSIL, включая 14, определенные гистопатологическим анализом), и 3 имели неизвестный диагноз.Варианты LCR, не являющиеся прототипами, были достоверно связаны с HSIL (отношение шансов [OR], скорректированное с учетом возраста и места исследования, 9,2 [95% доверительный интервал {CI}, 1,8–45,9]). Вариация C7732G, которая приводит к потере предполагаемого сайта связывания для клеточного вышестоящего стимулирующего фактора, была связана с HSIL (OR с поправкой на возраст и сайт, 8,0 [95% CI, 1,5–42,8]). Полиморфизмы E6 и E7 не были связаны с HSIL. Образцы, собранные с 6-месячными интервалами у 14 участников, содержали один и тот же вариант.Вариант ВПЧ-33 MT 1-0-0, несущий вариацию G7584A, чаще выявлялся у женщин из Бразилии (7/20 [35%]), чем у женщин из Канады (1/65 [1,5%]; P = 0,001). )

Заключение Внутритипные варианты LCR HPV-33, по-видимому, различаются географически и различаются по своему онкогенному потенциалу

Цервикальная инфекция, вызванная вирусом папилломы человека (ВПЧ) высокого риска, является частой причиной рака шейки матки. Однако лишь у небольшой части женщин, инфицированных ВПЧ, развивается стойкая инфекция ВПЧ, которая в конечном итоге может перерасти в рак шейки матки [1].Таким образом, изучаются биомаркеры, связанные с ВПЧ, чтобы лучше определять женщин с самым высоким риском прогрессирования заболевания. Инфекция неевропейскими вариантами HPV-16 или аминокислотными заменами в E6 (L83V или E31G) была связана с раком шейки матки и персистированием инфекции [2–5]

HPV-33 филогенетически тесно связан с HPV-16 у вида A9 из рода α-папилломавирусов [6]. В недавнем метаанализе ВПЧ-33 был четвертым по частоте генотипом высокого риска в образцах инвазивного рака в Северной Америке [7].Когда было исследовано соотношение распространенности между инвазивным раком и плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями высокой степени (HSIL), HPV-33 & amp; занял четвертое место после типов 16, 18 и 45 [8]. У сексуально активных женщин из группы риска или инфицированных ВИЧ, полиморфизмы HPV-33 длинной контрольной области (LCR) были связаны с персистенцией HPV-инфекции, которая является сильным маркером риска развития HSIL [9]. Однако из-за высокой доли инфицирования несколькими типами ВПЧ в этом исследовании было невозможно исследовать влияние полиморфизма ВПЧ-33 на степень поражения шейки матки

Если полиморфизм ВПЧ-33 действительно является определяющим фактором персистенции инфекции [ 9], они могут быть связаны с HSIL.Целью настоящего исследования было изучить распределение вариантов HPV-33 у женщин без цитологических аномалий шейки матки или с SIL низкой степени злокачественности (LSIL), HSIL или раком. Мы изучили полиморфизм регуляторной области HPV (LCR) и трансформирующих генов, кодирующих онкобелки E6 и E7 у бразильских и канадских женщин, участвовавших в 2 когортных исследованиях и 2 исследованиях случай-контроль, что позволило нам охарактеризовать новые молекулярные варианты HPV- 33

Материалы и методы

Участки исследования и дизайн Настоящее исследование проводилось на образцах цервикальной цитощетки, полученных от 89 (1.7%) женщин с положительным результатом теста на ВПЧ-33 с помощью согласованной полимеразной цепной реакции L1 (ПЦР) из 5347 субъектов, участвовавших в 4 эпидемиологических исследованиях: 10 женщин были участниками исследования связи между вирусом простого герпеса (ВПГ) и поражениями шейки матки ( исследование HPV-HSV), 43 были из исследования случай-контроль, обозначенного как исследование «Биомаркеры риска рака шейки матки» (BCCR), 21 из когортного исследования Людвига-МакГилла и 15 из когортного исследования McGill-Concordia

