Вторник , 26 октября 2021
Главная / Разное / Глутаминовая кислота инструкция отзывы: Глютаминовая кислота инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Glutamic acid Таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой (20562)

Глутаминовая кислота инструкция отзывы: Глютаминовая кислота инструкция по применению: показания, противопоказания, побочное действие – описание Glutamic acid Таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой (20562)

Содержание

показания и противопоказания, состав и дозировка – АптекаМос

Лекарственные формы

гранулы 10г
таблетки 250мг
таблетки 500мг
субстанция 1кг
субстанция 200г
субстанция 500г
субстанция
субстанция 25кг
субстанция 1г

Международное непатентованное название

?

Глутаминовая кислота

Состав Глютаминовая кислота таблетки 250мг

Действующее вещество — Глутаминовая кислота.

Группа

?

Аминокислоты

Производители

ТХФП(Россия), Октябрь(Россия)

Показания к применению Глютаминовая кислота таблетки 250мг

Эпилепсия (преимущественно малые припадки с эквивалентами), шизофрения, психозы (соматогенные, интоксикационные, инволюционные), реактивные состояния, протекающие с явлениями истощения, депрессия, последствия менингита и энцефалита, токсическая нейропатия на фоне применения гидразидов изоникотиновой кислоты (в сочетании с тиамином и пиридоксином), печеночная кома. В педиатрии — задержка психического развития, церебральный паралич, последствия внутричерепной родовой травмы, болезнь Дауна, полиомиелит (острый и восстановительный периоды).

Способ применения и дозировка Глютаминовая кислота таблетки 250мг

Внутрь, за 15-30 минут до еды. Взрослым и детям 10 лет и старше — по 1 г 2-3 раза в сутки. Детям: до 1 года — по 0,1 г, 1-3 лет — по 0,15 г, 3-4 лет — по 0,25 г, 5-6 лет — по 0,4 г, 7-9 лет — по 0,5-1 г, 2-3 раза в сутки; при олигофрении — 0,1-0,2 г/кг. Курс лечения от 1-2 до 6-12 мес.

Противопоказания Глютаминовая кислота таблетки 250мг

Гиперчувствительность, лихорадка, печеночная и/или почечная недостаточность, нефротический синдром, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, заболевания кроветворных органов, анемия, лейкопения, повышенная возбудимость, бурно протекающие психические реакции, ожирение. Ограничения к применению. Заболевания почек и печени.

Фармакологическое действие

Нейромедиаторное, стимулирующее метаболизм в ЦНС. Участвует в белковом и углеводном обмене, стимулирует окислительные процессы, препятствует снижению окислительно-восстановительного потенциала, повышает устойчивость организма к гипоксии. Нормализует обмен веществ, изменяя функциональное состояние нервной и эндокринной систем. Является нейромедиаторной аминокислотой, стимулирует передачу возбуждения в синапсах ЦНС. Участвует в синтезе других аминокислот, ацетилхолина, АТФ, способствует переносу ионов калия, улучшает деятельность скелетной мускулатуры (является одним из компонентов миофибрилл). Оказывает дезинтоксикационное действие, способствует обезвреживанию и выведению из организма аммиака. Нормализует процессы гликолиза в тканях, оказывает гепатопротекторное действие, угнетает секреторную функцию желудка. При приеме внутрь хорошо всасывается, проникает через ГЭБ и клеточные мембраны.

Побочное действие Глютаминовая кислота таблетки 250мг

Повышенная возбудимость, бессонница, боли в животе, тошнота, рвота, диарея, аллергические реакции, озноб, кратковременная гипертермия; при длительном применении — анемия, лейкопения, раздражение слизистой полости рта, трещины на губах.

Передозировка

Данных нет.

Взаимодействие Глютаминовая кислота таблетки 250мг

Показана эффективность применения в сочетании с пахикарпином или глицином при прогрессирующей миопатии.

Особые указания

В период лечения необходимо регулярное проведение общеклинических анализов крови и мочи. При появлении побочных эффектов следует прекратить прием и обратиться к врачу. После приема внутрь в виде порошка или суспензии рекомендуется полоскание полости рта слабым раствором натрия гидрокарбоната. При развитии явлений диспепсии принимают во время или после еды.

Условия хранения

В сухом прохладном месте.

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА: инструкция, отзывы, аналоги, цена в аптеках

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА: инструкция, отзывы, аналоги, цена в аптеках — Medcentre.com.ua
  1. Главная
  2. Лекарства
  3. ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА
5

3 808 просмотров

Как вы оцениваете эффективность ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА?

☆ ☆ ☆ ☆ ☆




Глутаминовая кислота — заменимая аминокислота, участвующая в процессах переаминирования аминокислот в организме. Азот большинства аминокислот проходит стадии превращения в глутаминовую, аспарагиновую кислоты или альфа-аланин. Глутаминовая кислота участвует в белковом и углеводном обменах, стимулирует окислительные процессы, способствует обезвреживанию и выведению из организма аммиака, повышает устойчивость организма к гипоксии. Способствует синтезу ацетилхолина и АТФ, переносу ионов калия, играет важную роль в деятельности скелетных мышц. 
Глутаминовая кислота относится к нейромедиаторным аминокислотам, стимулирующим передачу возбуждения в синапсах центральной нервной системы.

Фармакокинетика

.
Глутаминовая кислота хорошо всасывается при приеме внутрь. Быстро элиминируется из крови, накапливаясь преимущественно в мышечной и нервной тканях, в печени и почках, проникает через гематоэнцефалический барьер и мембраны клеток. Частично глутаминовая кислота во время всасывания переаминируется до образования аланина. Под влиянием фермента глутаматдекарбоксилазы превращается в мозге в медиатор — гамма-аминомасляную кислоту. Около 4–7% ее выводится с мочой в неизмененном виде, остальное количество утилизируется в процессе метаболических превращений.

Показания к применению


Глутаминовая кислота применяется в лечении эпилепсии, в основном малых припадков с эквивалентами, соматогенных, инволюционных, интоксикационных психозов, реактивных состояний с явлениями депрессии, истощения; при задержке психического развития у детей, болезни Дауна, детских церебральных параличах, полиомиелите (острый и восстановительный периоды), при прогрессирующей миопатии, для устранения и предупреждения нейротоксических явлений, которые могут возникнуть при применении изониазида и других препаратов группы гидразида изоникотиновой кислоты.

Способ применения


Взрослым Глутаминовую кислоту назначают в разовой дозе 1 г 2–3 раза в день. 
Детям разовые дозы составляют: в возрасте 3–6 лет — 0,25 г, 7–9 лет — 0,5–1 г; в возрасте 10 лет и старше — по 1 г. Кратность приема — 2–3 раза в день. 
При олигофрении назначают по 0,1–0,2 г на кг массы тела больного в течение нескольких месяцев.
Принимают за 15–30 мин до еды, при развитии диспепсических явлений — во время или после еды.
Курс лечения от 1–2 до 6–12 мес. 

Побочные действия


Возможны рвота, жидкий стул, повышенная возбудимость, бессонница.
При длительном применении возможны снижение содержания гемоглобина, лейкопения.

Противопоказания: 
Противопоказаниями к применению Глутаминовой кислоты являются: лихорадочные состояния, повышенная возбудимость, резко выраженные психотические реакции, печеночная и/или почечная недостаточность, нефротический синдром, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, заболевания органов кроветворения, анемия, лейкопения; детский возраст до 3 лет.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами


В комбинации с тиамином и пиридоксином Глутаминовую кислоту применяют для предупреждения и лечения нейротоксических явлений, обусловленных препаратами гидразида изоникотиновой кислоты (изониазид, фтивазид и др.). 
При миопатии и мышечной дистрофии Глутаминовая кислота более эффективна в сочетании с пахикарпином или гликоколом. 

Передозировка


При передозировке Глутаминовой кислоты возможно усиление проявлений описанных побочных действий.

Условия хранения


В оригинальном контейнере при температуре не выше 25 оС. Хранить в недоступном для детей месте. Срок годности — 4 года.

Форма выпуска


Таблетки, покрытые оболочкой.
Упаковка: по 10 таблеток в блистере.
По 10 таблеток в блистере; по 3 блистера в пачке. 

Состав: 
1 таблетка Глутаминовая кислота содержит кислоты L-глутаминовой 0,25 г (250 мг).
Вспомогательные вещества: повидон, кальция стеарат, кислота стеариновая, крахмал картофельный, сахар, магния карбонат легкий, кремния диоксид коллоидный безводный, тальк, титана диоксид (Е 171), краситель патентованный синий V (Е 131), воск желтый, масло минеральное легкое.

Дополнительно


Во время лечения необходимо систематически проводить исследование мочи и крови. 
При возникновении побочных реакций рекомендуется снизить дозу препарата. 
Глутаминовую кислоту применяют также для снятия нейротоксических явлений, связанных с приемом других препаратов. 
После приема Глутаминовой кислоты следует прополоскать рот слабым раствором натрия гидрокарбоната.

Основные параметры

Название: ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА
Код АТХ: N07XX10 — Laquinimod

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА отзывы

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА цены в аптеках

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА в наличии найдено в 87 аптеках

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА табл. п/о 0,25 г блистер №10 Киевский витаминный завод (Украина, Киев) 1000
Глутаминовая кислота табл. п/о 250 мг блистер №10 Киевский витаминный завод ПАО (Украина, Киев) 779
Глутаминовая кислота таб 0,25г N10 742
Глутаминовая кислота 0,25 №10 Киевский витаминный завод ПАТ (Украина, Киев) 650
ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА таблетки, п/о, по 0,25 г №10 Київський вітамінний завод, ПАТ, м.Київ, Україна 664
Все аптеки

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА аналоги

Аналоги подобраны по действующему веществу, показанию и способу применения

  • Инструкция по применению
    от 39 грн
    324935 просмотров

  • Инструкция по применению
    от 349 грн
    185148 просмотров

  • Инструкция по применению
    от 210 грн
    147737 просмотров

  • Инструкция по применению
    от 450 грн
    143117 просмотров

  • Инструкция по применению
    от 480 грн
    141208 просмотров

Все аналоги

Смотрите также

  • 5.0 1 отзыв

    42 просмотров

  • 5.0 1 отзыв

    70 просмотров

  • 4.0 1 отзыв

    102 просмотров

  • 5.0 1 отзыв

    155 просмотров

  • 5.0 1 отзыв

    258 просмотров

САМОЛЕЧЕНИЕ МОЖЕТ НАВРЕДИТЬ ВАШЕМУ ЗДОРОВЬЮ

Глутаминовая кислота — инструкция по применению, цена на Глутаминовая кислота и аналоги

О препарате:

Глутаминовая кислота относится к группе заменимых аминокислот, в частности, к нейромедиаторным аминокислотам, стимулирующим передачу возбуждения в синапсах ЦНС.

Глутаминовая кислота принимает участие в обмене углеводов, белков, окислительных процессах, сокращении скелетных мышц, детоксикации и элиминации из организма аммиака; способствует синтезу ацетилхолина и АТФ, переносу ионов калия.

Повышает резистентность организма к гипоксии.

Показания и дозировка:

В комплексной терапии:

  • Эпилепсия, в основном, малые припадки с эквивалентами

  • Соматогенные, инволюционные, интоксикационные психозы, реактивные состояния с явлениями депрессии, истощения

  • Задержка психического развития у детей, болезнь Дауна, детский церебральный паралич, полиомиелит (острый и восстановительный периоды)

  • Прогрессирующая миопатия (в комбинации с пахикарпином или гликоколом)

  • Устранение и предупреждение нейротоксических эффектов, вызываемых препаратами-производными гидразида изоникотиновой кислоты

Внутрь, 2–3 раза в день.

  • Взрослым в разовой дозе — 1 г

  • Детям в возрасте 3–4 лет — по 0,25 г

  • 5–6 лет — 0,4 г

  • 7–9 лет — 0,5–1 г

  • 10 лет и старше — по 1 г

Курс лечения — от 1–2 мес до 6 мес  — 1 года.

Передозировка:

Симптомы: боль в животе, тошнота, рвота.

Лечение: первая помощь заключается в промывании желудка, приеме активированного угля.

При необходимости — симптоматическая терапия.

Побочные эффекты:

Возможно возникновение тошноты, рвоты, возбуждения, появления жидкого стула; при продолжительном лечении — понижение уровня гемоглобина и развитие лейкопении.

Противопоказания:
  • Индивидуальная непереносимость препарата

  • Лихорадочные состояния

  • Повышенная возбудимость

  • Острые психотические реакции

  • Заболевания органов кроветворения, печени, почек, ЖКТ

В период беременности применяют только по жизненным показаниям. При применении препарата в последний триместр беременности возможны преждевременные роды и другие перинатальные осложнения.

При применении препарата в период лактации необходимо решить вопрос о прекращении грудного вскармливания.

                   

Взаимодействие с другими лекарствами и алкоголем:

В комбинации с тиамином и пиридоксином препарат используют для предупреждения и лечения нейротоксических явлений, обусловленных препаратами группы гидразида изоникотиновой кислоты (изониазид, фтивазид и др.).

При миопатии и мышечной дистрофии препарат более эффективен в сочетании с пахикарпином и гликоколом.

Препарат не рекомендуется применять одновременно с этанолом.

Состав и свойства:
  • Активное вещество:  кислота глутаминовая  0,25г

  • Вспомогательные вещества: крахмал картофельный; тальк; кальций стеариновокислый; желатин

  • Оболочка: ацетилфталилцеллюлоза

Форма выпуска:

Таблетки, покрытые оболочкой, растворимой в кишечнике.

В контурной ячейковой упаковке 10 шт,  в пачке картонной 4 упаковки.

Условия хранения:

В сухом месте, при температуре не выше 25 °C.

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности препарата — 3года.

Общая информация

2018_09_04_CRV_Актофлор инструкция

%PDF-1.7 % 1 0 obj >/OCGs[5 0 R]>>/Pages 3 0 R/Type/Catalog>> endobj 2 0 obj > stream 2018-12-07T13:36:27+03:002018-12-07T13:36:27+03:002018-12-07T13:36:27+03:00Adobe Illustrator CS6 (Macintosh)