Исследование HPV-HSV представляло собой молекулярно-эпидемиологическое исследование, проведенное в Монреале, Канада, которое включало 439 женщин (50 с инвазивным раком, 65 с HSIL, 80 с LSIL и 244 со здоровыми шейками) для изучения связи между коинфекцией HSV и HPV. и рак шейки матки [10].Средний возраст участников составлял 33 года. ВПЧ был обнаружен у 87,2% и 19,7% женщин с поражением шейки матки и здоровых шейных позвонков соответственно. BCCR — это продолжающееся клиническое исследование случай-контроль, в котором приняли участие 1759 женщин (1263 со здоровыми шейками, 60 с LSIL, 408 с HSIL, 18 с раком и 10 с ожидаемыми результатами), проживающих в Монреале, Канада. изучить биомаркеры, связанные с HSIL [11]. Средний возраст участников — 32 года. В исследовании BCCR 95,8% пациентов и 31 человек.2% контрольных субъектов были положительными на ВПЧ [11]. В обоих этих исследованиях контрольными субъектами были женщины с текущими и ранее нормальными ежегодными рутинными мазками Папаниколау, тогда как пациенты имели гистологически подтвержденную интраэпителиальную неоплазию шейки матки или инвазивный рак. Когортное исследование Людвига-МакГилла проводилось в Сан-Паулу, Бразилия, и включало 2528 женщин (средний возраст 33 года), а когорта Макгилла-Конкордии проводилась в Монреале, Канада, и включала 621 молодую женщину (средний возраст 21 год). ) — цель обоих исследований заключалась в изучении естественного течения и персистенции инфекции ВПЧ [12, 13].Почти 53% и 26,2% участников имели по крайней мере 1 положительный результат на ВПЧ в когортах МакГилла-Конкордии и Людвига-МакГилла соответственно [12, 13]. За этими женщинами проспективно наблюдали через определенные промежутки времени в ходе исследований, как описано в других источниках [12, 13]. Считалось, что женщины с повторными нормальными мазками Папаниколау имели здоровые шейки, и наивысший уровень SIL по результатам цитологического исследования использовался для женщин с повторными патологическими мазками

Информированное согласие было получено от всех участников исследования для анализа на ВПЧ и других процедур исследования.Комитеты по этике из каждого участвующего учреждения одобрили процедуры и формы согласия. Для каждого исследования применялись стандартизированные анкеты. Отшелушенные клетки шейки матки собирали с помощью цитощетки и обрабатывали с использованием колонок QIAamp (Qiagen) [13], спин-колоночной хроматографии [12] или процедуры Master pure [10, 11]. Образцы считались подходящими, если ДНК β-глобина могла быть амплифицирована с праймерами PC04 и Gh30. ДНК ВПЧ амплифицировали с использованием праймеров MY09-MY11-HMB01 [12, 13] или PGMY [10–12] и типизировали либо методом линейного блоттинга (Roche Molecular Systems), либо типоспецифичными зондами с радиоактивной меткой [12, 14].Один образец от каждого участника вышеуказанных исследований с положительной реакцией на ВПЧ-33 был дополнительно протестирован на полиморфизм ВПЧ-33. Последовательные образцы были также протестированы на женщинах, участвующих в когортном исследовании Людвига-МакГилла, которые имели стойкую инфекцию ВПЧ-33 (n = 14 женщин), и предоставили в общей сложности 30 образцов шейки матки (медиана, 2; среднее ± SD, 2,6 ± 0,8; диапазон , 2–5)

Анализ LCR, E6 и E7 HPV-33 с помощью ПЦР-секвенирования Для каждой области генома HPV 2 мкл обработанного образца амплифицировали в термоциклере 9600 (Perkin-Elmer) .LCR, E6 и E7 амплифицировали в реакционном объеме 100 мкл, который содержал 10 ммоль / л трис-HCl (pH 8,3), 50 ммоль / л KCl, 2,5 ед. Фермента AmpliTaq Gold (Roche Diagnostic Systems), 2,0 ммоль / л. L MgCl 2 , 0,5 ммоль / л каждый праймер и 0,25 ммоль / л каждый dCTP, dTTP, dGTP и dATP. Сегмент длиной 542 п.н. между 7337 и 7878 нуклеотидами на 5′-конце LCR был создан с помощью праймеров HPV-33 – LCR-1 и HPV-33 – LCR-2, фрагмент длиной 562 п.н. между 35 и 596 нуклеотидами, который содержал полный ген E6 был создан с помощью праймеров HPV-33-E6-1 и HPV-33-E6-2, а фрагмент длиной 412 п.н. между нуклеотидами 529 и 940, содержащий полный ген E7, был получен с помощью праймеров HPV-33-E7- 1 и HPV-33 – E7-2, используя протоколы амплификации, описанные Gagnon et al.[9]. Ампликон Е6 ВПЧ-33 содержал полный ген Е6 длиной 483 п.н. Ампликон Е7 ВПЧ-33 содержал полный ген Е7 длиной 324 п.н. Ампликоны Е6 и Е7 ВПЧ-33 перекрываются 68 п.н.

После гель-электрофореза на 2% агарозном геле ампликоны ДНК ВПЧ-33, амплифицированные с помощью ПЦР, очищали, как описано в другом месте [15]. Прямое двухцепочечное ПЦР-секвенирование проводили для ампликонов LCR, E6 и E7 с теми же праймерами, что описаны выше, с использованием метода флуоресцентного циклического секвенирования (набор BigDye Terminator Ready Reaction kit; Perkin-Elmer) на 20 нг очищенного ампликоны.Параметры цикла составляли 25 циклов по 10 с при 96 ° C, 5 с при 50 ° C и 4 мин при 62 ° C. Анализ последовательности выполняли на системе генетического анализатора ABI Prism 3100 (в Service de Séquencage du Centre de Recherche, Centre Hospitalier de l’Université de Montréal). Непрототипные изоляты секвенировали как минимум дважды, чтобы исключить Taq -индуцированные ошибки

Первый изолят HPV-33, обозначенный как прототип, был первоначально секвенирован Коул и Стрик [16]. Последовательности из вариантов, отличных от прототипа, были выровнены для классификации с использованием программного обеспечения CLUSTAL W (версия 1.8). Филогенетическое дерево было построено на основе алгоритма объединения соседей с использованием программного обеспечения Mega (версия 2.1). Для оценки влияния вариаций LCR на предполагаемые сайты связывания клеточных белков использовалось программное обеспечение TFSEARCH (версия 1.3)

Анализ данных Поскольку распространенность каждого молекулярного варианта HPV-33 часто была низкой, связь между HPV -33 дисперсия и HSIL были исследованы путем разделения изолятов на 2 категории: штаммы, подобные прототипу, и штаммы, не похожие на прототип.Штаммы, не являющиеся прототипами, имели несинонимичные вариации E6 или E7 или вариации LCR, модифицирующие предполагаемые сайты связывания клеточного транскрипционного фактора, по сравнению с прототипом. Величину ассоциации между вариантами ВПЧ и HSIL оценивали путем расчета отношения шансов (OR) и соответствующих 95% доверительных интервалов (CI). Для оценки значимости связи между дихотомическими переменными использовался точный критерий Фишера. Безусловный множественный логистический регрессионный анализ был проведен для получения оценок OR с максимальным правдоподобием при одновременном учете смешанных эффектов возраста, этнической принадлежности и места проведения исследования.Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения STATISTICA (версия 6; StatSoft)

Результаты

В общей сложности 89 (1,7%) из 5344 участников 4 исследований предоставили как минимум 1 образец из шейки матки, который содержал ДНК ВПЧ-33. В таблице 1 показан возраст и распределение участников в зависимости от места исследования и степени заболевания шейки матки. Диагноз заболевания шейки матки был установлен гистопатологическим анализом (14 HSIL и 3 LSIL) или цитологическими результатами (1 HSIL и 4 LSIL).Женщины были классифицированы как здоровые по гистопатологическому анализу (n = 4) или по повторным нормальным результатам мазка из шейки матки (n = 60). Семьдесят одна (79,8%) женщина были белыми, 12 (13,5%) — африканскими, 2 (2,2%) — азиатскими и 4 (4,5%) — неизвестной национальности. Шестьдесят восемь были канадцами, а 21 — бразильцами

Таблица 1

Статус поражения шейки матки у 89 женщин с вирусом папилломы человека (ВПЧ) — 33-положительные женщины из 4 эпидемиологических исследований

Таблица 1

Статус поражения шейки матки у 89 женщин с вирусом папилломы человека (ВПЧ) — 33-положительные женщины из 4 эпидемиологических исследований

Геномный полиморфизм LCR, E6 и E7 в HPV-33 Видимая полоса была получена при секвенировании LCR, E6 и E7 для 85, 89 и 89 изолятов соответственно.Таблицы 2– 3 4 показывают место и характер вариаций LCR, E6 и E7. Таблица 2 показывает природу и потерю или прирост предполагаемых участков связывания клеточного фактора транскрипции вариаций LCR, а таблицы 3 и 4 показывают изменения аминокислотных последовательностей в E6 и E7, соответственно, по сравнению с прототипом HPV-33. Некоторые из вариантов, которые мы описываем в данной статье, идентичны описанным в нашей первоначальной работе и обозначаются теми же аббревиатурами [9]. Доля полиморфных нуклеотидов в LCR была значительно выше, чем в вирусных онкогенах: 94 сайта вариации на 502 нуклеотида (18.7%) определили 14 вариантов LCR HPV-33 по сравнению с 13 сайтами вариаций (2,7%) более 484 нуклеотидов, определяющих 8 вариантов E6 HPV-33, и 7 сайтами вариаций (2,2%) более 324 нуклеотидов, определяющих 8 вариантов E7 HPV-33. Делеции обнаружены только в LCR. В дополнение к 10 вариантам LCR HPV-33, 5 вариантам E6 HPV-33 и 5 вариантам E7 HPV-33, описанным в другом месте, мы идентифицировали 7, 4 и 4 новых варианта в LCR (от 33-LCR-11 до 33-LCR-17 ), E6 (от 33-E6-6 до 33-E6-9) и E7 (от 33-E7-6 до 33-E7-9) соответственно [9]. Наибольшие различия между любыми двумя вариантами составили 17.5% (88 вариантов более 502 нуклеотидов) между 33-LCR-14 и 33-LCR-8, 2,3% (11 вариантов более 484 нуклеотидов) между 33-E6-7 и 33-E6-5 и 1,9% (6 вариантов более 324 узлов) между 33-E7-5 и 33-E7-8

Таблица 2

Полиморфизмы вируса папилломы человека 33 типа в длинной контрольной области (LCR)

Таблица 2

Полиморфизмы вируса папилломы человека 33 типа в длинной контрольной области (LCR)