  • 256156JPEG/9j/4AAQSkZJRgABAgEBLAEsAAD/7QAsUGhvdG9zaG9wIDMuMAA4QklNA+0AAAAAABABLAAAAAEA AQEsAAAAAQAB/+4ADkFkb2JlAGTAAAAAAf/bAIQABgQEBAUEBgUFBgkGBQYJCwgGBggLDAoKCwoK DBAMDAwMDAwQDA4PEA8ODBMTFBQTExwbGxscHx8fHx8fHx8fHwEHBwcNDA0YEBAYGhURFRofHx8f Hx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8fHx8f/8AAEQgAnAEAAwER AAIRAQMRAf/EAaIAAAAHAQEBAQEAAAAAAAAAAAQFAwIGAQAHCAkKCwEAAgIDAQEBAQEAAAAAAAAA AQACAwQFBgcICQoLEAACAQMDAgQCBgcDBAIGAnMBAgMRBAAFIRIxQVEGE2EicYEUMpGhBxWxQiPB UtHhMxZi8CRygvElQzRTkqKyY3PCNUQnk6OzNhdUZHTD0uIIJoMJChgZhJRFRqS0VtNVKBry4/PE 1OT0ZXWFlaW1xdXl9WZ2hpamtsbW5vY3R1dnd4eXp7fh2+f3OEhYaHiImKi4yNjo+Ck5SVlpeYmZ qbnJ2en5KjpKWmp6ipqqusra6voRAAICAQIDBQUEBQYECAMDbQEAAhEDBCESMUEFURNhIgZxgZEy obHwFMHR4SNCFVJicvEzJDRDghaSUyWiY7LCB3PSNeJEgxdUkwgJChgZJjZFGidkdFU38qOzwygp 0+PzhJSktMTU5PRldYWVpbXF1eX1RlZmdoaWprbG1ub2R1dnd4eXp7fh2+f3OEhYaHiImKi4yNjo +DlJWWl5iZmpucnZ6fkqOkpaanqKmqq6ytrq+v/aAAwDAQACEQMRAD8A9U4q7FXkf/K7NT/6tkP/ AAb/ANMx/GL0/wDIEP5xei+U9bl1zy/a6pLEsL3HqVjUkgcJGTqf9XLoGxbotZpxhymAN1+pN8k4 rsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVfPe k+Rde1XT0vrUQhJuf1WKSVUkm9M0f01PWhzEECXuM3aGLHLhN7c9thfe9c/LEFfI+mqwoR64IPUH 6xJmRj+l5jtb/GJfD/chlGTdc7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYq7FXYqpXV3aWcDXF3NHb26 U5zSsEQciFFWYgCpIGEC1QA81eVz01iyPfa5i8K/zYeA9yLCqmv6E9wLZNStWuG2WETRlzUchRQ1 fs74OEramPNPlkio1eyI8RcRd9/5sPAe5bDv8UeWvi/3LWXwDk/+kRbLULU/FsORAx4T3LYRNrqu mXc0kFreQXE8P97FFIjum9PiVSSN/HAQUqMvmDQoZWhn1C3hmVihjllSNuQ60DkE5DiDeNNkIsRJ HuaHmTy8TQapaFqgUE8ZNT0FA3U48Q71/K5f5svkVMeavLtK/X4hvxFTSpqRtXr9k9MHGGX5PL/N Kvba7o9zII4LuN3LcAoO5YitN/YYRIFhLT5IiyCjsk0uxV2KuxV2KvMvKtpd2eiwWepWN+8EPqm5 0uayFzFKXNVMLkAx+4O1cx48t7eg1k4yyGUJQs1UhKiPf3su8h3k9p5Vs4J7d7SRWnP1aSoZFa4k ZQa7/ZIy3GNnWdozEsxIPFy3+AT/ACbhOxV2KpD521DzBZaEzeX7V7rVppEigVVDhATyd3DUWnFS Nz1IycACd+SJX0Y7D5389zq0kfliSMLIFWCZZ1kdCrvyDcOC/YCUPcg9Dk+CPeiyl8n5i+fF1TS4 pvL0kMU5PrQiKdnnHMq7JWPlH6ajlxbfv0w+HGjujiKpN+Y/nq1tGnvPLDQBAC7Ms4WrqSN+BX4G AUitWLDj0OPhx714j3JvYan5zOkXmozWlwk92scsUDKj/V6SLDIsUBEcxrGDKA/y61rVloDZydLG MpgT5fLpt9rJ9DnvZ9Kt5b1WW5YHmJI/Rc0YhS0fJ+JK0NK/0yuN1uuojETIjy99/ajsk0uxV2Ku xV2KuxVKvNKXL6DdLbNKsxCFTB6nqbSKTx9JZH6eC5KHNBYZFb6ylveMxu4+VPti/oFTnyP931/c gV6kf6y1t2QhnOsKbZZnvKRVUOV1KOV15cidoQCwWvToMO34pUQo1OGJoJfrslsZomM0aahJIeaV +FxESR8W/UAj+bbBt+KVReDW1MYVLz1J1P2V1PiACftsIjQ/D+1jt+KVknlE336QnWcXKxrCoT1k ukV3JDOzeuiJy5MQOJrxyE+SQk/mJdZfVpYo4ZByYsGga/ZDEHkA5CJJKPv2FKFe1MMQK/sTxEKO k29+dQhjvU1KK2ZSgWP9IbE1HP41Kj4jUljhIFdPsRxFMZl0QOqmbX4+LAEKt7Qsa0/ZPLv9nBR8 lv3qtnbaWxIjn8wVlPEeqt4vErQ8vjQBa164D8FtuMaekyTO/mFvS5AKy3hVxUNuEWv7NMPyQzLK mTsVdirsVQQ1eyKcw6FAaFhJFSuw68/cY0e5lQ71T9IQ8uNPipWnOOtP+Dx3Wh4uN9GOq02J+1H0 UVP7fbFaHe79IQ77dOvxx7f8PjutDvbF9GU5hSUBA5co6VPQV5e+K0O9oahCegrTY0eP/mvHdaHe tGp2xPEEVqVpzirVTQj7fbHdaHeuN/COo8T9uPt1/bx3Wh4uN/Eu5FKbGrx9en8+O60O9YNVtWAY MpViVBEkVCVNCPt9iMd+5aHeio3DoGAoD7g/qJGLErsVdirsVdirsVdiqVeaCBodwSAaGIgH09yJ VIp6vwVr09+m+ShzQXlbfoVYCLZbOCGQPxjU6aSYZv3ZZSwJPUL7nrmRv+LYbKkUNhbXx+qy2KLE h9G5A05WMbKUqQeZpIr06d98G/4tKvdTaOvKKBbUW060nBOn8WpSZoqyfa9PiFr02xFqpSQadbO9 v6NqJ3liZ4gdOBZm+x8JAryqTXb50xs/i1Zd5FttOTV9TksfqxiACepbi15SDkaM3oBWXp0Pj7Ct eQmgkJD5jg0UeYLmdWtfVQyesCdPZhIHZ2ZhMqMDQLXcnb75xukFKJV0uFRDKLNWVSj2kh0sVBZj 6gAFNyegIyW/4tGyIZNJFpbyrLYmJkHFqaaQp9TgigkcSKAdPvwb/i07JloljrX1k3+hWyFVb0Jp bb9HEDozLVeNBQqTvXIyI5H9KhkEEfn5JrdZpZpYyV9d+NkvGrAN0PxfDvsB4ZH0st2YZUl2KuxV 2KpC/lHys5BfQbdiG5gmKGvI9+vXfJeJJPAPJtPKXldKcNCgWisopHCPhkBDjr+0GNcfEkvAPJK7 /wAlK07HTbHT7WJwV/e2McrKvAJQUmjDVq/hscIyd9o4B3hBJ+XkwaYtDpjLJx2bTIzuv83+kivb JeL7/mvAO8Ig+SrxbN7JYdPNrIOUkf1CMK8pYnkymdtqJED48e21B4nvXgHeFE/l7IBEFg008X5y E6bh2AO6D6xseXvh8X3/ADXgHeHT+QbmZizQ6aJHDiS4TTkVqNQgBfrJGzAmte/tUvi+/wCa8HmG o/y8lQJSLTaivL/cZGBuCDQC6FK1x8X3/NeAd4T9vKXlduHLQoG9MEJWOI8Qa1pVtvtHIeJJPAPJ oeTvKg/6UFv1J/uoerDiT17jbHxJLwDyTixtLW0tUt7WBbaBK8IECqq1JJ2XbcmuRu0Ur4q7FXYq 7FXYq7FUs8yO6aLcMnqg1jB+rlxLQyKG4GMqwNPf8MlHmgsKkvNct5gxaWZojHKnAXzxlqAqjL6v Cm9GUJTLaCFsbauzST+rdKiKvqQvLqXqh0EXqUiExJDPLWMd1Br3OO34pVA6nrQeC6tzdxAAELcn UWVmiQet8Hqmo5r8NV6HxrhofikN276zawp6r3ctxItYkil1Foo4+RDBg8wYstABttXc9MTX4pLI fJS35vLlrs3Bog9MytdlSGbc0nd1rVfY+Fd8rnSQjhreqy6nPZwrGqwlyJpoJljIVwvFZAxVm37e +22VmMvJvicXXi+xqHVNflmcmG3EccrRspjkEjrEC3KPkyghqfA2CpeSScNfxX8EDJ5v1RoyEspF lj/eP6tpNxZAQBw4ufiGS4Jd4QDivfi+x0nmvWUYFbNqMx9QCyuSw6KpND47f2UqOCXkkHD/AEvs XXXmjWoNUaH04nshIF9RLednCbcjs9GpXsPoywQFOOSy7K0uxV2KuxV59N5p1NZ0Iv2S3dAWJkg+ DkQpNDaVqrMab7098l4R728Z4fzI/OX60P8A4y1j0ebXckYZQFk5W7KGdOa1pa9ab9f40IxG+bGW aBH0AfE/rdH5v1ETKkusNCG3Bla02RjQMwW37KedOXamWcA7mi2z5t1IwRytqzxleSTxh7RyHSr9 RbUNU+QFN/HHgHctplomtahe6yIrfV2voVlLPAPqy/6PTaSnoRuRyahUNUdanpkZRAHJQi/Nur3t nqFvDFfvZQyorO8fokqFZg7cZIJzSjAnf9n54ICwkpJp3mbWbieWFtVdmgt5pXIez39NCedPqw2B 8PDcUrkzEdyLUbfzhft+5bVpEkoQG52zguyclFTbdCelK/hjwDuW1A+cdZb4YtYIpSlZLRudCFNO VqKV61P3YeAdyLRV95k8w24R5NRkiikBeFvUtCXQkoK1s6LRkpuRu2ARCbZt5Zv5tQ0O2u5jyeXn 8XJXqFdlU8kSFdwK7KP45VIUUhM8il2KuxV2KuxV2KpR5tCHy9dhwhT92WEojKECRTQ+skkf/BKc lDmgvPEOmRNEl/FaR21ynqGThp7cVDkCWi2iD7SMlD4nvTLt+jFZBcWNw8kt0tnKZgzANHYM3qkg lyyWzCjHf4z88NKsMluAYbsWnqIqskfpaaVIJDAD/RW41i+IV+WP46qvji0wQSNLHaRwxAetcFNN f4mq6rvaDqaD/Jx3/FqyX8vxA97cyRyRB0gijliiW2jDN1LcYYYW+A1G5I3yvIkJfq8lpNqV96jQ xiwaZpJHjs2oWmJQ0ltmIrJIFJr7mp6yHJSgbPUdMkPrXMtvY3ECHgXjspCxDM1VK24C7U3Hw+OE goU7u30o2Etygs5TC6BXEdiUiSUF0SP1bYihk5jbupPemEE2tIieWwN5Ispt7V7qISzx0s3VmBLK P7lnIcorGo4g4EoRI7NNXgtbmO3dfWUyI0WlgemxXjX/AERSFIYb8wamnXD0/tRT13MZm7FXYq7F WGL52vhJF+6MyGTjLGluBIApXmN7kgEB/wDbyXhy7w2mWOuUr94/Uhbfzj5lewuJ5TarLG8Xpp9W YMY25cyI/rZ57gb8wB79rOANFlXfzjrDmZont4/SUSLDNbOHkSQ/CYyLnieCkM1aVHTbfBwBbUB5 x8wzyxRQ+hbn7DS3VqWX1Y4uT0ZLtR+8agQe9PfDwBbKN07zTr11qsEZiRbC5lIhY2zBvT+0PjFw 9WC/aISnfYYDAUm1Pz1LOl5EsfqBDCrSFPWrRZP2eFzbrWp/lqfHtjjQWPSGT6u1usc0yxs01tNA b4RlnC15Ob8Mw4x7IDt4daz/AB+NkK0V7IQluWZ4ITIIp1e74KvIrzMgv2eRFdlZzSvHt4Cvx+Aq HEt1F6d1b1V4F9YxhLqTpKqfZ/SDo1OTbH570w/j8bKsGpTejGYBLIGFLl3ku/ifmeTKq31VrGyn cmpr0w1+PwFekeW6/oOzJDAsnL4mdj8RJ6ySTP36FzTplEubIJlkUuxV2KuxV2KuxVLPMjTrotwY Fd5ax8VjMquf3i1CmBkkrT+U/PbJR5oLCXu7toVgtReGArGJubX5k9Uco2Kt9aDCPia8a9aZbSHR XV3CL0MbuSUOkELq2omLYtyrW6JPJQOLDvXGvxsrcd3e85JZVvOCQunNG1CqySIwQ0a6etOvTbtT Gvxsqvo2n6rfQTVv3iiaNYuNzNqUc2xEjMP9KWm441WhpsdiQRIgfgLTJ/L2nfV6yNe/WpQpjmC3 F1OgYP2E884UjiQdq+/bISKQl82lX73d3x1C2a1mmkDRyy3bkKxBKFBcJGrLyIoFG1MeMMvDl3IS Py1rS2/pfpKEtyJP+k3+1CSKP9Y5jsDv95AOHjj+KRwFUPlu9dUNxqKBDyDcb3UhU1FKH62O1DvX fETHT9CDEjm600PUjNG13qcLqCBIsN3qCkxqAooTdh5uIqS1d8JkO77kUmieX9Fqo+u3jcgFjX9I 3XZv2QJR3XI8RTSe5BLsVdirsVeVWllps93PZ1VJjKrtd/6J6kfpqTN6a/UEG/gx3oOJBzIJP4/t YUoXNpapMYLS65EckgmItFYhWI+FBpzca15GjYQfx+CtIm9i0K9EcpSNbuFnAt0WEpwJoOLvZtQB mIoVOAWPx+1UVoehWd+0iwrUoqzej/ohV+TBTubGLoNxQ9RvtglKvx+1ICb6T5b1S31C1llgKxWs n7o+paNxSnD7KWsR3qT8LDImQpaW+eJoIb1HckSGBVC/uAHQyHlUy2tz9k8TStPbxcaljkTWlo1t dFY540Molt5Xg9MvGQCrSJp6njwqSRSvT5z5/j9qFGyt7WFkgjdYwfTETRm2BPrrz2U6c9G+0euE /j8Wq6WTQ/T/AHQS2khgURrELZfVYOopJ/uOYBh2rTqBjv8Aj+1Ve5Fiuo8AI1jeNQX/ANF+JUIj 9RlGnMVdyhJFaA1oBgHL8frV6B5X9L9AWIi/uxHRPs9ASP2EhX7kGUz5sgmmRS7FXYq7FXYq7FUq 81Pw0C7aqrxCHk3p0Hxrv+9SZPvQ5KHNBedEQKkQuEto0kIkM7R2DlY2k9N5OP1Knwsh326/LLvx +N2Kz6nFJLd29p9Va1SRpvUEWmgyegGPrFDY0qiOzdzuad8N/jf9a03HdWVx6ioLYrcSqEsibJlL /EqoF+pHZPUcivv/ADVLX4/BV1xKtteXBit4IOYkVoUSxCRjeP0g31FiRGO7E12G+I/h5tWTeRJF l1W/lLRGWQFiyC25yAv9otBb27NT/KY9R3yvJySF+pWGhyXd211q3ps7uJIns7RlU86gVkt2Zgvi WNTvlHFDqA50IaihwmXlRUZtF8vxD0X1dY5BwfkLKw5BGQkChtiKMCD0rtjxQ7gkfmSNjL5qd7pP lk2Ky3erobWORlRmsbEqsjBWbiPqxpXgvLxpluOQ/hDjZ4zv13fmj57b8tLOZ7e7s9PFwtI5g9pH uRTqBHxFaDphuRaaCIgb8vZozJFbWBSwCoD9WQekpLOqrVNhyLHbucfUnZk2VpdirsVdirCYfNfm R7hoo4FkVKs/KKLkANjWl0vEAg1NDh8M94b+PF/Nl/ph+pVtPNOuXJjZmtLRJByUSrExAJUCvG8F DRunttiYS7/vUSw9RL/TD/iV2neeZXuFhurSWUzUEJhSKOjEn4SGuJCTTfbpQ4RjPUhrnKH8IPx/ ARUfn3TJDGqWtwXcFpUrb8oQrcT6o9b4eqmv+Uvjh8Mtdom1822VzfR2iW04eQqPUJg4KWAO5EpO 1abDr0riYLaR+enmj1WF4/UY/VxxRWmEYZZC9WEV1a+H8p+npksfJBY3I3OdIZVnilmkDyyM94sZ jZVC8aamtDTrucs/h52QrPNwtFkkE6tuIpfVu1DceKrX/chzryYg/Ga/PB+PxsqZQ+YvMVhaGG2k gFtFzEHrW0kzkhgSpke/PI0bx2yPCD+P2J3REfnTX5oTLEYFVASyta8m4qu7ALe0py2648A/H9i2 y/Rbu5u9Mhubjj6svJqKvABeZ4AqHl3C0r8XXw6CqQosgjcCuxV2KuxV2KuxVKfNTFdAu2BIoE3B cED1FqaxyW7f8lB/DJQ5oLAxeNF6c7rLIZfUKCKS7HFqtwLA6gRTnuR3Gwpl1fj8Bi6e4nSFZLjl 8bMq8fraMSvwDb9ImvQE96dcfx+NlU5L28NurcXBt4/gQG7Vmo7kBR+kV5Vr3P4dGvx+AqtZevBc ItyxCuHiLj66yVI48xz1CQ8VaReVBXeuxIxP4/FKyDyGqtJcOqSKscax1YzhKlmPELLdXQqAo7D5 75XkSFt95dke/uphqFsElklPpyzXuwcHkrIt2ke3su3UUwDIPxTPwpHotn0C5YskWoWECTFwArXi sS3EV+C7Sr/CKn+px8Qfil8KXcp2XliaU+nHqtpPcqhEnpy37HuAaC9LDqO+SM/L8fJhSJsvJeof WYpNSuo541YPMsMmoRlioYKKvdyAjcV5A174DMdP0LScQ+VNFh5+mtwvAhlh2u6IBB5V3l8cjxlN JvkUuxV2KuxV5WLiKL6xPCXB+wJ0KBiXYfCaaZ9l4y7d60p7jI/h53YKcSwi1lC28cYc8I7gU5Ag gKxrpvGq8DSi7fdj+PxurTFIr71LSUxSlVkVgYgyqRV4wRpZZeNSAWNSN++P4/G6rw8FqiKRzEkZ RgWUF1DtsQmmD9pAT06Dw3fx+N1TXSo7eTzDaSJFHBCJWSIRoiq6qzsrOGsVb1KhR/er02NesTy/ H60ozzvFGdTSSWUilsBbw8U4vJ6vxcpDa3bIOBP9nUiHJSkCwWQuwl9cLI0IiAUQxSOn7tXAWtiK UNQPiPw5P8fjdCDvZ45LQRyR0RGlKskiF/3gA4AnSyF+IVrsQSd8I/h5tUS0DwxNFeQehCj0Z2ZC Gdw/2B+igjFhEVbh5b+4/h53Vp447WeeCKCKH0+ULTRFIy6ctvUB02QE79th38cfx+N1eieV43j8 v2IcsWMfM8+NQXJanwRWy7VoKRrlM+bIJpkUuxV2KuxV2KuxVKfNZC+X7tj+yEIIIBBDqQwJiuBU HfeM5KHNBedu1tJb8lt0JhABakZkK+odx/uMFXDSqNq+Picu/h53YrZYLH6tdT2zNJplkV/0hlhg CpJIaH03016b9eIpX8Df4/BV1ummR28hLsZAVVU9OEfumifjVv0YKkvGAAB0avTqm/x/arRa3uQ8 Ij9J5wqcE4SLypGA/F9MFSeC8u3yps/j8bqybyEsP6RvDbLSNYwJ+Pp8Q7P8A+CztK/CD+2aeHfK 8nJISvWXR9ZuWT1DKk8tT63DcMU4BTYybEEdz1+0cRAdw/HxbPFmNgTXvR9i/lBLb1GvZ45YiJ5k 9Iv6ZJMYUA24qFZ9vhr0rkeDyCTmmecj81sUXleO8FxbazdWs6qwkkWzhjk4qu4Lm0BGT37mpGR3 mlXM4ih8zamsoCxlBGg+ItQE87XrvQ+334KPcFXfXtOu3mlg8y6jGy1laIQoqqpIqFRrbnxHTrUe ONHuVmGVMnYq7FXYq8kEFizOJZl51+JaoKcfip/x1ADXb9WZP4/GzBVvrt4ClrdqEkjYsIXFurKD GqrzB1NSaoibdNicAh5/AW2hJaPxmR+VtZI7CNWiIih9VuPqP+k1r8UnVvH7n8fjZVWS5t7GKezI a3eXhFP6npOxAckFlbUar8RXp0APjs1f4/Yqn5Vlj/TdhGz+qBKwSIUrRW4qQf0jcVGwehRvh6Vx ny/H6lDIPPVskmp2jCUeq6pEsAALmrtxYcru0WnKg6Hc5DGdklKlvdLubGSOaB0vo43IuneHhWSY yOPTj1BqECRurinY9FyVG/x+pUpv5ohcpAJxNJBQpOgTgVV6bV1VSeu1ckPx+KQiIF0yBLlLo7Sq TawgIhMpYKWA/SMgfcPUbb96jBv+P7FbJt0juZzNWqBHXjHX03Y1of0lxoGUdTXfavZ/h52V6N5b bloVka8v3Y327fKS4H/JRsplzZBMsil2KuxV2KuxV2KpT5sVm0C6VQGY+nRWpQ/vF2oZIAa9KFxX 36ZKHNBYDJbyRQQ2tx6skPA8FZY943Yy1r+k/wBo1Kk19suv8fgMWpJo1vmitpC/CVpQaK9FQ1ja jakKnb7TDcdtsfx+NlVbqxkheCe2Z0af05kV09UFkVGLUfU1BHqs3EDYUI3oGKD+PwFW2MRF1EJX NzO4Ejx26lTtRmQN+ka1VjvsfatK4n8filZL5Qlkn1a+mlU+o0aVairvsHqq3d0KsRX7I+eVz5Mg p6lD5aGozCfSrmeaSR/UkS4XgWbqxBuF4jbaoFPnlXjEbOXDRmQux/sv1L4NE0O5a3pot8sdQqyN cVQKRwq1LluS8dzsfvwjKWEtOB/FH/ZfqVJdM0m1WJV0XUWRApT0pmYKWFaEC4r8PQ7YnKe5Y6cH +KP2/qU00XRwIyNE1IlVUoxuG5D23uaqfHHxT3L+Xj/Pj9v6k6h2GaFILePS7vgFRQaxMEXkYwGZ 5akgLyPXY+OR4vJfBH86P2/qTTJNDsVdirsVeRyCVnkVxIHlYM8b/Ww2zMgAI01qK9dzWuZP4/G7 BN9LttDWKOfU7m8acuFULBNMh9NBTkzWUTD4Rx6dttwKQJPT8falFR2PlcW80CX2pqrxgygWkq1W Mqa8fqtGI4jscbPkrTWvlWR2Q32qepIrFna1mJPEFieb2xHLiPGp/wBbGz5Ki9FtdAj1iGWzutRM pYiOKW0kjhNVY/ba2QBeJO/IfOuCRNKFnnhZjqNsYWKyrFzSizCjIWaoeK0u+gBNKg4w5KUk0wCy vedzEs0bwEmJ4rudH5pyjZqadHX4goIB8TSuxkd/x+1CYzanJbyiJNM0serGJYqW16Ryb4hUpalT sd9wwPbBXvTaudXs2sw1xpdpPJGqekv1O8WMSF+bgVtZGApQqQu7dabYOHzW0Paa6jO6SaLYohVw nG3v92C1iB5WCgry4gkHpuPDCY+f4+a2zLRbn6zpdvN6aw8loYo1kRVKkqQolSF6bd0GVSG7II3A rsVdirsVdirsVS3zISNFueKGRvg4qpIYHmtGWkc+6n4h8ByUeaC89jvp3Mhe1+tCSAQxh5CTEAKq 0Y/RafZoVWtdu2XV+PwWLUjwi4c28AkVCKsZONOo41GmuR16cvbH8fjdU+vD5XukiM2oXVvxhRPS jthwAZQ+1bU8S1K/DTr0GQFpdL/hEXbBb2aGSNfTeOGzAoeKqSf9Hbdt6+NcfUqYeU7fQYbqYaZd zzvwKyxywLCvwsN6iCGpB26/RgmT1SGOa0irq87SpccRPchqCWSq1j48Wjtxxo0tVBY8ezUrhEAe gZjLMbAlbZXF+tzzurrU4LKCWW3EMh2ktVgEj+BrWh5qGPX7W9T2lQ6U1kkndNIZdKmtppE1XXqQ AyOSswbrT4R6VDQoQB/UZHfuCsjXy+qwrH+kL4stKymdi5o3Lfbjv06dMhxJpNcil2KuxV2KuxV5 bItpIZRMkUtuDLFasv1NeKI3P4qagvOnNjsoO++Zh5/GzBYIdPFu6GOK4t7iIyNBW0jqwJEfJhfl gUY8zQdNuvR3/H9itWllGBKV9OT1oQptuNmWYcldkUjUWK7jnTp8PjQFJ/h5CqFvDpardLdJFKhR oYWUWa1kLrRv+Oi/JTStGoPfDv8Aj+xUz0OULrNmjtD6v1j1XVRa7TTHjMwKXzN8XBRQIT/k5GXL 8fqSE287QWsupRiT0xILYuGkEBHwF+IpLdWzbs1B8NPfwjDkpSaCWIS29q8ttb26q0TtOLQqiXCE NUJqDPxdd6cTscl+PxshEweWfLEDxRtrWmtJb8kuA2zGj1K/701Xio4mtT44OI9yaVU0PRrSVZrf W9Lgmjo8LcAAHBDKxh2mhGPET0K0pny7obGMprOkrOEYuwTcgHmzCl0NlUfhjxHuK0zPQLeC30e1 hgmiuIUWiT24pEwqd0HOSg/2RyqR3SEwwJdirsVdirsVdiqWeZQP0JcHmI+JjcSN0UrIrBv7yHoR /OMlHmgvOraS0ki9MwSQzlmb66XjMaxv6arIyrqL8eLcgeJb5Vy4/j8UxVLz99eXDyXMdyweQyTR BOKhZCS5rqUVAev2BQEYj8filbbTrIQQRQSpLNwBnQhZJGdqOF4fpBaBUfgwLHdSamuN/j8BWrqS y9KRofhvi0rtMxiYHkyyqQi6ipVhQiqnevQYj8filZN5RaM63qTC7hvWmSOQXEIVAw6/Z+tXD7cg GrGm/jlc+SQ7UPMGq297NFHcARrM6hWitWYAdgTdwmnzWuYxmXa49NCUQSOnfL/iD96nN5q1BIHl F3FVGUMgityUDNwHKt6o+JhT7WIkTy/h3oOnxx+oUO8k/wDEL281XEpT072KBHSR45JI4GVgspUU YXYB2HD/AFhXxGTqXc1COEczf+cf+I71kXmu/WOO4lmRrZmCswjtQCxBbhyF6wDFVJwVLu/HzZSx 4ehH+mP/ABCsPNEglVDqVs/BkEoAtujipNTdigHT+Bw8M+5rrD+Cf+JZZknEdirsVdiryqghnnLX ErPE7MqkXbrQEiTnTT/2uhp2zI/h53YN0t4xRZJxeV/chY71onjV3Lh3WworKQOi9O+P4/G6roYJ lZJp3njcAGEUutnjZuLV/R9Rt4/cMfx+N1bOm85JGla5gkcvO5iS5Maq4JRfjsQ32ygovRan9mhb /h5Kpr5W0e8mmXUo+Dxrc7h4mj+Enm5CS2kLsQSOP7J8QcjOXRIRvnC1ubjUYxAoZ0tZN2NyoUNy VmBht5xyFdgHDZGB2SWL3OlyyXlwvq3LxxtQ8/rtKK3p1FNPNaHagYqR4iuWA/j8FiqeheWpkvH9 SNX4J6B+uGjPHKsjPw09izGg26V6/sgv4/G6tK17Lewz+k10JJoX9CQXiqOL7xUbT1X0wOvIjYdc fx+N1Xz6fdc29OW4e2KAO7/WxIjUo/Djp7Aj7SDf7Papxv8Ah5KvQfLzFtFtKszFU4lpBIGPElan 1Uift3QZTLmyCYZFLsVdirsVdirsVSrzSJDoN0IyVYhBUcq05rUfBFcNuP8Ais/xyUOaC8/gS8BK v6ohjAgWgvQHUENxKDTthtT2y78fjdiuY3UF3cC3tXuYp4GM8kqXJIEiV5pSw5FwQB3p0O+P4/G6 u0+x1mSZxGs44yfu53M6VYnivKtiAK/tNU0r37pI/H9qp3deUNdlSKOFYIvQdytyLiksiOagSH6q wNKUpSgHc5ATCaTLyt5d1DS72Wa4EYjkiVQFmEhDfDUcRBAKbdeRwTkCkBIdWtdWm1a/W3kmi4zE iLnKoYEgh2b6nMtOgorHCBGuSeOXeUBE+pmKOJY7kxNV5ZALtZgqLzC8VsUBNePwt9G+S4QPx+1B nI8yUVKsQtYfVe9iZZlNXW4nchlHrKp+rMVHKnDktCSx8cUN3UdzbpGqfWI45yjfuhclCqhVIalp 9qp2BA2NcQqppdnogjtmuf0n6qyh2/0eR0I5lUVy9uhIovxcht1r0wEnyV6JlLJ2KuxV2KvHl+oz tGx+qxxDmyqf0YASa8et1yFeJAzJ/HVgrJd28VksMUdpC0hlJZW0uNngZlHDa8FQZo68t+lMa/G6 2qXllZ3E0/1L0TDzqojexYKrSgIhP1xSami70r+GAFXafdQxOIDc2raeGdruMSadxaIoySLyF4Sv 7moJp74kfjdbV/LseljzDbtDLZtaGdDHHG9kSrFSYxWO7kdmVqLspJPYjoyulCZ/mCI/0tbGRoFV YAT6z2yN9tvs+tPC5+hae+Rx8klJbVorSQo8tvPaGQTXSB7IlljLEAEXRkqWJjG3U1PTeRQsdbR6 Os9ksO6xRltPYozEhQXN3RiVTkBXov0YVVk+rWQtHha1i1CLm0lyXsByDMHjIQ3dFoOhXqD945qg FgiFrIYvqgMSLGA76eaVbkRVb3qVDMOR/Z64fx1/Ur0/ywiroFlxpRo+exjIq5LGhiaSOlTtxYj3 yiXNkE0yKXYq7FXYq7FXYqlfmeOKXRLhJSgjZouZl4cAPVXdvUeJaD/WB8N8lHmgvM5GtyzNNLZy MI1ArJYL+zxBr9dAPT8Rl/4/GzFFTRaRwis5hZxXL+pFqrTSWJVWaZlAmi+uVrDwVqLXb/K+HBv+ P7FUJbey+poJWsfXukLyKy6c3ILQgV+tqrLUkD9fib/G6onUf0XPFC4kskWCJXlWNtPUPcsPSIT/ AEtVjLxqvEdKDruRgF/i1T/yLZ21tqVzGjxNItvE3FTCZKSqrsCYp52+E0B2A7g0pWGQ7JCOu7zz hHdXaQWVxLAC31aRVsqEFxx487hG+zX7QG3vlXB5uQMkNvT9qnCfPNw8MLtJYjk/qXLxWkqgcapy VJ69RT4R3HShOSiAOZthklEn0jh+1HvpXmsyVXXUWOpPH6mhPyrzw2O5rRlnZ6xFcB7rUVuYQvEw iBY6mn2uQY7/AIfwBISmGRV2KuxV2KuxV5hcwaysRTlfSOJnXlGuo14oAVZlSIlVPIigr7E75eK/ FMVO3k1gXcXGG6kjZwqmZNTKgBuQ62wHHehJNMO34pFq62+ryKVh20PsQ4GpAHiQy7mCnbBY/FJQ wTXmd5GW5BZeJjjTUUIkAHIcfQ8OVO7Dfvh3/FITLy6dSTU7dJ47owh0jm5R39VdSrLu8IQJ0qeQ FK18cjKqSEy85JqP6Ut5LRJ3CxCqxrdvGTyYfELeNlr8zXtTBCqSUhuLPUWs41i/SP1tjItwW/SS KFBAQxlIeW4Pxe/Q5Kx+KQu1Cy8wl5IvTmjmk4ywtAdRaKP1FpSqQUqvKhHbfp0CCPxSoq7tNTvr q6ltDeRwQIZCs/122kkUEs3BVgIcryIVE9h3wAgKhIoLqW5M08WoC3mkLSpAuoqQprtGphCmg6g9 tumH8dFZ35Zjlj0O1SV3d1DDlKJA9OZ4hhMBICBtuMqlzSEzyKXYq7FXYq7FXYqlXmiKWbQ7iKF3 SR2iAaMSM396ldolkfp1ovz2yUOaCwWODUbK+R/Xnb0CjIstvq0isqkB+YMPFhv2PhXLdj+AxTmb zHeFef1JJHD7s+mamooUB5f3D78+Vfam/jHh/FhNrT5h2lgs50yGSPifQpZal6lfhBSjWwKg8tm2 B/U8I7/uW0SdfvnjKxafGtyYPU5SWeo+n6ymtK/VVqPTrx35FvhAODh/Gy2mXl3Ur+7uJkurSOBV jRo5EhuoqhgNiZ4YlO1Ng1R0IwSCQUg1i81yLVbxUS9eBQ7osAujtVqEcAVI+yaLg8IHq3x1BArh j8lKeTzKl6bKaaRTHQo8Lai5cOteXJIJE2FNj0NcfCFcykakg/TH5KN7qetKFCzXcC/bJlXUAyFS EYOVgZXXkeqkVr0riMI7z81Gpr+GPyV7q+1y3jV5JZgssaSRSL9fdDsY+DEQEo5O9CPnj4Q7yj8w f5sfk3o+t+YLW4SBopbj1WUPJPFqsoCjrRja8FO/j88IxgdfuYZM5n0A9wpn+QYOxV2KuxV4tcro 8SyiQ2ckccnJZZDpu7cioc1qe/0ZlC/xbDZN4fMeo2duU0/VI20+J2ithG+mrGoUn92grXoR1NQP E75HhB5j71tUg846yZUEusxJBRBLMz6fxT1N67N2FegP8cHAO7702utfNWvzTen+laSSoZbePnp3 xqAePE+BK9f1YmA7vvW0XpPm3Up9XsoX1FJ4XaOOSISWNXLgryqhLfa34qK4DAUoKn+ZSWjarbLO IPigUD1kt2NPVI3M1GAqwp2xxclkl2mwiNLciONYrwGO2oNOQTSq/oAIUKmqianbwHXJH8c0IUix gqITZwoY1iaLnpxJKsDVmZt+TJUfEaHD+OqqUCROsA0+4snuLkpE6r+jUYu0/wAMa8AwZm4o67/T UY+/9Kql1+jViNnG9hJHIkbyQsbFfTuIyY+RLBubcOZ8AGp1xFq9L8qPA3l2x+ryLLCsfBGjEYSi MV4r6QCUWlAR1yifNkE2yKXYq7FXYq7FXYqk/nD0/wDDl4JOHEhB+99IJUyLxr67xR9fFh9+ShzQ Xmkb6Yq3KGaxWKIkylv0Xx5hqDc3f+X40B265fv+LY2uupdEdWBk06CJY44ngMmmfGrAKzLS6FAa VPI9xTEX+LWwrwjTrWOe1kgtVa1T+8MmlhoeScEVgbsHf3p9OO/4tXWdrEfhie1nVyILaMHTWbkS X4rS648gx40AB3rvgJ/G6sq8maNqllqE815Zi2VouKsIbaKpLA0rDNM21O4GQnIEJCLuPJiTXt5c meIG6JaNvqyepGxblUOCOVPcfOuR400oSeSdRkeRm1gtzaRgWtYXZRMCHUM1fhZWoR3w8Y7lpEQe Tit7FcXN8bqNDMZIHgiAf168hypVfiJJ4/aqa4ONaZFFHHFGkUahY0AVFHQACgGQSuxVJxIT5vMY JAXTwzLyFDWcgHh22od8l/ChOMilg/5g/mhD5OvbS1k09r03UZlDrKI+PFuNKFWrluPFxMJTpin/ AEMbaf8AVik/6SV/6p5Z+W82Pip/cfmbrUQBm8rEBl9QFryEfCnI1oUr8Jjb6cgMQ72XEe5Sj/Nn UCiOvl1VMpoqG/gVzUcwSpXl+1X78PgjvXiQurfnXNowhW78vcEl5CH07yKQEJQGnBDQbimEYL6o M6S//oY20/6sUn/SSv8A1Tw/lvNHitL/AM5FWK146C45GppcKKnx/u8P5Y96+K3/ANDG2n/Vik/6 SV/6p4Py3mvitD/nIuyWtNBcVNTS4Xr/AMi8P5bzXxXf9DGWda/oGSp7/WF/6p4Py3mvitL/AM5F WK146A61JJpcKKk9T/d4fyx718Vr/oYfTuZf/D7c2pyb11qadKn08fyx718VNbb89LWeBJf0RIvM V4+uD/xpmFlnwyId7pOyDmxifFV+SY6N+bltqeq2mnrprxNdSrEJDKCF5GlacRkBls8mefsU44GX FyHc9Ay50jsVdirsVef6z+bltpmq3entprytaytEZBKAG4mlacTlJy0eTu8HYpyQEuLmO5Lbz88r KO2d20Z5FUVKGZaHf/UOTxT4pAMNX2QcOMz4rrySo/8AOQmmEUPl008PXTxr/vrM38ue90XirT/z kFpJNT5cqfEzJ/1Sx/LnvXxW/wDoYPS61/w6akAE+unQdP8AdWP5c96+K2P+chdNAoPLxArWnrp1 8f7rH8ue9fFVP+hjbT/qxSf9JK/9U8H5bzXxXf8AQxtp/wBWKT/pJX/qnj+W818V3/Qxtp/1YpP+ klf+qeP5bzXxUz0T86L3WzMum+XHmaChkBu40+0GPVkA6Ix+jBLBXMpE7Rg/NLXDOkJ8rurP0JvY eIBbhUtxoN8j4Q708R7lS1/MvX7oKYPLJcNx4kX8FCGFa140p4nE4h4p4j3Mc/6GNtP+rFJ/0kr/ ANU8n+W82Hisr/L780IfON7d2sentZG1jEpdpRJy5NxpQKtMryYuFlGdsS/PTy15g1fWNMl0vTri 9jit3WR4I2cKxetDQZbgkADbHICXmX/KvvPH/Vivv+RD/wBMv8SPe18Bd/yr7zx/1Yr7/kQ/9MfE j3rwF3/KvvPH/Vivv+RD/wBMfEj3rwF3/KvvPH/Vivv+RD/0x8SPevAXf8q+88f9WK+/5EP/AEx8 SPevAXf8q+88f9WK+/5EP/THxI968Bd/yr7zx/1Yr7/kQ/8ATHxI968Bd/yr7zx/1Yr7/kQ/9MfE j3rwF3/KvvPH/Vivv+RD/wBMfEj3rwF3/KvvPH/Vivv+RD/0x8SPevAXf8q+88f9WK+/5EP/AEx8 SPevAU/0/wAkeb1s4lbR7tWA3BiYHr7jNRqATMkPa9mavFDTxjKQBH60/wDKflPzNbeZtMuLjTLi KGK4jaSRo2Cqobck5VGJsbNut1uGWGQEgSQ90zLeOdirsVdirwvzZ5T8zXPmbU7i30y4lhluJGjk WNirKW2IOYkomzs9jotbhjhiDIAgJBqHkjze1nKq6PdsxGwETE9fYZbpwRMEtXaerxT08oxkCT+t IP8AlX3nj/qxX3/Ih/6Zt/Ej3vFcBd/yr7zx/wBWK+/5EP8A0x8SPevAXf8AKvvPH/Vivv8AkQ/9 MfEj3rwF3/KvvPH/AFYr7/kQ/wDTHxI968Bd/wAq+88f9WK+/wCRD/0x8SPevAXf8q+88f8AVivv +RD/ANMfEj3rwF3/ACr7zx/1Yr7/AJEP/THxI968Bd/yr7zx/wBWK+/5EP8A0x8SPevAXf8AKvvP H/Vivv8AkQ/9MfEj3rwF3/KvvPH/AFYr7/kQ/wDTHxI968Bd/wAq+88f9WK+/wCRD/0x8SPevAXp v5F+WvMGkaxqcuqadcWUctuixvPGyBmD1oKjKM8gQKbMYIey5itrsVdirsVdirsVdirsVdirsVdi rsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVdirsVf/Z
  • uuid:0363adce-e4b2-ba48-a56d-dedde9f4a084xmp.did:F77F117407206811822A9211BC565A52xmp.did:0715D531B12A681183D1AC2AAD4D4501proof:pdf
  • convertedfrom application/x-indesign to application/pdfAdobe InDesign CS6 (Macintosh)/2018-09-04T16:53:46+03:00
  • savedxmp.iid:D280479262206811822ABAD868204CE92018-09-04T16:58:23+03:00Adobe Illustrator CS6 (Macintosh)/
  • savedxmp.iid:0715D531B12A681183D1AC2AAD4D45012018-12-07T13:36:19+03:00Adobe Illustrator CS6 (Macintosh)/
  • uuid:76da2bc9-5907-f340-a4a5-18088070c751xmp.did:D280479262206811822ABAD868204CE9xmp.did:F77F117407206811822A9211BC565A52proof:pdfapplication/pdf
  • 2018_09_04_CRV_Актофлор инструкция
  • Adobe PDF library 10.01False1FalseFalse150.000146209.999929Millimeters
  • PANTONE 648 U
  • PANTONE 192 U
  • Группа образцов по умолчанию0
  • PANTONE 192 USPOT100.000000CMYK0.00000080.17549941.7365000.000000
  • PANTONE 648 USPOT100.000000CMYK74.49610156.58199729.73679913.610999
  • False11mm209.9999295150.000146500001.0000001.000000FalseFalse
  • 648pantonepms1000u648120450.3121948240.3832702640.509719849 normalunknown
  • 192pantonepms1000u192120450.9178314210.3168029790.417129517 normalunknown
  • Слой 1TrueFalse
  • 001
  • 1
  • 2
  • 1
  • 1PANTONE 648 UFalse
  • 2PANTONE 192 UFalse
  • Gloss coated paperc9aafb21-2613-4d79-b3d3-a56dc4e976d50sRGB
  • 1.000000
  • 1.000000
  • 1.000000
  • PANTONE 648e117e3fd-a4d9-45d8-85d1-020529a642b00
  • PANTONE 19221ca2d60-5377-4710-95af-2de93e4176af0
  • endstream endobj 6 0 obj [5 0 R] endobj 7 0 obj >/Resources>/ExtGState>/Properties>>>/Thumb 14 0 R/TrimBox[0 0 425..?_y_/k!|>P&}ڪ/X0H|0+àeB3&[b3l/&B(ϐ=JYَd Yq̣p`ʿs4 ølٲXIiLߖF6DԲٱ5k2}űöcض6Õi,@XشУc}x16KuDhvdXi9g»`lNxP؝`ag:B&yyЉtVyX1nłR_3qxBi#»cĞf |pfb_FݔOAdVxhE[