Таблица 3

Полиморфизмы вируса папилломы человека 33 типа в E6

Таблица 3

Полиморфизмы вируса папилломы человека 33 типа в E6

Таблица 4

Полиморфизмы вируса папилломы человека 33 типа в E7

Таблица 4

Полиморфизмы вируса папилломы человека 33 типа в E7

Изменчивость в 3 областях генома ВПЧ-33 оценивалась путем сравнения количества сайтов нуклеотидных вариаций на изолят после корректировки длины секвенированного ампликона (502 п.н. для LCR, 484 п.н. для E6 и 324 п.н. для E7) и рассмотрения делеции 78 п.н. как 1 вариант.Среднее количество участков вариации составляло 1 (среднее ± стандартное отклонение, 2,5 ± 3,3; диапазон, 0–8 [95% ДИ, 1,8–3,2]) для LCR, 0 (среднее ± стандартное отклонение, 1,3 ± 2,3; диапазон, 0–8,3. [95% ДИ, 0,8–1,8]) для E6 и 0 (среднее ± стандартное отклонение, 1,1 ± 2,0; диапазон, 0–7,7 [95% ДИ, 0,7–1,5]) для E7. LCR был более вариабельным, чем E6 или E7. E6 был более вариабельным, чем E7

. Как показано в таблице 5, 25 вариантов, включая прототип, могут быть определены путем комбинирования вариаций во всех 3 областях генома HPV-33. Все прототипные варианты LCR также были прототипами для E6 и E7.Только 4 варианта, включая прототип, встречались у более чем 5 женщин. Эволюционная взаимосвязь между 25 вариантами HPV-33 была изучена путем филогенетического анализа данных о последовательности, основанного на методе объединения соседей (рис. 1). Варианты HPV-33 сгруппированы в 2 основные линии, одна из которых включала прототип

.

Таблица 5

Вируса папилломы человека (ВПЧ) –33 варианта, полученных путем комбинирования длинной контрольной области (LCR), вариантов E6 и E7

Таблица 5

Вируса папилломы человека (ВПЧ) –33 варианта, полученных путем объединения длинной контрольной области (LCR) ), E6 и E7 варианты

Рисунок 1

Внутритиповое разнообразие вируса папилломы человека 33 типа.Филогенетическое дерево из 25 вариантов, определенных путем анализа комбинации длинных контрольных областей (LCR), последовательностей E6 и E7, было построено с использованием алгоритма объединения соседей. Полоса представляет 0,001 замещения на 100 оснований. Варианты были названы MT (Монреаль) или BR (Бразилия), за которыми следовали номер варианта LCR, номер варианта E6 и номер варианта E7

Рисунок 1

Внутритиповое разнообразие вируса папилломы человека 33-го типа. Филогенетическое дерево из 25 определенных вариантов. путем анализа комбинации длинных контрольных областей (LCR), последовательности E6 и E7 были построены с использованием алгоритма объединения соседей.Полоса представляет 0,001 замещения на 100 оснований. Варианты были названы MT (Монреаль) или BR (Бразилия), за которыми следовали номер варианта LCR, номер варианта E6 и номер варианта E7

Полиморфизм HPV-33 и этническая принадлежность Как показано в таблице 5, HPV- 33 прототип был более распространен среди участников из Канады (29/65 [44,6%]), чем среди участников из Бразилии (4/20 [20,0%]), хотя разница не достигла статистической значимости (P = 0,07). Большинство вариантов выявлялись с низкой частотой.Однако ВПЧ-33 MT 1-0-0 значительно чаще обнаруживался в Бразилии (7/20 [35%]), чем в Канаде (1/65 [1,5%]; P = 0,001). Варианты ВПЧ-33 не были связаны с этнической принадлежностью, независимо от страны набора (данные не показаны)

Полиморфизм ВПЧ-33, персистентность инфекции ВПЧ и степень поражения шейки матки Диапазон 2–5 последовательных образцов положительный результат на ВПЧ-33 от 11 женщин в когортном исследовании Людвига-МакГилла был проверен на полиморфизм ВПЧ-33. Образцы от одной и той же женщины всегда содержали один и тот же вариант ВПЧ-33.Связь между вариациями ВПЧ-33 и степенью поражения шейки матки показана в таблице 6. В следующие анализы не все участники могли быть включены, потому что некоторые образцы не могли быть секвенированы (см. Выше). Варианты LCR, не являющиеся прототипами, были в значительной степени связаны с HSIL, в отличие от E6 или E7 (таблица 6)

Таблица 6

Связь полиморфизма вируса папилломы человека типа (ВПЧ) –33 с поражениями шейки матки высокой степени (HSIL) и раком у 89 женщин

Таблица 6

Связь полиморфизма вируса папилломы человека (ВПЧ) –33 с высоким уровнем степень поражения шейки матки (HSIL) и рак у 89 женщин

Из 9 вариаций LCR, приводящих к потере или увеличению предполагаемых сайтов связывания для клеточных факторов, только C7732G был достоверно связан с HSIL (таблица 6).Поправка на этническую принадлежность дала аналогичные результаты (данные не показаны). Когда в анализе учитывались только канадские женщины, связь оставалась значимой после поправки на возраст и этническую принадлежность (OR, 4,0 [95% ДИ, 1,2–17,2]; P = 0,03). Вариация в nt 7732 приводила к потере предполагаемого сайта связывания для вышестоящего стимулирующего фактора (USF). Предполагаемые сайты связывания рядом с сайтом связывания USF также были идентифицированы для трансактивирующих факторов, таких как фактор связывания октамера и активаторный белок 1.Утрата дупликации 78 п.н. в LCR выявлялась чаще у женщин с HSIL (42,9%), чем у здоровых женщин (24,2%), но эта разница не достигла статистической значимости (таблица 6). По крайней мере, 1 тип ВПЧ был обнаружен у 41 (6,1%) здоровой женщины и 8 (53,3%) женщин с ВПЧ, а тип ВПЧ высокого риска, кроме 33, был обнаружен у 38 (59,4%) здоровых женщин и 7 (46,7%) женщины с HSIL. Наличие типа ВПЧ, отличного от 33 (OR, 0,6 [95% ДИ, 0,2–1,7]), или типа HPV высокого риска, кроме 33 (OR, 0.5 [95% ДИ 0,2–1,6]) не было связано с присутствием HSIL

Обсуждение

В настоящем исследовании мы проанализировали вариации последовательности генов LCR, E6 и E7 из изолятов HPV-33, собранных у женщин без поражений шейки матки или женщин с LSIL или HSIL в Канаде и Бразилии. Наши данные показывают, что полиморфизм LCR, но не полиморфизм E6 или E7, связан с тяжелым заболеванием. В отличие от ВПЧ-16, полиморфизмы ВПЧ-33 не были связаны с этнической принадлежностью, хотя уровни обнаружения некоторых вариантов ВПЧ-33 были разными в двух странах.К настоящему времени опубликованы ограниченные данные о полиморфизмах HPV-33. Поскольку она включает данные 89 женщин с разными стадиями заболевания шейки матки, набранных в разных исследованиях и странах, настоящая работа представляет собой одно из наиболее полных исследований полиморфизма ВПЧ-33.

Вариации L1 и E6 были впервые зарегистрированы в изолятах ВПЧ-33. из образцов инвазивного рака шейки матки [17, 18]. Недавно мы сообщили о полиморфизмах HPV-33 у ВИЧ-серопозитивных женщин [9]. Используя результаты этих публикаций, мы обнаружили несколько новых сайтов вариаций в LCR (нуклеотиды 7424, 7436, 7536, 7545 и 7768), E6 (нуклеотиды 191, 213, 364 и 480) и E7 (нуклеотиды 608 и 737). .Что касается других типов ВПЧ, вариации не были распределены случайным образом, и сайты вариаций были общими для нескольких изолятов и вариантов [9, 15, 19–23]

Как сообщалось для других типов ВПЧ, E6 и E7 были менее вариабельными, чем LCR [9, 15, 19–23] 5, 9, 15, 24, 25]. Несинонимичные вариации L83V на 355 нуклеотидах ВПЧ-33 были описаны для ВПЧ-16 на 350. Эти вариации ВПЧ-16 были связаны в некоторых исследованиях с HSIL, хотя этот результат остается спорным [26-30]. В наших исследованиях HPV-33 вариация L83V не была связана с персистенцией HPV или риском HSIL [9].Филогенетическое дерево, созданное путем объединения последовательностей из LCR, E6 и E7, было дихотомическим, как сообщалось для типов HPV, отличных от 16 или 18, тогда как деревья, построенные с вариантами HPV-16, имеют несколько ветвей [5, 9, 15, 23, 25, 31, 32]. Полиморфизмы HPV-16, -18 и -52 прочно связаны с этнической принадлежностью [5, 15, 31]. Связь с этнической принадлежностью полиморфизмов ВПЧ-33 не была столь очевидной. Только 1 вариант ВПЧ-33 выявлялся чаще в 1 стране. Изоляты из нескольких стран следует проанализировать для дальнейшего изучения связи между этнической принадлежностью и вариациями ВПЧ-33.Большинство вариантов HPV-33 в настоящем исследовании были редкими и были обнаружены только один или два раза