    Глутаминовая кислота — инструкция, состав, применение при беременности

    Инструкция

    Торговое название: Глутаминовая кислота АТС-код: N07XX10Показать подробнее
    • N : Средства, воздействующие на нервную систему
    • N07 : Другие препараты для лечения заболеваний нервной системы
    • N07X : Другие препараты для лечения заболеваний нервной системы
    • N07XX : Прочие препараты для лечения заболеваний нервной системы
    • N07XX10 : Различные препараты

    Анатомо-терапевтическо-химическая классификация (АТХ) от лат. Anatomical Therapeutic Chemical (ATC) — это общепринятая международная система классификации лекарственных препаратов, которая разрабатывается под эгидой ВОЗ. Каждому препарату присвоет код из 5 уровней: действие на анатомический орган (1 уровень), основное терапевтическое и фармакологическое действие (2-4 уровни) и химическая структура (5 уровень)

    Фармакотерапевтическая группа: Аминокислоты

    В зависимости от области медицинского применения, фармакологического действия, а также на терапевтического эффекта лекарственным средствам присваивают фармакотерапевтическую группу.

    Международное непатентованое название: Глутаминовая кислота

    Международное непатентованное название (МНН) — это название лекарственного средства, рекомендованное Всемирной организацией здравоохранения, или же, при его отсутствии, обычное общепринятое название. Его запрещается использовать в качестве торгового названия лекарственного средства.

    Состав лекарственного средства

    Лекарственная форма и упаковка:

    Таблетки, покрытые оболочкой, по 0,25 г № 10, № 30

    Состав:

    1 таблетка содержит кислоты L-глутаминовой 0,25 г (250 мг)

    Срок годности и условия хранения:

    Хранить в сухом месте при температуре не выше 25 °С. Срок годности — 3 года.