Вариация на уровне 7732 в LCR, приводящая к потере предполагаемого сайта связывания для USF, была связана с HSIL. Связь оставалась значительной даже после поправки на этническую принадлежность (важный потенциальный фактор) и место проведения исследования [4]. USF, фактор транскрипции у людей, который также важен для экспрессии главного позднего промотора аденовируса, служит негативным регулятором клеточной пролиферации [33].Эффект USF на промотор HPV никогда не исследовался. Потеря сайта связывания потенциального трансактиватора теоретически не должна вызывать предрасположенность к большему патогенному потенциалу. Несколько предполагаемых сайтов связывания для различных клеточных факторов также были расположены рядом с предполагаемым сайтом связывания USF. Потеря сайта связывания для USF может способствовать меньшей конкуренции между этими факторами, которые могут быть более сильными трансактиваторами промотора HPV. Эта вариация также может быть связана с HSIL, потому что она совмещается с другой вариацией в другом месте вирусного генома, что может приводить к изменениям функциональных или антигенных доменов HPV-33 [5].В этом случае несинонимичная вариация будет в генах, отличных от E6 или E7. Предыдущее исследование ограниченного числа женщин показало, что прототип HPV-33 E6 чаще обнаруживался при цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) –3, чем при CIN-1 или CIN-2 [18]. Наши результаты с большим числом женщин не подтверждают этот вывод.

Несколько исследований продемонстрировали, что некоторые вариации LCR связаны с повышенным риском персистенции ВПЧ или поражений, вызванных ВПЧ [5, 34–36].Транскрипция онкогенов HPV находится под контролем промоторных и энхансерных элементов в LCR, которые также содержат несколько предполагаемых сайтов связывания для клеточных факторов транскрипции, которые могут модулировать его функцию положительно или отрицательно [37]. Было показано, что варианты HPV-16 у американок азиатского происхождения обладают большей транскрипционной активностью, чем варианты у европейских женщин, из-за повышенной активности промотора p97 в LCR [35, 38-40]. То же самое было описано для HPV-18 с активностью промотора p105 [41].Вариации LCR, приводящие к потере сайтов связывания YY1, показали повышенную транскрипционную активность [42]. Большая часть повышенной активности LCR отображается на его 3′-половину — область, которую мы проанализировали на HPV-33 [35]. Мы также сообщили, что изменение LCR HPV-52 увеличивало риск персистенции у ВИЧ-серопозитивных женщин [43]

Утрата дупликации 78 п.н. в LCR была связана с персистенцией инфекции HPV, которая суррогатный маркер HSIL [9]. Совершенные тандемные повторы из 78 п.н. после предполагаемого ориджина репликации в LCR являются особенностью, уникальной для HPV-33 [16].Наша работа подтвердила наличие дупликации у нескольких изолятов. Делеция 78 п.н. привела к потере предполагаемого сайта связывания для c-myb . Повторы из 78 п.н. могут действовать как репрессоры LCR, и их потеря может предрасполагать к персистенции и HSIL. Тандемные повторы, обнаруженные в SV40 [44], подавляют репликацию вируса за счет конкуренции между c-myb и трансактиваторами за связывание LCR. Чтобы действительно достичь статистической значимости, нам нужно будет протестировать больше женщин с HSIL. Этого нельзя было достичь, объединив наши исследования.Чтобы определить, играет ли дупликация роль в сохранении и прогрессировании SIL, нам также необходимо сравнить женщин с персистирующей инфекцией, LSIL и HSIL в крупномасштабных проспективных исследованиях

Семь женщин из двух наших когортных исследований не имели SIL. согласно повторным нормальным результатам мазка из шейки матки. Однако у них была стойкая инфекция ВПЧ-33. Эти женщины подвергались большему риску развития SIL. Исключение этих женщин из контрольной группы не повлияло на результаты анализа (данные не показаны).Недостатком является отсутствие контроля в исследованиях «случай-контроль» для персистенции инфекции ВПЧ и ее потенциальной роли в неправильной классификации участников. В схемах «случай-контроль» может быть сложно исследовать биомаркеры HSIL независимо от персистенции, и это может помешать нам найти связь между потерей дупликации и HSIL. Ошибочная классификация может частично объяснить расхождения в литературе о роли вирусных полиморфизмов в HSIL [5]

Число инфицированных ВПЧ-33 женщин в наших когортах было слишком маленьким, чтобы исследовать влияние потери дупликации на вирусная стойкость.Как мы ранее показали для ВПЧ-16 и других типов, все женщины с последовательно положительными образцами ВПЧ-33 были инфицированы одним и тем же вариантом [9, 12, 43, 45]. Еще одним недостатком нашей работы является тот факт, что наше определение исхода было основано на цитологических результатах для здоровых женщин. Классификация женщины как здоровой была основана на нескольких последовательных нормальных мазках Папаниколау, что значительно снизило вероятность наличия основного поражения. Большинство поражений подтверждено гистологическим анализом.Количество участников было ограничено, и различный дизайн исследования мог внести систематическую ошибку. Тем не менее, мы контролировали исследование, в котором набор проводился в многофакторном анализе.

Настоящие результаты подтверждают необходимость оценки роли полиморфизмов в типах ВПЧ, отличных от 16, чтобы лучше понять естественную историю и факторы предрасположенности к HSIL. Настоящие результаты также подчеркивают ограничение исследований случай-контроль в изучении роли вирусных полиморфизмов в HSIL или раке.Полиморфизмы, связанные с персистентностью вируса и HSIL, не могут быть должным образом исследованы с использованием этого дизайна исследования из-за неправильной классификации контрольных субъектов. Крупномасштабные проспективные исследования могут помочь решить проблему потенциальной неправильной классификации контрольных субъектов, особенно для часто встречающихся типов, таких как ВПЧ-16. Однако сила этих исследований будет слабее для более редких типов. Общие закономерности полиморфизма разных типов, вероятно, не найдутся

Ссылки

1,.

Хроническая папилломавирусная инфекция и неоплазия шейки матки

,

Lancet Oncol

,

2002

, vol.

3

(стр.

11

6

) 2,.

Хозяин и вирусная генетика и риск рака шейки матки: обзор

,

Virus Res

,

2002

, vol.

89

(стр.

229

40

) 3,,.

Вариации генома типов вируса папилломы человека: филогенетические и медицинские последствия

,

Int J Cancer

,

2006

, vol.

118

(стр.

1071

6

) 4« и др.

Молекулярные варианты вируса папилломы человека типов 16 и 18, преимущественно ассоциированные с неоплазией шейки матки

,

J Gen Virol

,

2000

, vol.

81

(стр.

2959

68

) 5,.

Варианты вируса папилломы человека и плоскоклеточная неоплазия шейки матки

,

J Pathol

,

2001

, vol.

193

(стр.

295

302

) 6,,,,.

Классификация вирусов папилломы

,

Вирусология

,

2004

, т.

324

(стр.

17

27

) 7,,,,.

Типы вируса папилломы человека при инвазивном раке шейки матки во всем мире: метаанализ

,

Br J Cancer

,

2003

, vol.

88

(стр.

63

73

) 8,,,.

Сравнение распределения типов ВПЧ при поражениях шейки матки высокой степени злокачественности и раке шейки матки: метаанализ

,

Br J Cancer

,

2003

, vol.

89

(стр.

101

5

) 9,,,,.

Вирусный полиморфизм вирусов папилломы человека 33 и 35 типов, а также хроническая и преходящая инфекция половых путей у женщин

,

J Infect Dis

,

2004

, vol.

190

(стр.

1575

85

) 10,,, et al.

Вирус простого герпеса типа II (HSV-2) не является кофактором вируса папилломы человека при раке шейки матки

,

Am J Obstet Gynecol

,

2003

, vol.

188

(стр.

129

34

) 11,,, et al.

Полиморфизм кодона 72 p53 и риск интраэпителиальной неоплазии шейки матки высокой степени

,

Cancer Detect Prev

,

2005

, vol.

29

(стр.

307

16

) 12,,, et al.

Персистирующая инфекция вируса папилломы человека как прогностический фактор цервикальной интраэпителиальной неоплазии

,

JAMA

,

2001

, vol.

286

(стр.

3106

14

) 13« и др.

Естественная история типоспецифических ВПЧ-инфекций у студенток университетов

,

Биомаркеры эпидемиологии рака Пред.

,

2003

, vol.

12

(стр.

485

90

) 14« и др.

Улучшенная амплификация генитальных вирусов папилломы человека

,

J Clin Microbiol

,

2000

, vol.

38

(стр.

357

61

) 15« и др.

Молекулярный анализ изолятов вируса папилломы человека 52 типа, обнаруженных в половых путях серопозитивных и -серонегативных женщин по вирусу иммунодефицита человека

,

J Infect Dis

,

2003

, vol.

188

(стр.

1517

27

) 16,.

Организация генома и нуклеотидная последовательность вируса папилломы человека типа 33, ассоциированного с раком шейки матки

,

J Virol

,

1986

, vol.

58

(стр.

991

5

) 17« и др.

Внутритипная изменчивость 12 типов вируса папилломы человека: мировая перспектива

,

J Virol

,

1996

, vol.

70

(стр.

3127

36

) 18,,, et al.

Анализ вариантов E6 вируса папилломы человека типа 33, 52 и 58 у японских женщин с цервикальной интраэпителиальной неоплазией / раком шейки матки в зависимости от их онкогенного потенциала

,

Cancer Lett

,

2001

, vol.

170

(стр.

19

24

) 19,,, et al.

Вариация последовательности вируса папилломы человека типа 16 при раке шейки матки — мировая перспектива

,

J Virol

,

1997

, vol.

71

(стр.

2463

72

) 20« и др.

Вариация геномов вируса папилломы человека типа 6 (HPV-6) и HPV-11, отобранные по всему миру

,

J Clin Microbiol

,

1995

, vol.

33

(стр.

1746

54

) 21« и др.

Эволюция вируса папилломы человека 18 типа: древний филогенетический корень в Африке и внутритиповое разнообразие отражают совместную эволюцию с человеческими этническими группами

,

J Virol

,

1993

, vol.

67

(стр.

6424

31

) 22« и др.

Генетический дрейф вируса папилломы человека 16 типа является средством реконструкции доисторического распространения вируса и перемещения древних человеческих популяций

,

J Virol

,

1993

, vol.