    Категория отпуска: без рецепту

    Производитель: ПАО «Киевський витаминный завод», г. Киев (Украина) /

    Регистрация: UA/6723/01/01

    Срок регистрации: с 2012-04-20 по 2017-04-20

    Заявитель: () /

    Где купить — цена в аптеках Киева

    Способ применения и дозы

    Показания:

    Глутаминовая кислота — средство, регулирующее метаболические процессы в центральной нервной системе; оказывает ноотропное, дезинтоксикационное, связывающее аммиак действие. Заменимая аминокислота, играющая роль нейромедиатора с высокой метаболической активностью в головном мозге. Глутаминовая кислота участвует в белковом и углеводном обменах, стимулирует окислительные процессы, способствует обезвреживанию и выведению из организма аммиака, повышает устойчивость организма к гипоксии. Способствует синтезу ацетилхолина и АТФ, переносу ионов калия, играет важную роль в деятельности скелетных мышц. Глутаминовая кислота относится к нейромедиаторным аминокислотам, стимулирующим передачу возбуждения в синапсах центральной нервной системы.

    Показания к применению. В составе комплексной терапии: эпилепсия (преимущественно малые припадки с эквивалентами), шизофрения, психозы (соматогенные, интоксикационные, инволюционные), реактивное депрессивные состояние, психическое истощение, бессонница, последствия менингита и энцефалита, депрессия, прогрессирующая миопатия; задержка психического развития различной этиологии, детский церебральный паралич, последствия внутричерепной родовой травмы, полиомиелит (острый и восстановительный период), болезнь Дауна; токсическая невропатия на фоне применения гидразидов изоникотиновой кислоты (в т.ч. изониазида).

    Способ применения и дозы:

    Препарат назначают внутрь за 15-20 минут до еды. Взрослые принимают в разовой дозе 1 г 2-3 раза в день. Детям в возрасте 3-4 лет — по 0,25 г, 5-6 лет — 0,5 г, 7-9 лет — 0,5-1 г, в возрасте 10 лет и старше — 1 г 2-3 раза в день. Курс лечения от 1-2 до 6-12 месяцев.

    Передозировка:

    Передозировка Глютаминовой кислоты может сопровождаться болями в животе, тошнотой, рвотой. Показана симптоматическая терапия.

    Применение при беременности и кормлении грудью

    Применение Глутаминовой кислоты при беременности показано только в тех случаях, когда предполагаемая польза для матери превышает потенциальный риск для плода. В период лечения необходимо решить вопрос о прекращении грудного вскармливания.

    Побочные эффекты и противопоказания

    Побочные эффекты:

    При приеме Глутаминовой кислоты возможны аллергические реакции, тошнота, рвота, боли в животе, диарея, повышенная возбудимость. При длительном применении — понижение уровня гемоглобина и развитие лейкопении, раздражение слизистой оболочки полости рта, трещины на губах.

    Противопоказания:

    Глутаминовая кислота противопоказана при повышенной чувствительности к компонентам препарата, лихорадочном синдроме, печеночной и почечной недостаточности, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки, анемии, лейкопении, повышенной возбудимости, бурно протекающих психотических реакциях, нефротическом синдроме, угнетении костномозгового кроветворения, ожирении, детям до 3 лет.

    Особенные предупреждения:

    В период лечения Глутаминовой кислотой необходимо регулярно проводить общеклинические анализы крови и мочи.

    При развитии диспепсических явлений препарат принимают во время или после еды.

    Глутаминовую кислоту применяют также для снятия нейротоксических явлений, связанных с приемом других препаратов.

    После приема Глутаминовой кислоты следует прополоскать рот слабым раствором натрия гидрокарбоната.

    Подобные лекарственные препараты

    Важно!

    Ниже приведены препараты с таким же АТС кодом 3 или 4 уровня, или такой же фармакотерапевтической группой.
    Перед заменой препарата на аналог, обязательно проконсультируйтесь с врачом!

    • N : Средства, воздействующие на нервную систему
    • N07 : Другие препараты для лечения заболеваний нервной системы
    • N07X : Другие препараты для лечения заболеваний нервной системы
    • N07XX : Прочие препараты для лечения заболеваний нервной системы

    Прочие средства, действующие на нервную систему

    Ноотропные препараты

    Средства, влияющие на нервную систему. Анксиолитики.

    Аминокислоты

    Средства, влияющие на нервную систему

    Средства, улучшающие мозговое кровообращение

    Лекарственные средства, действующие преимущественно на центральную нервную систему

    Антигипоксанты и антиоксиданты

    Психомоторные стимуляторы

    Инструкция по применению, состав, побочные эффекты и другая подробная информация на этой странице для простоты восприятия приведена в свободном переводе официальной инструкции производителя. Данный материал предназначен только для ознакомления. Мы не занимаемся производством или продажей лекарств. Помните: необходимость применения препарата, способы и дозы определяются только Вашим лечащим врачом. Самолечение может быть опасным для Вашего здоровья!

    Статьи партнеров

    «Глутаминовая кислота», инструкция к препарату

    Химическое вещество глутаминовая кислота (глутамин) относится к группе заменимых аминокислот. В организм она поступает извне вместе с пищей. Также глутамин синтезируется в результате распада белков. Количество этого ценного вещества в организме человека находится в пределах двадцати пяти процентов от общего объема заменимых и незаменимых аминокислот. Наиболее часто в свободном виде оно встречается в мышцах. Глутаминовая кислота является важным элементом, который служит для обеспечения жизнедеятельности всего организма. Она принимает активное участие в углеводном и белковом обменах, нормализует процессы окисления, активизирует обезвреживание и вывод из организма аммиака, снижает риск развития гипоксии.

    Также глутаминовая кислота способствует переносу ионов калия и синтезу аденозинтрифосфорной кислоты. С ее помощью нормализуется выработка ацетилхолина, который является нейромедиатором, осуществляющим передачу нервно-мышечных импульсов. Эндогенная глутаминовая кислота в больших количествах содержится в белковой структуре белого и серого вещества мозга. При приеме внутрь она хорошо усваивается организмом и легко проникает сквозь мембраны клеток.

    В качестве лекарственного средства «Глутаминовая кислота», инструкция по применению которой детально ее описывает, производится синтетическим путем. Выпускается она в виде белого порошка, имеющего кристаллическую структуру. Вкус препарата кислый. Растворение порошка происходит только в горячей воде. Также медикамент может иметь форму таблеток, поверхность которых покрыта защитной оболочкой, и гранул.

    В медицинских целях медикамент «Глутаминовая кислота», инструкция по применению которого описывает его основную область назначения, рекомендуется при лечении патологий центральной нервной системы:

    — эпилепсий;

    — психозов;

    — состояний, которые сопровождаются симптомами истощения;

    — депрессий.

    Педиатры рекомендуют прием лекарственного средства в случаях задержки психического развития ребенка, имеющего различную этиологию, а также при болезни Дауна, церебральном параличе и полиомиелите на остром или восстановительном этапе. Лекарственное средство «Глутаминовая кислота» оказывает положительный эффект при лечении больных миопатией, носящей прогрессирующий характер. В данном случае ее применение должно сочетаться с использованием препарата «Пахикарпин» или «Гликокол».

    Назначение средства «Глутаминовая кислота» рекомендуется для снятия явлений нейротоксического характера, возникновение которых вероятно при прохождении курса лечения медикаментом «Изоникотиновая кислота» или «Изониазид», а также иных лекарств, входящих в группу гидразида.

    Как правило, средство хорошо переносится организмом. Однако использование препарата «Глутаминовая кислота», инструкция по применению которого предупреждает о вероятности возникновения побочных эффектов, может стать причиной рвоты, диареи или возбужденного состояния. При изменении дозы в сторону уменьшения неприятные симптомы проходят. Длительный курс лечения препаратом может вызвать снижение количества гемоглобина и лейкопению.

    Медикамент «Глутаминовая кислота», инструкция по применению которого предупреждает о патологиях, при наличии которых пациенту запрещен прием средства, не назначается при болезнях печени и почек, пищеварительного тракта и органов кроветворения. Не рекомендовано использование препарата при состояниях повышенной возбудимости и лихорадках, а также при бурных психотических реакциях.

    Лекарственное средство «Глутаминовая кислота» при планировании беременности назначается в комплексе поливитаминов в случае нерегулярного менструального цикла и редкой овуляции. Медикамент принимают по специальной схеме, назначенной врачом за шесть месяцев до возможного зачатия. Глутамин способствует насыщению клеток кислородом и активизации процесса кровообращения. Прием препарата нормализует окислительно-восстановительные реакции организма. Лекарственное средство «Глутаминовая кислота» при беременности назначается при проблемах кровообращения в плаценте, а также при гипоксии плода.

    Глутаминовая кислота — инструкция, состав, аналоги, показания, дозировка, противопоказания, цена — МедОбоз, новости здоровья

    Заменимая аминокислота, которая синтезируется в организме при переаминировании в ходе катаболизма белков. Принимает участие в протеиновом и углеводном обмене, активизирует окислительные процессы, препятствует понижению окислительно-исправительного потенциала, усиливает стабильность организма к гипоксии. Восстанавливает взаимообмен веществ, модифицируя активное положение нервной и эндокринной систем. Хорошо всасывается, проходит путем ГЭБ и клеточных мембран. В процессе метаболизма утилизируется, выводится почками в немодифицированном варианте. При прогрессирующей миопатии была представлена продуктивность соединенного употребления с пахикарпином или же глицином.

    Состав и форма выпуска

    Производя покрытые оболочкой таблетки белого цвета с слегка желтоватым оттенком, в контурной ячейковой упаковке по 10 штук в картонной пачке. В составе присутствует 0,25 г глутаминовой кислоты, а также дополнительные вещества — тальк, картофельный крахмал, стеариновокислый кальций и желатин. Оболочка сделана из ацетилфталилцеллюлозы.

    Показания

    Взрослым прописывают лекарство в целях проведения комплексной терапии при лечении эпилепсии. Равным образом необходим при соматогенных, инволюционных, интоксикационных психозов, а также реактивных состояний с элементами депрессии и истощения. Детям рекомендовано комплексная терапия в случае запоздании психологического становления у ребенка, церебральном параличе, болезни Дауна и полиомиелите. С целью ликвидации и предотвращения нейротоксических результатов, зарождаемых веществами — производными гидразида изоникотиновой кислоты.

    Противопоказания

    Компоненты препарата способны обнаружить у пациента усиленную аффектацию к составляющим. Недозволительно употребление препарата при наличии таких недугов как: печеночная или почечная недостаточность, лихорадочный синдром, анемия, лейкопения, язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки, нефротический синдром, ожирение. Так же не разрешается прием кислоты людям с высоким уровнем возбудимости, стремительно протекающими психотическими расстройствами и подавлениями костномозгового кроветворения. Кроме того, детям возрастом младше 3-х лет.

    Применение при беременности и кормлении грудью

    Соответственных и регулируемых медицинских данных безвредности использования препарата в период беременности отнюдь не проводилось. Если необходимость для матери лечения препаратом превосходит вероятную угрозу для малыша, то употребление возможно, но только после консультации специалиста. В момент лечения требуется прекратить кормить ребенка грудью.

    Способ применения и дозы

    Назначают для приема во внутрь. До еды примерно за 15-20 минут принять лекарство. Взрослым достаточно разовой дозы в 1 г 2-3 раза на день. В возрасте 3-4 лет детям допустима доза по 0,25 г, от 5 до 6 лет – 0,5 г ,от 7 до 9 лет-0,5-1 г , если же ребенку более 10 лет и старше, его доза составляет 1 г по 2-3 раза в день. Полный курс профилактики и лечения заключается от 1-2 вплоть до 6-12 месяцев. При формировании диспепсических явлений препарат употребляют в момент приема пищи или уже после. Глутаминовую кислоту детям младшего возраста прописывают в виде приготовленной из гранул суспензии.

    Передозировка

    Переизбыток глутаминовой кислоты в организме сопровождается болями в животе, тошнотой, рвотой. Если же это произошло, первым делом требуется медпомощь в виде промывании желудка и необходимость в употреблении активированного угля. При потребности следует прибегнуть к симптоматической терапии.

    Побочные эффекты

    Есть риск проявления аллергических реакций, тошноты, рвоты, болей в животе, диареи, усиленной возбудимости. В случае длительного употребления имеют все шансы обнаружиться такие симптомы как упадок уровня гемоглобина и прогрессирование лейкопении, трещины на губах, а также раздражение и зуд слизистой оболочки полости рта.

    Условия хранения

    Беречь в сухом месте и ограничить доступ ребенка к препарату.

    Температура сбережения не может быть выше 25 градусов по Цельсию.

    Не годен по истечению 3-х лет.

    инструкция по применению, эффективность и отзывы / Paulturner-Mitchell.com

    Аминокислоты чрезвычайно важны для нашего организма. Всего сегодня медики выделяют множество наименований незаменимых и заменимых аминокислот, которые поступают с пищей. Сегодня нас интересует глутаминовая кислота. В бодибилдинге это один из важнейших элементов питания, который отвечает за секрецию гормона роста, что чрезвычайно важно при наборе мышечной массы. Сегодня мы хотим поближе познакомиться с этой удивительной аминокислотой и рассказать вам, как она используется во всем мире.

    Что это такое

    Глутаминовая кислота в бодибилдинге известна давно. Это один из элементов, из которых состоят белки нашего тела. Это не обязательно, организм может восполнять запасы из других аминокислот, которые поступают с пищей. Это говядина и яйца, фасоль и творог, так что на любом столе будут ее источники. Однако глутаминовая кислота в бодибилдинге используется дополнительно в виде таблеток. Давайте посмотрим, что нужно спортсменам в увеличенном количестве.

    Зачем ей тело?

    Точнее, он будет называться L-глутаминовой кислотой.В бодибилдинге давно подмечено, что чем лучше и быстрее у человека происходит обмен веществ, тем быстрее организм придет к стандартам, которых ждет профессиональный спорт. И эта аминокислота является активным участником всех видов обмена веществ. Его действие очень разнообразно, он отлично помогает передавать сигналы по нервам в мозг. Из глутамина образуется аминомасляная кислота, улучшающая кровоснабжение головного мозга.

    Повышенная потребность в белке

    Кто знает это не хуже профессиональных спортсменов? Во время интенсивного набора массы им приходится усваивать огромное количество белковой пищи, а вдобавок — протеиновые коктейли.При их расщеплении образуется чрезвычайно токсичное вещество — аммиак. Чтобы организм не отравился, под действием глутамина аммиак превращается в мочевину, которая выводится естественным путем. Кроме того, аминокислота помогает стимулировать деятельность надпочечников.

    Большой спорт и тело

    Чуть позже мы рассмотрим, как принимать глутаминовую кислоту в бодибилдинге. А пока остановимся на том, что он даст вашему организму. Глютамин — основной компонент мышечной ткани.Без него его формирование, по возможности, сильно отстает по времени и интенсивности. И это очень важно. Представьте, человек месяц за месяцем выкладывается в спортзале, но безрезультатно. Что случится? Мотивация резко упадет, и, возможно, он вообще бросит учебу.

    Почему глутамин играет такую ​​важную роль в этом процессе? Для спортсмена также ценна способность глютамина восполнять недостаток кислорода. Чем интенсивнее физическая нагрузка, тем сильнее ее будет ощущать ваше тело.Таким образом, простая аминокислота, которая есть во многих продуктах питания, помогает быстрее наращивать мышечную массу, а также восстанавливать организм после нагрузок.

    Особенности приема

    Следует отметить, что даже самый безопасный препарат нельзя принимать без консультации врача или фитнес-тренера. Однако если посмотреть на популярность, то в бодибилдинге лидирующую позицию занимает глутаминовая кислота. О том, как его применить, мы сейчас и поговорим. Эта аминокислота наиболее нестабильна в растворах. Поэтому, если вы планируете пить его сразу после тренировки, то отнесите в зал в виде порошка и съешьте на месте.

    Дозировка

    И здесь все очень индивидуально. Очевидно, перед приемом важно проконсультироваться с врачом. Однако мы дадим вам общее представление о том, как глутаминовая кислота используется в бодибилдинге. Инструкция рекомендует ежедневный прием от 8 до 20 граммов гликогена в сутки. В этом случае дозировка сильно зависит от индивидуальных особенностей диеты. Иногда опытные бодибилдеры увеличивают эту дозу до 40 г в сутки, но делать это нужно постепенно, следя за состоянием своего организма.

    Разные схемы приема

    Поскольку все спортсмены разные, будут разные методы приема. А неопытному бодибилдеру бывает сложно найти оптимальную схему, поэтому лучше обратиться к профессиональному тренеру. Однако наша задача — рассказать вам, как используется глутаминовая кислота в бодибилдинге. Инструкции по применению рекомендуют новичкам взять немного, на 2 минуты. Именно этот метод обеспечивает наиболее полное усвоение мышцами.

    В дни повышенной спортивной нагрузки организму требуется повышенное питание и снабжение кислородом.Поэтому рекомендуется принимать глютамин перед посещением тренажерного зала и после тренировки. Обычно рекомендуется принимать по 5-20 г за раз, чтобы препарат оказал наибольшее действие.

    Очень важно запивать аминокислоту большим количеством жидкости. Опытные тренеры рекомендуют принимать его с протеиновым коктейлем или просто вместе с едой. Но с другими аминокислотами его не следует путать, нужен хотя бы временный перерыв.

    Повышенная дозировка

    Если спортсмен решил высушить свое тело и одновременно набрать мышечную массу, то необходимо изменить дозировку.Обычно в этот период соблюдается низкоуглеводная диета. Поэтому тренер назначает минимум 30 граммов глютамина в день, чтобы избежать катаболизма мышц. То есть, если организму не хватает углеводов, он начнет высасывать аминокислоты из ваших мышц. В этом случае невозможен рост и укрепление. Следует отметить еще один интересный факт. Ежедневный прием глютамина в количестве 20-40 г позволяет активировать иммунную систему. Эти врачи установили на примере пациентов, которым пересаживали костный мозг.И спортсмены с высокими нагрузками и хорошим иммунитетом будут как раз кстати.

    Судя по отзывам опытных спортсменов, прием этих аминокислот в правильной дозировке помогает значительно повысить работоспособность вашего организма и быстрее достичь поставленных целей. В качестве эксперимента тренировочный цикл проводился многократно, заранее оговоренный в срок. При этом несколько человек как обычно качались, а другие принимали глутаминовую кислоту. В результате было очевидно, что во втором случае все показатели значительно опережают.К тому же спортсмены демонстрируют повышенную работоспособность и самочувствие.

    Обзор потребления глутамата из источников пищевых добавок и без добавок в Европейском союзе — FullText — Annals of Nutrition and Metabolism 2018, Vol. 73, Прил. 5

    Аннотация

    Предпосылки: Потребление глутамата может быть связано с его естественным присутствием в качестве компонента белков, наличием свободного глутамата в некоторых ферментированных пищевых продуктах, а также с добавлением глутаминовой кислоты и глутамата в пищевые продукты в качестве улучшающих вкус добавок. . Резюме: Потребление глутамата после гидролиза пищевых белков может достигать 440 мг / кг массы тела / день для малышей и маленьких детей. Высокий уровень поступления глутамата из-за его естественного присутствия в продуктах питания или из-за использования пищевых добавок, учитывая очень консервативные предположения об условиях использования, примерно равен 80 мг / кг массы тела в день для детей ясельного возраста и маленьких детей. Ключевые сообщения: Использование глутаминовой кислоты и глутамата в качестве пищевых добавок вносит незначительный вклад в общее поступление глутамата из всех источников.

    © 2018 Автор (ы) Опубликовано S. Karger AG, Базель


    Введение

    В 2017 году группа EFSA по пищевым добавкам и источникам питательных веществ (ANS), добавленная к Food, опубликовала научное заключение с переоценкой безопасности глутаминовой кислоты-глутамата (E620 – E625) при использовании в качестве пищевых добавок [1] . В заключении сделан вывод, что воздействие глутаминовой кислоты и глутаматов (E620 – E625) превышало не только предложенную допустимую суточную дозу (ADI) (30 мг / кг массы тела / день), но и дозы, связанные с побочными эффектами у людей для некоторых групп населения.Однако комиссия также сочла, что неопределенности, выявленные в оценке воздействия, приведут к завышению оценки воздействия глутаминовой кислоты — глутаматов. Хотя в Заключении не рассматривались отдельно природные источники воздействия глутамата, использование аналитических данных об уровнях глутамата во многих пищевых продуктах означало, что нельзя исключить вклад в общее поступление в результате естественного происхождения.