67

(стр.

6413

23

) 23« и др.

Мировое геномное разнообразие вирусов папилломы человека высокого риска типов 31, 35, 52 и 58, четыре близких родственника вируса папилломы человека типа 16

,

J Virol

,

2005

, vol.

79

(стр.

13630

40

) 24,

Lam C-W

, и др.

Связь варианта вируса папилломы человека 58 типа с риском рака шейки матки

,

J Natl Cancer Inst

,

2002

, vol.

94

(стр.

1249

53

) 25« и др.

Полиморфизм изолятов вируса папилломы человека 31 типа, инфицирующих половые пути ВИЧ-серопозитивных и ВИЧ-серонегативных женщин из группы риска по ВИЧ-инфекции

,

J Med Virol

,

2005

, vol.

75

(стр.

213

21

) 26,,,,.

Равномерное распределение вариантов Е6 и Е7 ВПЧ 16 у пациентов с нормальной гистологией, цервикальной внутриэпителиальной неоплазией и раком шейки матки

,

Int J Cancer

,

1999

, vol.

82

(стр.

203

7

) 27,,,.

Варианты E6 вируса папилломы человека 16 более распространены при инвазивной карциноме шейки матки, чем прототип

,

Cancer Res

,

1998

, vol.

58

(стр.

829

33

) 28,,,,.

Риск рака шейки матки и географические вариации вируса папилломы человека 16 Полиморфизмы E6

,

Ланцет

,

1998

, vol.

352

(стр.

1441

2

) 29,,, et al.

Внутритипный вариант инфекции вируса папилломы человека типа 16 и риск неоплазии шейки матки на юге Китая

,

J Infect Dis

,

2002

, vol.

186

(стр.

696

700

) 30,,,.

Вариация в E2-связывающем домене ВПЧ 16 связана с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями шейки матки высокой степени

,

Br J Cancer

,

2001

, vol.

84

(стр.

1058

63

) 31« и др.

Геномное разнообразие изолятов вируса папилломы человека-16, 18, 31 и 35 в мексиканской популяции и родство с европейскими, африканскими и индейскими вариантами

,

Virology

,

2004

, vol.

319

(стр.

315

23

) 32

Chan S-Y

«

Ong C-K

и др.

Молекулярные варианты вируса папилломы человека типа 16 с четырех континентов предполагают древнее пандемическое распространение вируса и его коэволюцию с человечеством

,

J Virol

,

1992

, vol.

66

(стр.

2057

66

) 33,.

Антипролиферативные свойства транскрипционных факторов семейства USF «спираль-петля-спираль»

,

Proc Natl Acad Sci USA

,

1996

, vol.

93

(стр.

1308

13

) 34« и др.

Геномная вариация вируса папилломы человека типа 16 и риск интраэпителиальной неоплазии шейки матки высокой степени

,

J Natl Cancer Inst

,

1997

, vol.

89

(стр.

796

802

) 35,,,,.

Функциональное значение вариации последовательности в гене E2 и длинной контрольной области вируса папилломы человека типа 16

,

J Gen Virol

,

1999

, vol.

80

(стр.

1035

43

) 36« и др.

Варианты вируса папилломы человека типа 16 и риск рака шейки матки

,

J Natl Cancer Inst

,

2001

, vol.

93

(стр.

315

8

) 37,.

Контроль репликации и транскрипции ДНК папилломавируса

,

Semin Cancer Biol

,

1996

, vol.

7

(стр.

339

47

) 38,,,,.

Анализ последовательности длинной контрольной области вариантов вируса папилломы человека типа 16 и функциональные последствия для активности промотора P97

,

J Gen Virol

,

2000

, vol.

81

(стр.

1975

81

) 39,,,.

Вариация последовательности и физическое состояние изолятов рака шейки матки вируса папилломы человека типа 16 из Австралии и Новой Каледонии

,

Int J Cancer

,

2002

, vol.

97

(стр.

868

74

) 40,,,.

Вариабельная промоторная активность онкогена вируса папилломы человека типа 16 изолятов рака шейки матки из Австралии

,

J Clin Microbiol

,

2001

, vol.

39

(стр.

2009

14

) 41,,.

Различные активности промотора P105 среди природных вариантов вируса папилломы человека 18 типа

,

J Infect Dis

,

2005

, vol.

191

(стр.

739

42

) 42,,,.

Распространенность делеций сайтов связывания YY1 в эписомальной ДНК ВПЧ 16 от рака шейки матки

,

Int J Cancer

,

1994

, vol.

58

(стр.

803

8

) 43« и др.

Геномный полиморфизм вируса папилломы человека 52 типа предрасполагает к стойкой инфекции у сексуально активных женщин

,

J Infect Dis

,

2004

, vol.

190

(стр.

46

52

) 44,,,,.

Связывание протоонкогенного продукта c-myb с энхансером обезьяньего вируса 40 стимулирует транскрипцию

,

J Biol Chem

,

1990

, vol.