    Глутамат естественным образом содержится во многих распространенных продуктах питания, поэтому мясоеды, рыбоеды, вегетарианцы и веганы имеют аналогичные средние фоновые дозы около 15 г / день [2].Большая часть глутамата в обычном рационе образуется в результате гидролиза белков животного и растительного происхождения. Однако некоторые продукты питания, особенно полученные путем ферментации, могут содержать значительные количества природного свободного глутамата в дополнение к тому, что содержится в белках [3]. Присутствие в пищевых продуктах таких ингредиентов, как гидролизованные белки, без добавления глутаминовой кислоты и глутаматов, также может приводить к относительно высокому уровню глутамата [4].

    Из-за очевидного превышения предложенной дневной дозы глутамата в результате его использования в качестве пищевой добавки и неопределенности в отношении потенциального вклада естественных и других источников пищевого глутамата, желательно исследовать потенциальные поступления из всех источников и учитывать относительные вклад из каждого источника отдельно.

    Потенциальное потребление глутамата с пищей оценивалось по следующим сценариям:

    1. Потребление глутамата только из природного свободного глутамата.

    2. Потребление глутамата из пищевого белка.

    3. Общее потребление естественного глутамата из белка и свободного глутамата.

    4. Потребление свободного глутамата от пищевых добавок.

    5. Потребление свободного глутамата от пищевых добавок и свободного глутамата природного происхождения.

    6. Общее потребление глутамата с пищей из всех источников вместе взятых.

    Потенциальный вклад гидролизованного растительного белка (HVP), дрожжевых экстрактов и других ингредиентов отдельно не рассматривался, поскольку они взаимозаменяемы в качестве усилителей вкуса с глутаминовой кислотой и глутаматами (E620 – E625). Во многих случаях концентрации глутамата, связанные с HVP или дрожжевыми экстрактами, будут ниже из-за присутствия других ароматизирующих элементов. Это означает, что общее воздействие из этих 3 источников никогда не может превышать воздействие глутаминовой кислоты и глутаматов (E620 – E625), предполагая, что все пищевые продукты, в которых разрешена добавка, фактически содержат добавку на функциональном уровне.Добавление глутаминовой кислоты в пищу в качестве питательного вещества предназначено для пищевых продуктов для определенных групп [5] и не будет далее рассматриваться в этой оценке.

    Материалы и методы

    Уровни свободного глутамата в пищевых продуктах

    Информационный центр Умами (UIC) заказал анализ образцов обычно потребляемых пищевых продуктов и провел обзор литературы для сопоставления опубликованной информации об уровнях свободного глутамата в пищевых продуктах и ​​продуктах питания. напитки. Аналитические методы, результаты и литературные источники доступны на сайте UIC [6].Данные охватывают многие из наиболее распространенных категорий продуктов питания и показывают, что свободный глутамат присутствует практически во всех проанализированных продуктах питания, и что уровни могут варьироваться на порядки в зависимости от типа продуктов. Продукты, которые подвергаются каким-либо методам ферментации во время производства, такие как сыр и соевый соус, часто имеют более высокий уровень свободного глутамата. Однако такие продукты не обязательно будут основным фактором воздействия на человека, если они не потребляются в значительных количествах. Пища, которая содержит меньшее количество свободного глутамата, но которую едят чаще или в больших количествах, вероятно, окажет значительное влияние на фоновое воздействие, поэтому было важно убедиться, что они включены в оценку.

    Данные, включенные в базу данных UIC, были сопоставлены с описаниями продуктов питания EFSA FoodEx Level 3 (L3) [7], используемыми в Комплексной базе данных EFSA по потреблению пищевых продуктов [8]. Категории, по которым не было доступных данных по глутамату, включали макаронные изделия, смешанные мясные / овощные блюда, готовые к употреблению блюда, переработанные фруктовые продукты и десерты, включая йогурты. Пищевые продукты, в которых глутаминовая кислота и глутаматы одобрены в качестве добавок или в которых в качестве ингредиентов могут использоваться дрожжевые экстракты или HVP, были исключены.Уровни свободного глутамата в более широких категориях на уровне L2 в системе EFSA FoodEx приведены в таблице 1.

    Таблица 1.

    Уровни свободного и связанного глутамата в широких категориях пищевых продуктов

    Если пища может потребляться в различных формах, то же значение было воспроизведено. Например, значение, указанное для ананаса (1136 мг / кг), также использовалось для ананасового сока и ананасового нектара. Значение «картофель» (667 мг / кг) использовалось для всех видов картофеля (вареного, жареного и т. Д.).), а также блюда из картофеля. Данные о пищевом компоненте также использовались в тех случаях, когда этот продукт был основным ингредиентом другого продукта, такого как помидоры в томатном кетчупе.

    Данные об уровнях свободного глутамата в некоторых конкретных сортах созревшего сыра были доступны, и они (с усреднением нескольких значений, если необходимо) были введены напрямую. Для широкой группы «сыр» и для других названных сыров использовалось среднее значение всех сыров, по которым были доступны данные (10 221 мг / кг). Уровень естественного содержания глутамата для хлеба (173 мг / кг) использовался для всех хлебобулочных изделий, включая сухие завтраки.

    После созревших сыров соевый соус, вяленые помидоры, сушеные колбасы и ветчина, а также древесные орехи имели следующие самые высокие уровни свободного глутамата. Как и сыры, производство соевого соуса и сушеного окорока включает ферментацию.

    Уровни связанного с белком глутамата в продуктах питания

    Служба сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США (USDA) собрала данные об уровнях аминокислот почти в 5000 распространенных типах продуктов питания [9]. Данные основаны на высокоэффективной жидкостной хроматографии после кислотного гидролиза белка, который превращает глутамин в глутамат.Чтобы избежать завышенной оценки, все концентрации глутамата были снижены в 0,4 раза, как рекомендовано Beyreuther et al. [10], так что они представляют собой глутамат, полученный только из связанного с белком глутамата. Анализ также обнаружит свободные глутаматы, и для снижения этого фактора были исключены такие продукты, как ферментированные продукты (включая сыр), которые, как известно, содержат повышенный уровень свободного глутамата. Уровни связанного глутамата в более широких категориях на уровне L2 в системе EFSA FoodEx приведены в таблице 1.

    Средние уровни глутамата в продуктах животного и растительного происхождения были извлечены из системы USDA и сопряжены с 570 пищевыми кодами EFSA FoodEx уровня 3 (L3) из Комплексной европейской базы данных о потреблении пищевых продуктов (Таблица 1). Если категории продуктов питания Министерства сельского хозяйства США соответствовали категории EFSA FoodEx, использовалось среднее значение. Самые высокие уровни глутамата были в яйцах и яичных продуктах (около 14 400 мг / кг в целом), мясе и мясных продуктах, а также в рыбе и морепродуктах (около 12 000 мг / кг в целом).

    Уровни глутамата из пищевых добавок

    Данные об уровнях глутаминовой кислоты и глутаматов (E620 – E625) были взяты из Приложения E (уровни концентрации глутаминовой кислоты-глутамата (E620 – E625), используемые в сценариях воздействия) EFSA ANS Opinion [1] переоценивает безопасность глутаминовой кислоты-глутамата. Набор данных включал все категории пищевых продуктов, для которых разрешено использование глутаминовой кислоты (E620 – E625) и по которым были доступны данные. В дополнение к данным о фактических уровнях использования, предоставленных пищевой промышленностью, были включены аналитические данные, предоставленные государствами-членами, независимо от того, был ли глутамат получен из пищевых добавок или из природных источников.Уровни, использованные в уточненной оценке воздействия из Приложения E Заключения ANS, были сопоставлены с описаниями пищевых продуктов EFSA FoodEx Level 3 (L3), используемыми в Комплексной европейской базе данных о потреблении пищевых продуктов EFSA.

    Самые высокие уровни использования были для категории «12.2.2 Приправы и приправы» (208 700 мг / кг), за которой следовали «07.2 Прекрасные хлебобулочные изделия» и «15.1 Снеки на основе картофеля, злаков, муки или крахмала» (обе при 10000 мг / кг).

    Данные о потреблении пищевых продуктов и модель воздействия

    Данные о потреблении пищевых продуктов, выраженные в граммах на килограмм массы тела в день (г / кг массы тела / сутки), были взяты из опубликованной версии Комплексной базы данных о потреблении пищевых продуктов в Европе EFSA на уровне L3 и включены в детерминированная модель воздействия [11].Для каждой категории пищевых продуктов и для каждой комбинации страны / возрастной группы модель воздействия добавляет 95-й процентиль потребления «только потребители» к среднему потреблению населения от всех других пищевых продуктов для оценки высокого уровня общего потребления, связанного с этой категорией пищевых продуктов. Наивысший общий уровень потребления, связанный с любой категорией пищевых продуктов, считается высоким уровнем потребления для данной комбинации страны / возрастной группы. Это значение в целом эквивалентно 95-му процентилю в других моделях воздействия. Результаты выражаются в виде диапазона средних и высоких уровней потребления по всем странам в каждом возрастном диапазоне.

    Результаты

    Потребление глутамата только из естественного свободного глутамата

    Среднее потребление свободного глутамата населением варьировалось от 5,5 мг / кг массы тела / день (пожилые австрийцы) до 37 мг / кг массы тела / день (дети ясельного возраста в Бельгии; Таблица 2) . Созревший сыр (неуточненный или относящийся к конкретным видам сыра) больше всего способствует среднему потреблению, за ним следуют консервы, но в некоторых случаях также могут иметь значение молоко, картофель и помидоры.

    Таблица 2.

    Потребление свободных глутаматов из продуктов питания и напитков в естественных условиях

    Высокие уровни потребления находятся в диапазоне до 82 мг / кг веса тела в день для других детей в Бельгии, 77 мг / кг веса тела в день для датских младенцев и 56 мг / кг массы тела / день для других детей в Болгарии.Высокий уровень потребления у датских младенцев связан с потреблением детской смеси на основе гидролизатов белка, и поэтому может рассматриваться как исключение. Высокое потребление связано с высоким потреблением сыра различных типов.

    Потребление глутамата из пищевого белка

    Среднее потребление глутамата из пищевого белка в популяции варьировалось от 68 мг / кг веса тела в день (пожилые люди в Великобритании) до 307 мг / кг веса тела в день (дети младшего возраста в Испании; таблица 3). У малышей самый высокий средний уровень потребления, вероятно, это связано с их более высокой потребностью в энергии в целом.Высокий уровень потребления составляет 444 мг / кг массы тела в день для детей ясельного возраста в Финляндии. Основными источниками потребления в больших количествах были коровье молоко для детей и мясо и некоторые зерновые продукты для взрослых.

    Таблица 3.

    Потребление глутамата из пищевого белка

    Общее потребление природного глутамата из белка и свободного глутамата

    Когда уровни свободного глутамата и глутамата, полученного из белка, были добавлены и введены в модель воздействия, оценки потребления были очень похожи тем, из одного только белка.Среднее потребление населения варьировалось от 76 мг / кг мт / день (пожилые люди в Великобритании) до 331 мг / кг мт / день (дети ясельного возраста в Испании; Таблица 4), а высокие уровни потребления варьировались до 468 мг / кг мт / день для детей ясельного возраста в Финляндии. . Этого результата следовало ожидать, поскольку концентрации белкового глутамата обычно на порядки выше, чем уровни свободного глутамата. Основными источниками потребления в больших количествах снова были коровье молоко для детей и мясо и некоторые зерновые продукты для взрослых.

    Таблица 4.

    Потребление глутамата из природного свободного глутамата и пищевого белка

    Свободный глутамат из добавления E620 – E625

    Когда данные об уровнях использования из Приложения E к Заключению ANS по глутаматам [1] были введены в модельное среднее потребление населения варьировалось от 2 мг / кг массы тела в день (пожилые люди в Дании) до 37 мг / кг массы тела в день (дети ясельного возраста в Бельгии; Таблица 5), а высокие уровни потребления составляли до 82 мг / кг массы тела в день. для малышей в Великобритании.Поскольку они основаны на одних и тех же уровнях использования, результаты очень похожи на результаты, представленные в заключении ANS для небрендового сценария (таблица 6), хотя применялись разные методологии воздействия.

    Таблица 5.

    Потребление свободных глутаматов при использовании E620 – E625 в продуктах питания и напитках

    Таблица 6.

    Потребление свободных глутаматов при использовании E620 – E625 в продуктах питания и напитках, о которых сообщается в заключении EFSA (EFSA 2017a )

    Основными источниками высокого уровня потребления для всех возрастных групп были выпечка, торты и супы.

    Общий свободный глутамат из E620 – E625 и естественный свободный глутамат

    Оценки общего потребления свободного глутамата основывались на уровнях использования E620 – E625 из Приложения E к заключению ANS [1] и уровнях естественного свободного глутамата вместе взятых. Среднее потребление населения колебалось от 11 мг / кг массы тела в день (пожилые люди в Дании) до 74 мг / кг массы тела в день (дети ясельного возраста в Бельгии; Таблица 7), а высокие уровни потребления варьировались от более 110 мг / кг массы тела в день для детей ясельного возраста в Болгария и другие дети в Бельгии. Основными источниками высокого потребления для всех возрастных групп были выпечка и торты, а также созревшие сыры всех типов.

    Таблица 7.

    Потребление свободных глутаматов от использования E620 – E625 и естественное наличие свободного глутамата

    Общий глутамат

    Общее потребление глутамата было оценено путем объединения данных о естественном глутамате гина, глутамате, полученном из белка, и глутамате. из присадки E620 – E625. Среднее потребление населения варьировалось от 88 мг / кг мт / день (пожилые люди в Великобритании) до 346 мг / кг мт / день (дети ясельного возраста в Испании; Таблица 8), а высокие уровни потребления варьировались до 474 мг / кг мт / день для детей ясельного возраста в Финляндии. .Основными источниками потребления в больших количествах снова были коровье молоко для детей и мясо и некоторые зерновые продукты для взрослых. Таблица 8. настоящая оценка. В частности, различие между глутаматом, естественно присутствующим в пище, добавленным в качестве пищевой добавки или присутствующим в качестве питательного вещества, не может быть проведено с использованием только аналитических данных.Однако во многих случаях информация о природе пищевых продуктов и схемах использования добавок и питательных веществ может помочь определить продукты, в которых могут присутствовать добавки или нет. Например, использование аналитических данных для пищевых продуктов, таких как сухие завтраки, пирожные и печенье, нереально, поскольку добавка используется для усиления вкуса «умами» в пикантных продуктах. Это, вероятно, приведет к значительному завышению оценок потребления E620 – E625 для большого количества потребителей таких продуктов.

    Оценка потребления E620 – E625 также предполагала, что 100% каждой утвержденной категории содержали добавку, хотя база данных Mintel Global New Products Database (Приложение D Заключения ANS) [1] показала, что в большинстве случаев менее 2% продуктов в данной категории содержали добавку.В частности, только 0,4% «Изысканных хлебобулочных изделий», которые были категорией, определенной группой ANS как основной источник потребления, содержали E620 – E625. Это, вероятно, будет относиться только к пикантным крекерам, которые можно рассматривать как исключение в разделе «прекрасные хлебобулочные изделия». Использование HVP и дрожжевых экстрактов в качестве усилителей вкуса вряд ли увеличит общее потребление глутамата, поскольку они используются вместо E620 – E625 в некоторых пищевых продуктах.

    Данные об уровнях свободного глутамата в пищевых продуктах неполные и в основном сосредоточены на пищевых продуктах, где ожидается более высокий уровень.Это означает, что трудно оценить фоновые поступления, влияющие на общие поступления от всего рациона. В этом исследовании эта проблема была решена путем экстраполяции данных о ключевых продуктах питания, таких как картофель, на все варианты этого продукта. Однако остаются большие пробелы в данных, и значения были доступны только для половины всех категорий пищевых продуктов на уровне L3 в системе кодирования EFSA FoodEx. Если эти пробелы в данных относятся к продуктам с относительно низким содержанием глутамата, эффект должен быть минимальным.

    Неопределенности также относятся к значениям, используемым для пищевых продуктов, в которых сообщается о более высоких уровнях глутамата. Это связано с тем, что концентрация свободного глутамата, вероятно, сильно варьируется, особенно если он является продуктом ферментации. Поскольку уровни глутамата повышаются во время старения, трудно определить репрезентативное значение, поскольку местные вкусы и культура приведут к потреблению продуктов с разной степенью зрелости. Высокий уровень глутамата традиционно ассоциируется с некоторыми зрелыми сырами, такими как Parmigiano reggiano .Однако это исследование показало относительно высокие концентрации в мягких сырах, таких как бри (18 560 мг / кг), возможно, если дать им полностью созреть.

    Глутамин и глутамат присутствуют в пищевых белках примерно в равных количествах [12]. Предварительный гидролиз аналитической кислоты приведет к тому, что глутамин в белках будет определяться как глутамат. Применение поправочного коэффициента 40% приведет к некоторой неопределенности, если соотношение глутамина к глутамату варьируется между белками.

    Поскольку продукты, такие как ферментированные продукты (включая сыр), которые, как известно, содержат повышенный уровень свободного глутамата, были исключены из оценки, а уровни глутамата в других продуктах питания на несколько порядков ниже, чем глутамат из белка, свободный глутамат будет иметь вносили лишь незначительный вклад в оценки глутамата из белка.

    В целом, неопределенности могут привести к переоценке воздействия глутамата глутаминовой кислоты (E620 – E625) в качестве пищевых добавок, переоценке воздействия глутамата из производного белка в рацион и возможной недооценке поступления свободного глутамата из природных источников. Однако оценки близки к предыдущим оценкам в заключении ANS [1] и опубликованной литературе [4, 13] и, следовательно, обеспечивают разумную основу для сравнения.

    Обсуждение

    Методологические проблемы влияют на надежность анализов на глутамат в пищевых продуктах, поскольку невозможно различить свободный природный глутамат, глутамат, полученный из глутамина, или глутамат в белках, или глутамат, добавленный в качестве пищевой добавки или питательного вещества.Тем не менее, тщательный отбор образцов с известным происхождением и составом может помочь уменьшить неопределенность, сгруппировав продукты, о которых известно, что они имеют высокий уровень свободного глутамата, продукты с высоким уровнем белка и продукты, в которые добавление глутамата для улучшения вкуса или питания может быть целесообразным.

    Глутамат из белка является самым большим источником воздействия, в некоторых случаях его содержание превышает 400 мг / кг массы тела / день. Основным источником такого глутамата обычно является коровье молоко, хотя мясо (включая курицу и рыбу) и некоторые продукты на основе злаков могут быть важны для некоторых людей.

    Возможное поступление глутамата и природного свободного глутамата в результате использования пищевых добавок как минимум на порядок ниже, чем потребление глутамата, связанного с белком, и очень похоже друг на друга (рис. 1). Хотя оценки потребления пищевых добавок, вероятно, будут очень консервативными из-за предположения о 100% -ном использовании по широким категориям, таким как «прекрасные хлебобулочные изделия», оценки естественного свободного глутамата, вероятно, будут более надежными или могут немного занижать реальное воздействие. .Если сложить вместе, общее гипотетическое потребление удваивается для средних потребителей и примерно на одну треть для потребителей высокого уровня.

    Рис. 1.

    Максимальные национальные уровни потребления глутамата из всех источников.

    Добавление потребления глутамата из пищевых добавок к общему воздействию из природных источников приводит к увеличению общего потребления примерно на 8% для средних потребителей и примерно на 19% для потребителей самого высокого уровня.

    Заключение

    Глутаминовая кислота и глутаматы повсеместно присутствуют в продуктах с высоким содержанием белка.Переваривание глутаминовой кислоты в белках может привести к поступлению свободного глутамата, и глутамин, содержащийся в белках, также может вносить свой вклад. Уровни глутамата после кислотного гидролиза могут достигать 50 000 мг / кг в некоторых масличных семенах. Уровни глутамата из белка в продуктах животного происхождения обычно составляют около 25000 мг / кг.

    Свободные глутаматы могут встречаться в относительно высоких концентрациях в некоторых ферментированных продуктах, таких как сыр, мясные консервы и соевый соус. Уровни свободного глутамата, по-видимому, сильно различаются, вероятно, в зависимости от степени старения и созревания и могут повышаться до более 18000 мг / кг.

    Уровни использования добавок для глутаминовой кислоты и глутамата (E620 – E625) ограничены до 10 000 мг / кг в 65 широких категориях пищевых продуктов (кроме приправ) в соответствии с положениями Европейских правил пищевых добавок [14, 15]. Однако глутаминовая кислота и глутаматы будут использоваться только в пикантных продуктах, где есть необходимость усилить вкус «умами», и поэтому будут использоваться только в небольшой части продуктов, для которых они разрешены.

    Консервативные оценки потенциальных высоких уровней потребления глутамата и глутаминовой кислоты при использовании E620 – E625 колеблются примерно до 80 мг / кг массы тела в день для детей ясельного возраста и других детей.Предполагаемые высокие уровни потребления свободного глутамата из природных источников дают очень похожий результат. Потребление глутамата из аминокислот в белках может составлять более 400 мг / кг массы тела в день для тех же возрастных групп.

    Использование глутаминовой кислоты и глутамата в качестве пищевых добавок, таким образом, приводит к поступлению свободного глутамата, очень схожему с поступлением из природных источников, и вносит незначительный вклад в общее поступление глутамата из всех источников.

    Подтверждение

    Аналитические данные и данные из научной литературы о наличии свободного глутамата в пищевых продуктах были предоставлены МСЖД.http://www.umamiinfo.com/umamidb/.

    Заявление об этике

    Автор не имеет никаких этических конфликтов, которые следует раскрывать.

    Заявление о раскрытии информации

    Автор не заявляет о конфликте интересов.

    Источники финансирования

    Исследование финансировалось Ajinomoto Co., Inc. (Токио, Япония). Подготовка, установка и участие в семинаре были поддержаны Международным техническим комитетом по глутамату (IGTC), Брюссель. Взгляды автора являются его собственными и не обязательно отражают точку зрения IGTC.

    Список литературы

    1. Панель EFSA по пищевым добавкам и источникам питательных веществ, добавленным в продукты питания (ANS), Mortensen A, Aguilar F, Crebelli R, Di Domenico A, Dusemund B, Frutos MJ и др.: Повторная оценка глутаминовой кислоты (E 620), глутамата натрия (E 621), глутамат калия (E 622), глутамат кальция (E 623), глутамат аммония (E 624) и глутамат магния (E 625) в качестве пищевых добавок.EFSA J 2017; 15: 4910.
    2. Schmidt JA, Rinaldi S, Scalbert A, Ferrari P, Achaintre D, Gunter MJ, Appleby PN, Key TJ, Travis RC: Концентрации в плазме и поступления аминокислот у мясоедов-мужчин, мясоедов, вегетарианцев и веганов: кросс -секционный анализ в когорте EPIC-Oxford.Eur J Clin Nutr 2016; 70: 306–312.
    3. Ниномия К. Естественное явление. Food Rev Int 1998; 14: 177–211.
    4. Популин Т., Морет С., Труант С., Конте Л.С.: исследование наличия свободной глутаминовой кислоты в пищевых продуктах с добавлением глутамата натрия и без него.Пищевая химия 2007; 104: 1712–1717.
    5. Регламент (ЕС) № 609/2013 Европейского парламента и Совета от 12 июня 2013 г. о пище, предназначенной для младенцев и детей младшего возраста, пище для специальных медицинских целей и полной замене диеты для контроля веса и отмене Директивы Совета 92/52 / ЕЭС, Директивы Комиссии 96/8 / ЕС, 1999/21 / ЕС, 2006/125 / ЕС и 2006/141 / ЕС, Директива 2009/39 / ЕС Европейского парламента и Совета и Регламент Комиссии (ЕС) № 41 / 2009 и (ЕС) № 953/2009.OJL 181, 29.6.2013, стр. 35–56.
    6. Международный совет умами. http://www.umamiinfo.com/umamidb/.
    7. FoodEx2 (версия 2 Системы классификации и описания пищевых продуктов EFSA для оценки воздействия).https://www.efsa.europa.eu/en/data/data-standardisation.
    8. Всеобъемлющая европейская база данных о потреблении пищевых продуктов EFSA. https://www.efsa.europa.eu/en/food-consuming/comprehensive-database.
    9. Министерство сельского хозяйства США, Служба сельскохозяйственных исследований (2014).Национальная база данных по питательным веществам для стандартной справки, выпуск 26, 2013 г. (обновлено 2 июля 2014 г .; цитировано в 2014 г., с 10 апреля по 6 мая). http://www.ars.usda.gov/ba/bhnrc/ndl.
    10. Beyreuther K, Biesalski HK, rnstrom JD, Grimm P, Hammes WP, Heinemann U, Kempski O, Stehle P, Steinhart H, Walker R: Консенсусное совещание: глутамат натрия — обновленная информация.Eur J Clin Nutr 2007; 61: 304–313.
    11. Теннант Д.Р.: Комплексная европейская модель диетического воздействия (CEDEM) для пищевых добавок. Пищевая добавка Contam Part A Chem Anal Control Expo Risk Assess 2016; 33: 772–781.
    12. Ma W, Heianza Y, Huang T, Wang T, Sun D, ​​Zheng Y, Hu FB, Rexrode KM, Manson JE, Qi L: диетический глутамин, глутамат и смертность: два крупных проспективных исследования у мужчин и женщин в США.Int J Epidemiol 2018; 47: 311–320.
    13. Ивасаки М., Исихара Дж., Такачи Р., Тодорики Х., Ямамото Х., Мияно Х., Ямаджи Т., Цугане С.: Достоверность самостоятельного опроса частоты приема пищи для оценки потребления аминокислот в Японии: сравнение с потреблением за 4 дня взвешивания диетические записи и уровни в плазме.J Epidemiol 2016; 26: 36–44.
    14. ЕС (2008). Регламент (ЕС) № 1333/2008 Европейского парламента и Совета от 16 декабря 2008 г. о пищевых добавках. OJL 354/16, 31.12.2008.
    15. ЕС (2011).Регламент Комиссии (ЕС) № 1129/2011 от 11 ноября 2011 года о внесении поправок в Приложение II к Регламенту (ЕС) № 1333/2008 Европейского парламента и Совета путем создания перечня пищевых добавок Союза. OJL 295/1, 12.11.2011.

    Автор Контакты

    Дэвид Р. Теннант

    Анализ пищевых химикатов

    20 Deneside, East Dean

    East Sussex BN20 0JG (UK)

    Электронная почта drt @ fcra.co.uk


    Подробности статьи / публикации

    Предварительный просмотр первой страницы

    Опубликовано онлайн: 3 декабря 2018 г.
    Дата выпуска: декабрь 2018 г.

    Количество страниц для печати: 8
    Количество рисунков: 1
    Количество столов: 8

    ISSN: 0250-6807 (печатный)
    eISSN: 1421-9697 (онлайн)

    Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/ANM


    Лицензия открытого доступа / Дозировка лекарства / Заявление об ограничении ответственности

    Эта статья находится под международной лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 (CC BY-NC-ND). Использование и распространение в коммерческих целях, а также любое распространение измененных материалов требует письменного разрешения. Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новое и / или редко применяемое лекарство. Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

    Обзор, применение, побочные эффекты, меры предосторожности, взаимодействия, дозировка и отзывы

    Bannai M, Kawai N, Ono K, Nakahara K, Murakami N.Влияние глицина на субъективную дневную работоспособность у здоровых добровольцев с частичным ограничением сна. Фронт Neurol. 2012 18 апреля; 3:61. Просмотреть аннотацию.

    Bannai M, Kawai N. Новая терапевтическая стратегия для аминокислотной медицины: глицин улучшает качество сна. J Pharmacol Sci. 2012; 118 (2): 145-8. Просмотреть аннотацию.

    де Конинг Т.Дж., Дюран М., Дорланд Л. и др. Благоприятные эффекты L-серина и глицина при лечении судорог при дефиците 3-фосфоглицератдегидрогеназы.Ann Neurol 1998; 44: 261-5 .. Просмотреть аннотацию.

    Диас-Флорес М., Крус М., Дюран-Рейес Дж., Мунгиа-Миранда С., Лоза-Родригес Н., Пулидо-Касас Е., Торрес-Рамирес Н., Гаха-Родригес О., Кумате Дж., Байса-Гутман Л.А., Эрнандес- Сааведра Д. Пероральный прием глицина снижает окислительный стресс у пациентов с метаболическим синдромом, улучшая систолическое артериальное давление. Может J Physiol Pharmacol. 2013 Октябрь; 91 (10): 855-60. Просмотреть аннотацию.

    Evins AE, Фитцджеральд С.М., Wine L и др. Плацебо-контролируемое испытание глицина, добавленного к клозапину при шизофрении.Am J Psychiatry 2000; 157: 826-8 .. Просмотреть аннотацию.

    File SE, Fluck E, Fernandes C. Благотворное влияние глицина (биоглицина) на память и внимание у взрослых молодого и среднего возраста. J Clin Psychopharmacol 1999; 19: 506-12. . Просмотреть аннотацию.

    Fries MH, Rinaldo P, Schmidt-Sommerfeld E, et al. Изовалериановая ацидемия: ответ на лейциновую нагрузку после трех недель приема добавок глицина, L-карнитина и комбинированной терапии глицин-карнитином. J Pediatr 1996; 129: 449-52 .. Просмотреть аннотацию.

    Гринвуд Л.М., Леунг С., Мичи П.Т. и др. Влияние глицина на негативность слухового несоответствия при шизофрении. Schizophr Res. 2018; 191: 61-69. Просмотреть аннотацию.

    Гусев Е.И., Скворцова В.И., Дамбинова С.А. и др. Нейропротекторные эффекты глицина в терапии острого ишемического инсульта. Цереброваск Дис 2000; 10: 49-60. Просмотреть аннотацию.

    Харви С.Г., Гибсон-младший, Берк, Калифорния. L-цистеин, глицин и dl-треонин в лечении гипостатических язв на ногах: плацебо-контролируемое исследование.Pharmatherapeutica 1985; 4: 227-30 .. Просмотреть аннотацию.

    Heresco-Levy U, Javitt DC, Ermilov M, et al. Двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное испытание адъювантной терапии глицином для лечения резистентной шизофрении. Br J Psychiatry 1996; 169: 610-7 .. Просмотреть аннотацию.

    Heresco-Levy U, Javitt DC, Ermilov M, et al. Эффективность высоких доз глицина при лечении стойких негативных симптомов шизофрении. Arch Gen Psychiatry 1999; 56: 29-36 .. Просмотреть аннотацию.

    Инагава К., Хираока Т., Кохда Т., Ямадера В., Такахаши М.Субъективное влияние приема глицина перед сном на качество сна. Сон и биологические ритмы. 2006; 4: 75-77.

    Инагава К., Кавай Н., Оно К., Сукегава Е., Цубуку С., Такахаши М. Оценка острых побочных эффектов приема глицина в высоких дозах у людей-добровольцев. Seikatsu Eisei. 2006; 50: 27-32.

    Джавитт, округ Колумбия, Балла А., Сершен Х, Лайта А.Э. Премия за исследования Беннета. Аннулирование фенциклидин-индуцированных эффектов глицином и ингибиторами транспорта глицина. Биол Психиатрия 1999; 45: 668-79.. Просмотреть аннотацию.

    Джавитт Д.К., Зильберман И., Зукин С.Р. и др. Облегчение негативных симптомов при шизофрении глицином. Am J Psychiatry 1994; 151: 1234-6 .. Просмотреть аннотацию.

    Oshima S, Shiiya S, Nakamura Y. Эффекты комбинированного лечения глицином и триптофаном в сыворотке крови у субъектов с легкой гиперурикемией: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное исследование. Питательные вещества 2019; 11 (3). pii: E564. Просмотреть аннотацию.

    Поткин С.Г., Джин И, Банни Б.Г., Коста Дж., Гуласекарам Б.Эффект клозапина и дополнительных высоких доз глицина при резистентной к лечению шизофрении. Am J Psychiatry 1999; 156: 145-7 .. Просмотреть аннотацию.

    Rose ML, Cattley RC, Dunn C, et al. Пищевой глицин предотвращает развитие опухолей печени, вызванных пролифератором пероксисом WY-14,643. Канцерогенез 1999; 20: 2075-81 .. Просмотреть аннотацию.

    Rose ML, Madren J, Bunzendahl H, Thurman RG. Пищевой глицин подавляет рост опухолей меланомы B16 у мышей. Канцерогенез 1999; 20: 793-8.. Просмотреть аннотацию.

    Турман Р.Г., Чжун З., фон Франкенберг М. и др. Профилактика вызванной циклоспорином нефротоксичности с помощью диетического глицина. Трансплантация 1997; 63: 1661-7 .. Просмотреть аннотацию.

    Варгас М.Х., Дель-Разо-Родригес Р., Лопес-Гарсия А. и др. Влияние перорального глицина на клинический, спирометрический и воспалительный статус у субъектов с муковисцидозом: пилотное рандомизированное исследование. BMC Pulm Med. 2017; 17 (1): 206. Просмотреть аннотацию.

    Вудс ЮЗ, Уолш Британская Колумбия, Хокинс К.А., Миллер Т.Дж., Сакса Дж.Р., Д’Суза, округ Колумбия, Перлсон Г.Д., Джавитт, округ Колумбия, МакГлашан, Т.Х., Кристал Дж. Х.Лечение глицином синдрома риска психоза: отчет о двух пилотных исследованиях. Eur Neuropsychopharmacol. 2013 августа; 23 (8): 931-40. Просмотреть аннотацию.

    Ямадера В., Инагава К., Чиба С., Баннаи М., Такахаши М., Накаяма К. Прием глицина улучшает субъективное качество сна у добровольцев, что коррелирует с полисомнографическими изменениями. Сон и биологические ритмы. 2007; 5: 126-131.

    Инь М., Икедзима К., Arteel GE, Seabra V и др. Глицин ускоряет восстановление после повреждения печени, вызванного алкоголем.J Pharmacol Exp Ther 1998; 286: 1014-9 .. Просмотреть аннотацию.

    Чжун З., Arteel GE, Коннор HD и др. Циклоспорин А увеличивает гипоксию и выработку свободных радикалов в почках крыс: профилактика с помощью диетического глицина. Am J Physiol 1998; 275: F595-604 .. Просмотреть аннотацию.

    Роль глутамина в кишечнике и его значение при кишечных заболеваниях

    Abstract

    Глютамин, самая распространенная свободная аминокислота в организме человека, является основным субстратом, используемым клетками кишечника.Сообщалось о роли глутамина в физиологии кишечника и лечении множества кишечных заболеваний. В физиологии кишечника глутамин способствует пролиферации энтероцитов, регулирует белки плотных контактов, подавляет провоспалительные сигнальные пути и защищает клетки от апоптоза и клеточных стрессов в нормальных и патологических состояниях. Поскольку запасы глютамина истощаются во время тяжелого метаболического стресса, включая травмы, сепсис и воспалительные заболевания кишечника, для улучшения клинических исходов у пациентов исследовали добавление глютамина.В этом обзоре мы обсуждаем физиологическую роль глутамина для здоровья кишечника и его основные механизмы. Кроме того, мы обсуждаем текущие доказательства эффективности добавок глутамина при кишечных заболеваниях.

    Ключевые слова: глутамин, функция кишечника, воспалительное заболевание кишечника, синдром короткой кишки, диетотерапия

    1. Введение

    Глутамин — самая распространенная аминокислота в крови человека, скелетных мышцах и пуле свободных аминокислот [1 ].Он играет физиологически важную роль в различных метаболических процессах: как посредник в энергетическом метаболизме и как субстрат для синтеза пептидов и непептидов, таких как нуклеотидные основания, глутатион и нейротрансмиттеры [2,3,4]. Кроме того, глутамин способствует детоксикации аммиака и системного кислотно-щелочного баланса [5]. Участие метаболизма глутамина в иммунных системах [1,6,7] и раковых клетках [8,9,10] было документально подтверждено за последние два десятилетия. Более того, метаболизм глутамина имеет прямое отношение к клинической медицине.Первоначально это было подчеркнуто, когда глутамин, классически незаменимая аминокислота, считался условно незаменимым при определенных катаболических состояниях, таких как травма или сепсис [11]. Теория «условно незаменимого» глутамина во время болезни была основана на наблюдениях, что кишечные, почечные и иммунные клетки утилизируют большое количество глутамина, превышая выработку эндогенного глутамина [12,13], и что уровни глутамина в плазме и мышцах заметно снижаются. эти условия [14].

    Среди различных тканей, использующих глютамин в больших количествах, кишечник использует около 30% общего глютамина [15], что указывает на то, что это ключевое питательное вещество для кишечника. Исследования на здоровых взрослых показали, что три четверти введенного энтерально глутамина всасываются в чревные ткани, а большая часть абсорбированного глутамина метаболизируется в кишечнике [16,17]. Одна четвертая часть глутамина плазмы поглощается тонкой кишкой, когда проходит через орган [18].Сообщалось, что кишечник конкурирует с другими тканями за глутамин из пула аминокислот организма и пищевых источников [19]. Метаболизм глутамина в кишечнике интенсивно изучается. Его функции включают поддержание метаболизма нуклеотидов и функции кишечного барьера, модуляцию воспаления и регулирование стрессовых реакций и апоптоза [20,21,22]. Одновременно с этим эффективность добавок глутамина была протестирована на людях и животных моделях с кишечными заболеваниями [23,24,25].Этот обзор направлен на обсуждение роли глутамина в кишечнике и обобщение текущих данных о клинической эффективности добавок глутамина при кишечных заболеваниях, особенно воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК).

    2. Роль глутамина в кишечнике

    2.1. Целостность ткани

    Просвет кишечника млекопитающих выстлан одним слоем эпителиальных клеток [26]. Поскольку эти клетки обновляются каждые четыре-пять дней, для поддержания гомеостаза требуется постоянно высокий уровень клеточной пролиферации [27].В общем, пролиферация клеток регулируется рядом сигнальных путей и гормонов, таких как факторы роста. Когда пролиферация активируется этими сигналами, кишечные стволовые клетки, находящиеся в криптах, дифференцируются в специализированные типы эпителиальных клеток, включая энтероциты, бокаловидные клетки, клетки Панета и энтероциты, что позволяет поддерживать нормальную целостность кишечной ткани [28].

    Глютамин влияет на ряд сигнальных путей, которые регулируют регуляцию клеточного цикла и пролиферацию.Митоген-активируемые протеинкиназы (MAPK) — это протеинкиназы, которые регулируют ряд клеточных функций, включая пролиферацию и дифференцировку клеток [29]. Rhoads et al. продемонстрировали, что глутамин необходим для пролиферации клеток кишечника путем активации множества MAPK, включая киназы, регулируемые внеклеточными сигналами (ERK1 / 2) и N-концевые киназы c-Jun (JNK1 / 2), в линии клеток слизистой оболочки кишечника крыс, IEC-6. [30] (). Кроме того, глутамин способствует пролиферации кишечных клеток, усиливая эффекты факторов роста, таких как эпидермальный фактор роста (EGF), инсулиноподобный фактор роста-I (IGF-I) и трансформирующий фактор роста-α (TGF-α).Ограничение глутамина в среде для культивирования клеток приводило к нарушению EGF-стимуляции ДНК, РНК, синтеза белка и репликации клеток в клетках IEC-6 [31]. Употребление диеты, обогащенной глутамином, значительно увеличивало IGF-I-опосредованный синтез ДНК и белка на крысиной модели синдрома короткой кишки [32]. В модели ишемии у свиней введение глутамина усиливало действие TGF-α на пролиферацию клеток слизистой оболочки [33].

    Предлагаемые механизмы действия глутамина в клетках кишечника.Глутамин поддерживает целостность кишечной ткани, способствуя пролиферации энтероцитов, активации митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK) (ERK1 / 2, JNK1 / 2), оптимизируя действие факторов роста (эпидермальный фактор роста (EGF), инсулиноподобный фактор роста ( IGF) -I, трансформирующий фактор роста (TGF) -α) и индуцирование экспрессии белков плотного соединения (клаудин-1, клаудин-4, окклюдин, zonula occludens (ZO) -1, ZO-2 и ZO-3 ). Провоспалительные сигнальные пути, такие как ядерный фактор-κB (NF-κB), а также сигнальные преобразователи и активаторы путей транскрипции (STAT) ингибируются глутамином.Глутамин подавляет обширный апоптоз, участвуя в синтезе глутатиона (GSH) и регулируя опосредованную фактором теплового шока (HSF) -1 экспрессию белков теплового шока (HSP). Глутамин снижает стресс эндоплазматического ретикулума (ER) и способствует аутофагии, ингибируя механистическую мишень пути рапамицина (mTOR), тем самым защищая клетки кишечника от стрессовых состояний. Т-столбцы означают ингибирование, а стрелки — стимуляцию.

    Плотные соединения, состоящие из различных белков, герметизируют соседние эпителиальные клетки, создавая физический барьер между эпителиальными и эндотелиальными клетками [34].Плотные стыки — это скорее динамические, чем статические конструкции. Действительно, плотные контакты постоянно модифицируют свои структуры с относительно высокой скоростью оборота, чтобы взаимодействовать с внешними стимулами, с помощью которых они контролируют поступление ионов, питательных веществ и воды [35]. Кроме того, плотные соединения поддерживают целостность кишечника, что предотвращает попадание патогенов и токсинов в просвет кишечника [36]. Существует четыре типа трансмембранных компонентов плотных контактов, включая клаудины, окклюдин, трицеллулин и соединительные адгезионные молекулы [37].В ответ на различные физиологические стимулы и сигнальные пути плотные контакты модулируют транспорт молекул просвета в клетки слизистой оболочки, регулируя их плотность [38]. Эти сигнальные молекулы представляют собой протеинкиназу C, MAPK и киназы легкой цепи миозина (MLCK). Активация протеинкиназы C приводит к усилению регуляции окклюдина, zonula occudens (ZO) -1, ZO-2 и клаудина 1 в первичных эпителиальных клетках человека, что приводит к увеличению трансэпителиального электрического сопротивления [39]. MAPKs м. Напрямую взаимодействовать с C-концевым хвостом окклюдина, который обеспечивает предотвращение вызванного перекисью водорода разрушения плотных контактов [40].Более того, индуцированное КЛЦМ фосфорилирование легкой цепи миозина регулирует проницаемость плотных контактов в клетках Caco-2 [41,42].

    Множество доказательств указывают на то, что глутамин модулирует экспрессию белков плотных контактов. В клеточной линии карциномы толстой кишки человека Caco-2 депривация глутамина заметно снижает экспрессию множественных белков плотных контактов, включая клаудин-1, окклюдин и ZO-1 [43]. Ограничение глутамина в среде для культивирования клеток значительно увеличивает проницаемость эпителиальных клеток в клетках Caco-2, что определяется несколькими методами, включая трансэпителиальное электрическое сопротивление (TER), индикаторные модели с использованием 14 C-маннитола и флуоресцеинизотиоцианат-декстрана [44].Добавление глутамина в клетки, лишенные глутамина, спасало нарушенные барьерные функции. В обработанных метотрексатом клетках Caco-2 добавление глутамина улучшало проницаемость наряду с увеличением экспрессии ZO-1 и окклюдина [45]. Измеряя TER и поток инулина, Seth et al. также сообщили, что добавление глутамина предотвращает вызванное ацетальдегидом разрушение плотных контактов и нарушение параклеточной проницаемости [46]. Поддержание кишечной проницаемости с помощью белков с плотным соединением оказалось полезным для лечения множества патологических состояний кишечника, таких как воспалительное заболевание кишечника и целиакия [47].Эти исследования показывают, что добавление глютамина может быть полезным для людей с нарушенной проницаемостью кишечника за счет увеличения экспрессии белков плотного соединения.

    Механически глутамин, как было показано, влияет на ряд сигнальных путей, которые регулируют экспрессию компонентов плотных контактов [48], хотя большая часть этого процесса все еще остается неясной. В клетках Caco-2 лишение глутамина активировало путь фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) / Akt, что приводило к снижению экспрессии клаудина-1 и TER [49].Напротив, добавка глутамина снижает активацию пути PI3K / Akt, который обращает вспять экспрессию клаудина-1 в клетках, что позволяет предположить, что добавка глутамина регулирует состояние фосфорилирования белков плотного соединения. Интересно, что нормальное образование плотных контактов контролируется фосфорилированием окклюдина и ZO-1 [50,51,52]. Следовательно, опосредованное глутамином поддержание плотных контактов частично опосредуется фосфорилированием белков плотных контактов. Wang et al. показали, что глутамин активировал кальций / кальмодулин-зависимую киназу 2-AMP-активированную передачу сигналов протеинкиназы в энтероцитах тощей кишки свиней [53].Они также сообщили, что глутамин индуцировал экспрессию ZO-1, ZO-2 и ZO-3 и вызывал большее распределение клаудина-1, клаудина-4 и ZO-1 на плазматических мембранах [53]. Докладный и др. сообщили, что вызванная тепловым шоком активация фактора теплового шока-1 (HSF-1) индуцировала ядерную транслокацию HSF-1 и экспрессию окклюзии в клетках Caco-2 [54].

    2.2. Воспалительный путь

    Было показано, что воспаление является причиной кишечных заболеваний, таких как язвенный колит, болезнь Крона и колоректальный рак [55].Поэтому лечение воспаления кишечника важно для борьбы с этими заболеваниями. Несколько линий доказательств указывают на то, что глутамин обладает противовоспалительным свойством, влияя на ряд воспалительных сигнальных путей, включая ядерный фактор κB (NF-κB) и сигнальный преобразователь и активатор путей транскрипции (STAT) [56].

    Фактор транскрипции NF-κB регулирует ряд иммунных ответов [57]. На ранней стадии инфекции он активирует различные гены, чтобы усилить воспалительную реакцию.NF-κB представляет собой мультипротеиновый комплекс, состоящий из пяти членов семейства Rel: p50, p52, p65, RelB и c-Rel. В стационарных условиях NF-κB находится в цитоплазме и остается неактивным с помощью семейства ингибиторов, называемых ингибитором κB (IκB). В ответ на различные внеклеточные стимулы киназа IκB фосфорилирует белки IκB, запуская их деградацию и высвобождение из NF-κB, который, таким образом, становится активным. Активный комплекс NF-κB перемещается в ядро, где он индуцирует экспрессию генов, несущих элементы, связывающие NF-κB, такие как интерлейкин-6 ( Il-6 ) и фактор некроза опухоли α ( Тнф-α ).Во время воспалительного статуса продукция воспалительных цитокинов IL-6 и TNF-α сильно повышается, что стимулирует иммунный ответ, активируя несколько клеток-мишеней, таких как антигенпрезентирующие клетки и Т-клетки, и индуцируя белки острой фазы [58]. Было показано, что глутамин подавляет активацию пути NF-κB. Введение глутамина внутрибрюшинно или через желудочный зонд подавляло активацию NF-κB в моделях колита на грызунах [59,60] и в энтероцитах поросят, обработанных липополисахаридами (LPS) [61].Механически подавление NF-κB глутамином было связано с повышенной экспрессией клеточных белков теплового шока (HSP), таких как HSP25 и HSP70, которые индуцируются HSF-1 [60]. Было показано, что HSF-1-опосредованная реакция теплового шока ингибирует активацию NF-κB и экспрессию NF-κB-зависимых генов. Эта гипотеза была подтверждена заметным увеличением активации NF-κB в эмбриональных фибробластах мышей с нулевым HSF-1 из-за отсутствия экспрессии HSP [62]. Эти исследования предполагают, что противовоспалительный эффект глутамина частично может быть связан с активацией HSF-1 и подавлением экспрессии воспалительных цитокинов, опосредованной NF-κB.Кроме того, глутамин влияет на стабильность IκB. В обработанных LPS клетках Caco-2 лишение глутамина снижает экспрессию IκBα, вызывая повышенное связывание NF-κB с ДНК, а также повышенную экспрессию воспалительного цитокина интерлейкина-8 (IL-8) [63]. В клетках илеоцекальной аденокарциномы человека HCT-8 предварительная обработка глутамином снижала уровень деградации IκBα и продукцию IL-8 во время TNF-α-индуцированного воспаления [64]. В поддержку этих результатов in vitro Kretzmann et al. показали, что прием глутамина в течение семи дней значительно снижает деградацию IκBα, что приводит к подавлению активации NF-κB на модели колита у крыс [65].Поскольку на выработку IL-8, цитокина, который стимулирует миграцию нейтрофилов к участкам воспаления, влияет статус глутамина [63,64], опосредованная глутамином регуляция IL-8 может быть важным событием для борьбы с воспалением кишечника.

    Белки STAT представляют собой факторы транскрипции, которые модулируют иммунную систему, клеточную пролиферацию и развитие [66]. Их роль в регуляции воспаления путем индукции экспрессии цитокинов, включая IL-6, была тщательно изучена [67].На моделях колита у крыс введение глутамина ректальным путем снижает фосфорилирование STAT1 и STAT5, указывая на то, что глутамин влияет на активацию передачи сигналов STAT [65]. В клетках Caco-2, обработанных LPS, истощение глютамина активировало STAT4, тогда как добавление глутамина подавляло экспрессию STAT4 и продукцию IL-8 [68]. Следовательно, противовоспалительному эффекту глутамина может способствовать ингибирование активации STAT и ингибирование экспрессии воспалительных цитокинов, таких как IL-6 и IL-8, в тканях кишечника.

    Оксид азота (NO) синтезируется множеством клеток и модулирует различные клеточные сигнальные пути, включая воспалительные реакции [69]. Во время воспаления кишечника NO может играть дихотомическую роль, поскольку наблюдаются как положительные, так и вредные эффекты NO [70]. Глутамин — важный регулятор синтеза NO [71,72]. Houdijk et al. сообщили, что уровень нитрата всего тела в плазме, стабильного конечного продукта производства NO, был снижен у крыс, получавших диету, обогащенную глутамином [73].Точно так же у крыс с ишемией-реперфузией кишечника диета, обогащенная глутамином, снижает экспрессию в слизистой оболочке индуцибельной NO-синтазы, воспалительного фермента, и снижает концентрацию NO в плазме [74].

    Поскольку устойчивая активация воспалительных сигнальных путей и длительная продукция провоспалительных цитокинов имеют решающее значение для развития и прогрессирования воспалительных заболеваний кишечника, предпринимались попытки подавить выработку медиаторов воспаления для лечения пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника, включая ВЗК [ 75].Таким образом, на основании упомянутых выше исследований in vitro и in vivo, добавление глутамина может быть одним из многообещающих кандидатов для лечения воспалительных заболеваний кишечника путем ингибирования активации NF-κB и STAT и подавления экспрессии воспалительных цитокинов, таких как IL-6, TNF- α и IL-8, а также индуцируемая воспалительным ферментом NO-синтаза.

    2.3. Апоптоз и клеточные стрессы

    Поскольку скорость обновления кишечных эпителиальных клеток составляет от четырех до пяти дней, для этих клеток критически важно поддерживать тонкий баланс между пролиферацией и апоптозом для нормального функционирования [76].Спонтанный апоптоз кишечного эпителия важен для поддержания его нормальной архитектуры [77]. Однако ряд клеточных стрессов, вызванных экзогенными агентами или внутриклеточными стимулами, включая эндотоксемию, недостаток питательных веществ и недостаток фактора роста, могут нарушить баланс между пролиферацией и апоптозом. Этот дисбаланс между пролиферацией и апоптозом вызывает патологические состояния кишечника из-за устойчивой апоптотической гибели клеток [78,79,80,81]. Действительно, потеря эпителиальных клеток при язвенном колите и бактериальной инфекции в основном происходит из-за повышенного апоптоза крипт [82,83].Воспалительные заболевания кишечника, такие как целиакия и нематодные инфекции, тесно связаны с повышенным апоптозом эпителиальных клеток кишечника [84,85]. Несмотря на то, что дифференцированные энтероциты подвергаются апоптозу, который поддерживает нормальную функцию эпителия кишечника, нарушение регуляции апоптоза наблюдается при ряде патологических состояний желудочно-кишечного тракта. Следовательно, крайне важно подавлять апоптоз эпителиальных клеток кишечника для предотвращения патологических состояний кишечника [86].Было показано, что глутамин проявляет антиапоптотические свойства в кишечнике. В эпителиальных клетках кишечника крыс (RIE-1) депривация глутамина приводила к апоптозу [87]. Точно так же добавление глутамина эффективно снижает индуцированный токсином апоптоз в эпителиальных клетках кишечника человека T84 [88] и апоптоз, индуцированный лауратом натрия в клетках RIE-1 [89], что в совокупности предполагает, что глутамин имеет решающее значение для подавления апоптоза.

    Дальнейшие исследования продемонстрировали механизмы, лежащие в основе антиапоптотической способности глутамина.Во-первых, как предшественник глутатиона (GSH), глутамин предотвращает апоптоз, поддерживая нормальный окислительно-восстановительный статус клеток. Наряду с цистеином и глицином глутамат, преобразованный из глутамина, продуцирует GSH, важный клеточный антиоксидант [90]. GSH присутствует в клетке как в восстановленной, так и в окисленной формах (GSSG), а соотношение GSH и GSSG определяет окислительно-восстановительный потенциал клетки. Поскольку истощение GSH вызывает апоптоз из-за чрезмерного окислительного стресса [91], нормальный метаболизм глутамина играет решающую роль в предотвращении апоптоза, обеспечивая глутамат, необходимый для поддержания нормального соотношения GSH / GSSG.

    Во-вторых, глутамин регулирует активацию каспаз. Каспазы — это семейство протеазных ферментов, которые играют важную роль в индукции апоптоза [92]. В основном они присутствуют в виде проферментов, но различные стимулы могут активировать ферменты через расщепление. В клетках RIE-1 клетки, лишенные глутамина, показали значительно более высокую активность каспазы-3 наряду с более высоким уровнем апоптоза [93]. Введение глутамина снижает активность каспазы-3 в энтероцитах новорожденных поросят [61], а также активность каспазы-8 в клетках T84 [88].

    Кроме того, глутамин усиливает экспрессию белков теплового шока (HSP) [94]. Сообщалось, что HSP модулируют апоптотическую гибель клеток, действуя как молекулярный шаперон, позволяя клеткам адаптироваться к стрессовым условиям [95]. У крыс с сепсисом введение глутамина значительно увеличивало экспрессию HSP-70 и HSP-25, возможно, за счет повышенного фосфорилирования фактора теплового шока (HSF) -1 [96]. Повышенная экспрессия HSP за счет добавления глутамина заметно улучшила выживаемость крыс с сепсисом.Ропелески и др. сообщили, что глутамин усиливает опосредованную HSF-1 экспрессию гена Hsp-72 во время теплового шока в клетках кишечника IEC-18 и h5 [97]. Напротив, в условиях дефицита глутамина снижалась экспрессия гена Hsp-72 , что приводило к более высокой активности каспазы-3 и апоптотической гибели клеток.

    Защитный эффект глутамина также объясняется его ролью в модулировании клеточных стрессовых реакций, таких как стресс эндоплазматического ретикулума (ER) и аутофагия.ER — это органелла, отвечающая за синтез, фолдинг и модификацию белка. Ряд патологических состояний, включая ВЗК, нарушает функцию ER, что приводит к стрессу ER [98]. Поскольку обширный стресс ER вызывает устойчивый апоптоз и дальнейшие инсульты, ослабление стресса ER имеет решающее значение для защиты и выживания клеток. У крыс с колитом введение глутамина заметно снижает активацию маркеров стресса ER, таких как глюкозо-чувствительный белок 78, гомологичный белок CCAAT / энхансер-связывающий белок (C / EBP) и каспаза-12 [99].Эти результаты показывают, что добавление глютамина снижает стресс ER и апоптоз. Подтверждая эти наблюдения, обработка глутамином снижает активацию стресса ER в клетках Caco-2, обработанных фармакологическими индукторами стресса ER.

    Аутофагия — это катаболический процесс, активируемый во время ряда состояний метаболического стресса, таких как недостаток питательных веществ [100]. После активации аутофагия разрушает клеточные органеллы и белки, чтобы предоставить их в качестве источника энергии. Было показано, что аутофагия обеспечивает защитный эффект от патологических состояний кишечника. Связанный с аутофагией 16-подобный 1 ( Atg16L1 ), ген, необходимый для функциональной аутофагосомы, вовлечен в болезнь Крона [101,102]. Сайто и др. показали, что мыши, лишенные Atg16L1 , более восприимчивы к индуцированному острому колиту, подтверждая важность аутофагии для подавления воспаления кишечника [103]. Более того, мутация Atg5 и Atg7 , генов, связанных с аутофагией, в кишечном эпителии мышей приводила к увеличению продукции TNF-α и IL-1β после введения LPS [104].Кроме того, клетки Панета, лишенные Atg16L1 , Atg5 или Atg7 , показали нарушение секреции антимикробных белков, которые обеспечивают защиту кишечника от патогенов [105]. Поскольку патогенез ВЗК связан с дисфункцией клеток Панета [106], функциональная аутофагия важна для гомеостаза кишечника и предотвращения воспаления кишечника. Сообщалось, что глутамин увеличивает аутофагию в эпителиальных клетках кишечника. В клетках Caco-2 и IEC-18 Sakiyama et al.сообщили, что обработка глутамином увеличивала количество аутофагосом, а также уровень конъюгатов 3-фосфолипидов легкой цепи ассоциированного с микротрубочками белка, которые являются маркерами активации аутофагии [107]. В результате усиление аутофагии за счет лечения глутамином подавляло апоптоз кишечника в стрессовых условиях. Авторы продемонстрировали, что глутамин регулирует аутофагию, влияя на механистическую мишень передачи сигналов рапамицина (mTOR). Путь mTOR объединяет сигналы от статуса питательных веществ и факторов роста для модуляции множества клеточных процессов, включая аутофагию [108].В соответствии с этим выводом Van Der Vos et al. продемонстрировали, что глутамин синтетаза является мишенью для вилочного бокса O3 (FOXO3), который является фактором транскрипции, активируемым во время аутофагии [109]. FOXO3-опосредованный синтез глутамина приводит к ингибированию mTOR, что способствует активации аутофагии и выживанию клеток.

    3. Клиническое значение для кишечных заболеваний

    Учитывая важность глутамина для поддержания нормальных клеточных функций, как обсуждалось выше, неудивительно, что добавление глутамина было рассмотрено и исследовано в клинических условиях, особенно при заболеваниях, вызывающих нарушение метаболизма глутамина. .У пациентов с острым критическим заболеванием постулируется условный дефицит глутамина. У этих пациентов заметное снижение концентрации глутамина в плазме, возможно, связано с истощением мышц [14]. Что касается кишечных заболеваний, пациенты с болезнью Крона демонстрируют низкие концентрации глутамина в плазме и клетках и сниженную активность глутаминазы слизистых оболочек [110]. Эти наблюдения привели к гипотезе о том, что добавление глютамина улучшит клинические результаты.

    Ряд экспериментов на животных с ВЗК продемонстрировал, что добавки с глутамином способны защищать слизистую кишечника, что повышает возможность использования глутаминовой поддержки у людей. У мышей с колитом, вызванным декстрансульфатом натрия, пероральный прием глутамина (41,7 г / кг рациона; 10 дней) приводил к ослаблению воспалительных реакций толстой кишки [111], а также к увеличению экспрессии интраэпителиальных γδ-Т-клеток тонкого кишечника [112]. У крыс, индуцированных декстрансульфатом натрия, введение глутамина (0.75 г / кг массы тела (МТ) / сут; 7 дней) с помощью перорального желудочного зондирования увеличивало HSP25 и HSP70 и уменьшало кровотечение и диарею [60]. Крысы с колитом, вызванным тринитробензолсульфоновой кислотой, которые получали пищевые добавки с глутамином (20 г / кг или 40 г / кг; 2 недели), показали снижение продукции провоспалительных цитокинов, включая TNF-α и IL-8, бактериальную транслокацию и воспаление. поражения [113]. Прием пероральных добавок глутамина (3% в питьевой воде) улучшил абдоминальное радиационное повреждение слизистой оболочки и уменьшил бактериальную транслокацию в слизистой оболочке кишечника крыс [114].Инъекция глутамина (0,75 г / кг массы тела) мышам с моделью сепсиса улучшала вызванные сепсисом воспалительные реакции за счет модуляции интраэпителиальных лимфоцитов кишечника [115, 116].

    На основе этих положительных результатов на животных моделях были проведены исследования на людях в попытке подтвердить эффективность добавок глютамина в улучшении статуса заболевания. Однако только ограниченное количество исследований пришли к выводу, что добавление глютамина имеет положительный эффект при кишечных заболеваниях.В систематическом обзоре García-de-Lorenzo et al. Было показано, что диеты, обогащенные глутамином, улучшают иммунологические аспекты у пациентов с травмами и уменьшают мукозит у пациентов после химиотерапии [117]. Авторы определили, сколько глутамина необходимо для улучшения клинических результатов: 21 г глутамина в день в течение 28 дней при болезни Крона и 42 г в день в течение 21 дня при синдроме короткой кишки. В рандомизированном контролируемом исследовании Benjamin et al. сообщили, что добавление глутамина (0,5 г / кг массы тела; 2 месяца) у пациентов с болезнью Крона в фазе ремиссии снижает проницаемость и морфологию кишечника [118].

    Однако в ряде исследований не наблюдалось каких-либо улучшений результатов приема глютамина. В недавних рандомизированных и контролируемых исследованиях, названных шотландскими интенсивными исследованиями глутамина или селена (SIGNET), эффекты родительского введения глутамина (от 0,1 до 0,2 г / кг массы тела в день) оценивались у 500 пациентов с критическим заболеванием [119]. Однако исследование SIGNET не показало каких-либо положительных результатов приема глютамина. Совсем недавно в рандомизированном контролируемом исследовании «Снижение смертности из-за окислительного стресса» (REDOXS) изучались добавки глютамина (0.От 6 до 0,8 г / кг МТ / день) у 1223 пациентов в критическом состоянии [120]. Мало того, что добавление глутамина не влияло на частоту органной недостаточности или инфекционных осложнений, но и у пациентов, получавших энтеральное лечение глутамином, наблюдалась тенденция к повышению уровня смертности через 6 месяцев. Точно так же добавление глютамина при кишечных заболеваниях явно не подтверждает эффективность добавок глютамина. Акобенг и др. исследовали эффект обогащенной глутамином полимерной диеты (8 г / день в течение 4 недель) у 18 детей с активной болезнью Крона и не обнаружили никаких изменений в тестируемых параметрах, включая кишечную проницаемость [121].Точно так же не наблюдалось значительного эффекта пероральных добавок глутамина (21 г / день в течение 4 недель) у 14 пациентов с болезнью Крона [122]. В шести исследованиях у пациентов с синдромом короткой кишки изучалось влияние глутаминовой поддержки, но не было обнаружено улучшения суррогатных параметров [123,124,125,126,127,128]. Хотя некоторые исследования показали благоприятные эффекты, клиническая эффективность добавок глутамина при кишечных заболеваниях остается спорным вопросом.

    Alpers et al. указали на ограничения текущих клинических исследований по добавлению глутамина [129], что дало некоторые ключи к разгадке этих противоречивых результатов.Первое, что нужно рассмотреть, — это правда, что люди действительно испытывают дефицит глютамина во время болезней. Теория «условно незаменимого глутамина» все еще остается предсказанием и сомнительна. Поскольку уровни аминокислот, включая глутамин, динамически и постоянно меняются в тканях и плазме, а уровни в плазме не всегда отражают уровни в тканях, сложно определить, является ли глутамин условно незаменимым. Кроме того, снижение концентрации в плазме крови во время критического заболевания не является специфическим для глутамина, но имеет место для большинства аминокислот [129].Парентеральное введение глутамина у пациентов в критическом состоянии не восстановило истощение мышечного глютамина у пациентов, что поднимает вопрос о дефиците глутамина у пациентов [130]. Кроме того, уровень глутамина в плазме у тяжелобольных пациентов не позволяет прогнозировать смертность пациентов [131], предполагая, что статус глутамина в плазме может не коррелировать с тяжестью заболевания. Таким образом, перед прогнозированием клинической эффективности добавок глутамина следует предпринять попытку подтвердить состояние дефицита глутамина при патологических состояниях.

    Различные экспериментальные конструкции могли повлиять на неопределенные результаты клинических исследований. Во-первых, глутамин вводился двумя разными способами: полное питание родителей и энтеральное питание. В целом утверждается, что энтеральное питание более безопасно в течение длительного периода, чем питание родителей, тогда как питание родителей часто считается лучшим для достижения целевой потребности в калориях, особенно у пациентов в критическом состоянии [132]. Способ введения влияет на вклад глутамина [133].Было показано, что у пациентов с острым язвенным колитом полное энтеральное питание является эффективным с точки зрения питания, а также вызывает меньше осложнений по сравнению с энтеральным питанием [134]. Учитывая, что полное парентеральное питание вызывает изменения в морфологии и функции кишечника [135], добавление глутамина через парентеральное питание может вызвать осложнения в кишечнике. Во-вторых, использовались самые разные дозы, время и режим приема добавок. Доза глутамина, использованная в исследованиях, варьировала до 5 раз [121, 122, 136], а период лечения варьировался от 2 дней [124] до 8 недель [128].Поскольку глутамин соединяется с аланином и глицином, комплекс глутамина с аланином и глицином менее подвержен деградации, чем свободный глутамин. Во многих исследованиях использовались дипептиды, содержащие глутамин, что могло повлиять на несоответствие результатов. В-третьих, в исследованиях использовался широкий спектр клинических курсов пациентов. Кратковременное введение глутамина во время фазы обострения может оказать большее влияние на результаты, чем другие фазы. Кроме того, относительно небольшой размер выборки показал большую эффективность приема глутамина у пациентов в критическом состоянии [137,138,139] и у пациентов с ВЗК [117,118].Следовательно, для определения эффективности добавок глутамина при кишечных заболеваниях потребуется хорошо контролируемое клиническое исследование с участием достаточно большого количества людей.

    Аминокислотный метаболизм, функция β-клеток и диабет

    Abstract

    Известно, что определенные аминокислоты быстро и хронически регулируют секрецию инсулина β-клетками поджелудочной железы in vivo и in vitro. Метаболизм митохондрий имеет решающее значение для сочетания распознавания аминокислот и глюкозы с экзоцитозом гранул инсулина.Это иллюстрируется наблюдениями in vitro и in vivo, обсуждаемыми в настоящем обзоре. Митохондрии генерируют АТФ, который является основным связующим звеном в секреции инсулина, и другие факторы сопряжения, которые служат сенсорами для контроля экзоцитотического процесса. Многочисленные исследования были направлены на определение факторов, которые опосредуют ключевой путь амплификации сигнала Ca 2+ при секреции инсулина, стимулированной питательными веществами. Преимущественно эти факторы представляют собой нуклеотиды (АТФ, ГТФ, цАМФ и НАДФН), хотя также были предложены метаболиты, такие как производные длинноцепочечного ацил-КоА и глутамат.Этот сценарий дополнительно подчеркивает важность ключевых ферментов или переносчиков, например глутаматдегидрогеназы, аспартат- и аланинаминотрансферазы, а также малат-аспартатного челнока в контроле секреции инсулина. Кроме того, после хронического воздействия аминокислоты могут влиять на экспрессию генов в β-клетках, что впоследствии изменяет уровни секреции инсулина. Следовательно, аминокислоты могут играть прямую или косвенную (через создание предполагаемых мессенджеров митохондриального происхождения) роль в секреции инсулина.

    Аминокислоты могут в соответствующих условиях усиливать секрецию инсулина первичными островковыми клетками и линиями β-клеток (1–5). In vivo, l-глутамин и l-аланин являются количественно наиболее распространенными аминокислотами в крови и внеклеточных жидкостях, за которыми следуют аминокислоты с разветвленной цепью (6). Однако, в отличие от глюкозы, отдельные аминокислоты не вызывают секрецию инсулина in vitro при добавлении в физиологических концентрациях. Комбинации аминокислот в физиологических концентрациях или высоких концентрациях отдельных аминокислот намного более эффективны.In vivo аминокислоты, полученные из пищевых белков и аминокислоты, высвобождаемые из эпителиальных клеток кишечника, в сочетании с глюкозой стимулируют секрецию инсулина, тем самым приводя к синтезу белка и транспорту аминокислот в тканях-мишенях, таких как скелетные мышцы (7). Эти эффекты возникают независимо от хорошо охарактеризованных эффектов инсулина на транслокацию GLUT4, а также на захват и хранение глюкозы. В периоды голодания или голодания высвобождение аминокислот из скелетных мышц (в первую очередь l-глутамина и l-аланина [8]) может модулировать высвобождение глюкагона из α-клеток поджелудочной железы, что впоследствии может влиять на секрецию инсулина β-клетками.Пищевые аминокислоты могут также стимулировать высвобождение инкретина, например, GLP-1, из L-клеток кишечника (9,10) и, следовательно, стимулировать секрецию инсулина с помощью косвенных механизмов. О положительном эффекте введения двух аминокислот на секрецию инсулина in vivo сообщалось в недавней клинической оценке эффекта лейцина и фенилаланина, вводимых в присутствии гидролизата белка пациентам с диабетом 2 типа и подходящим контрольным субъектам, что привело к трехкратное увеличение секреции инсулина по сравнению с использованием только углеводов (11).Поскольку секреция инсулина in vivo обычно определяется пероральным или внутривенным введением глюкозы, вероятно, что измерения секреции инсулина in vivo занижены по сравнению с возможными при смешанной пищевой нагрузке. Используя инкубацию островков мыши in vitro со специфическими смесями аминокислот в физиологических концентрациях, секреция инсулина сильно стимулировалась (12). Было обнаружено, что четыре аминокислоты особенно важны для стимуляции электрической активности β-клеток, необходимой для секреции инсулина (лейцин, изолейцин, аланин и аргинин).

    Только относительно небольшое количество аминокислот способствует или синергетически увеличивает высвобождение инсулина из β-клеток поджелудочной железы (13,14). Механизмы, с помощью которых аминокислоты усиливают секрецию инсулина, разнообразны. Катионно заряженная аминокислота, l-аргинин, делает это путем прямой деполяризации плазматической мембраны при нейтральном pH, но только в присутствии глюкозы, тогда как другие аминокислоты, которые переносятся совместно с Na + , также могут деполяризовать клеточная мембрана как следствие транспорта Na + и, таким образом, индуцирует секрецию инсулина, активируя потенциалзависимые кальциевые каналы.Метаболизм, приводящий к частичному окислению, например, l-аланина (3), может первоначально увеличивать содержание АТФ в клетках, что приводит к закрытию АТФ-чувствительного канала K + (K ATP ), деполяризации плазматической мембраны. активация потенциал-активируемого канала Ca 2+ , приток Ca 2+ и экзоцитоз инсулина. Могут генерироваться дополнительные митохондриальные сигналы, влияющие на секрецию инсулина (15,16). Сводка потенциальных регуляторных механизмов в отношении секреции инсулина, стимулированной аминокислотами, проиллюстрирована на рис.1.

    ИНСУЛИНОВАЯ СЕКРЕЦИЯ, ВЫЗВАННАЯ НУТРИЕНТАМИ

    In vivo β-клетка постоянно контролирует доступность питательных веществ и метаболический статус и может генерировать соответствующие вторичные сигналы связывания стимула в ответ на самые незначительные изменения концентрации конкретных метаболитов. Это сочетается с регуляторным входом от других сигнальных путей, включая инкретины, полученные из кишечника, сигналы блуждающего нерва и нейропептиды. Β-клетка метаболически отличается от почти всех других типов клеток млекопитающих в нескольких отношениях: 1 ) она может использовать глюкозу в физиологически значимом диапазоне (2–20 ммоль / л), поскольку она экспрессирует комбинацию GLUT2 (высокая К. m переносчик глюкозы) и глюкокиназа, 2 ) низкая лактатдегидрогеназа и активность монокарбоксилатпирувата / переносчика лактата плазматической мембраны и, соответственно, высокая активность митохондриального малат-аспартатного челнока, что обеспечивает митохондриальное окисление НАДН и 3 ) высокая активность как пируватдегидрогеназы, так и пируваткарбоксилазы, что обеспечивает сосуществование как анаплеротического, так и окислительного метаболизма глюкозы / пирувата.Все эти специфические метаболические адаптации направлены на усиление активности цикла митохондриальной трикарбоновой кислоты (ТСА), окислительного фосфорилирования и эффективного производства АТФ. Увеличение соотношения АТФ-АДФ приводит к закрытию канала K ATP , деполяризации плазматической мембраны, открытию активируемых напряжением каналов Ca 2+ , притоку Ca 2+ и, наконец, слиянию инсулинсодержащих гранул с плазматической мембраной (17).

    Метаболизм липидов через образование длинноцепочечных ацил-КоА также может влиять на секрецию инсулина (18).Действительно, теперь признано, что цитрат, экспортируемый из митохондрий в цитозоль, расщепляется цитратлиазой АТФ с образованием оксалоацетата и ацетил-КоА, который впоследствии образует малонил-КоА в реакции, катализируемой ацетил-КоА-карбоксилазой, способствуя синтезу жирных кислот и накопление длинноцепочечных ацил-КоА (19), тем самым усиливая вызываемый Ca 2+ экзоцитоз инсулина (18). Аминокислоты также играют роль модуляторов липидного обмена. Ацетил-КоА-карбоксилаза, ответственная за синтез малонил-КоА, активируется глутамат-чувствительной протеинфосфатазой типа 2А (20), эффект продемонстрирован в островковых β-клетках (21).Ацетил-КоА-карбоксилаза также регулируется фосфорилированием через AMP-киназу, фермент, чувствительный к концентрации аминокислот (22). Недавняя работа в нашей лаборатории (см. Подробности в разделе, посвященном экспрессии генов) продемонстрировала, что добавление 10 ммоль / л l-аланина к линии β-клеток BRIN-BD11 увеличивало экспрессию АТФ-цитратлиазы в 2,0 раза. Цитрат-лиаза АТФ превращает цитрат в ацетил-КоА в цитозоле, обеспечивая, таким образом, ключевую стадию синтеза жирных кислот, ацетил-КоА-карбоксилазу, с субстратом.Кроме того, мы также обнаружили, что добавление 10 ммоль / л 1-глутамина к клеткам BRIN-BD11 усиливает экспрессию ацетил-КоА-карбоксилазы на уровне мРНК и белка (М. Корлесс, А. Кили, Н. М. МакКленаган, П. Р. Флатт, PN, неопубликованные данные), тем самым стимулируя синтез жирных кислот.

    В митохондриальном матриксе Ca 2+ увеличивает активность некоторых дегидрогеназ. Таким образом, повышенное содержание цитозольного Ca 2+ , возникающее во время активации клеток, передается в митохондрии через унипортер Ca 2+ (23).Такому входу Ca 2+ способствует активация дыхательной цепи, например, глюкозой в β-клетке. Следовательно, гиперполяризация митохондриальной мембраны способствует увеличению митохондриального Ca 2+ , дополнительно активируя NADH-генерирующие дегидрогеназы (24). Первичные действия глюкозы опосредуются усилением концентрации АТФ за счет увеличения субстрата цикла ТСА (окислительного и анаплеротического). Образование других аддитивных факторов, происходящих из метаболизма глюкозы, также может стимулироваться повышением митохондриального Ca 2+ (25).

    Аминокислоты могут резко влиять на секрецию инсулина посредством ряда возможных механизмов, включая образование факторов метаболического связывания, деполяризацию плазматической мембраны или усиление функции митохондрий. Эти механизмы подробно обсуждаются позже в этом обзоре, но в первую очередь будут рассмотрены существенные аспекты зависимых от аминокислот эффектов на передачу сигналов, экспрессию генов и метаболизм.

    СИГНАЛЬНАЯ РОЛЬ АМИНОКИСЛОТ

    В настоящее время известно, что некоторые аминокислоты играют важную роль в чувствительности к питательным веществам, вовлекая млекопитающих в сигнальный путь, опосредованный рапамицином (mTOR) (26).mTOR является компонентом сигнального пути, который сочетает стимуляцию рецептора инсулина и доступность питательных веществ с синтезом белка через активацию и фосфорилирование рибосомного белка S6. В самом деле, путь mTOR является важным регулятором размера клеток, который координирует деятельность аппарата роста клеток с уровнями энергии и питательных веществ. Это достигается за счет активации нескольких нижестоящих эффекторов, включая семейство репрессоров трансляции 4E-BP1 (эукариотический фактор инициации, 4E-связывающий белок) и протеинкиназы S6K1 и S6K2 (S6 киназы 1 и 2), которые чувствительны как к mTOR, так и к инсулину. сигнальные пути.В этом отношении лейцин является наиболее эффективной аминокислотой. Активация пути mTOR, вероятно, важна в β-клетке, где передача сигналов mTOR и фактора роста / инсулина, вероятно, будет синергетической, что стимулирует функцию митохондрий, секрецию инсулина и синтез белка (27). Питательные вещества и клеточный метаболизм регулируют эффекторы mTOR, такие как S6K1, посредством взаимодействия с комплексом mTOR. В клетках, растущих в условиях, богатых питательными веществами, активность киназы mTOR высока. В клетках, растущих в условиях бедности питательными веществами, активность киназы mTOR низкая.Неизвестно, как аминокислоты активируют комплекс mTOR, но вполне вероятно, что задействована стимуляция киназы или ингибирование фосфатазы, которые действуют на mTOR в качестве субстрата (26–28).

    Недавние данные подчеркнули важность активности AMPK в регуляции секреции инсулина β-клетками поджелудочной железы (29). Было показано, что аминокислоты являются важными регуляторами активности AMPK, например, наблюдалось заметное снижение активности AMPK при добавлении аминокислот лейцина, глутамина и аргинина (30).Действительно, активность AMPK и секреция инсулина были обратно пропорциональны для исследованных аминокислот. Было высказано предположение, что метаболизируемые аминокислоты регулируют AMPK за счет изменений в цитозольном соотношении АТФ к АМФ и фосфорилирования киназы LBKI, регулятора активности AMPK (30).

    АМИНОКИСЛОТНАЯ ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ В β-КЛЕТКЕ

    У млекопитающих влияние питательных веществ, особенно аминокислот и жирных кислот, на экспрессию генов стало важной областью исследований. Контроль экспрессии генов за счет наличия питательных веществ был хорошо документирован у прокариот и низших эукариот, которые способны регулировать свою метаболическую активность в соответствии с вариациями в питании, изменяя свой паттерн экспрессии генов.Однако механизмы, ответственные за аминокислотный контроль экспрессии генов клеток млекопитающих, были исследованы только недавно. Аминокислоты могут оказывать влияние через mTOR-зависимую стимуляцию синтеза белка и косвенно через экспрессию генов. Аминокислотное голодание может привести к накоплению тРНК, активации транскрипционного фактора и активации нескольких генов, участвующих в синтезе аминокислот (31). Интересно, что супрафизиологические концентрации аминокислот, как было показано, регулируют экспрессию генов в гепатоцитах посредством событий, зависящих от набухания клеток (32).

    Экспрессия генов, связанных с передачей сигнала β-клеток, метаболизмом и апоптозом, хронически регулируется l-аланином. Анализ, проведенный с использованием микроматрицы RGU34A генома крысы Affymetrix, показал, что в общей сложности 66 генов были увеличены в ≥1,8 раза после 24-часового культивирования с l-аланином (33). Эти гены были сгруппированы в соответствии с молекулярной функцией, и повышенная экспрессия некоторых ключевых метаболических генов, включая АТФ-цитратлиазу и каталазу, была подтверждена с помощью ПЦР в реальном времени. L-аланин- и l-глутамин-зависимая регуляция экспрессии генов β-клеток была недавно рассмотрена (34).

    Известно, что l-глутамин специфически регулирует экспрессию гена провоспалительных цитокинов в мононуклеарных клетках иммунной системы, а также специфических функциональных генов в печени, почках, мышцах, лимфоцитах, адипоцитах, фибробластах и ​​опухолевых клетках (35). В контексте работы, описанной здесь, в то время как l-глутамин лишь слабо стимулировал секрецию инсулина клетками BRIN-BD11 при базальной (1,1 ммоль / л) глюкозе (14), аминокислота активно метаболизировалась несколькими различными путями (36).Совсем недавно мы обнаружили, что 10 ммоль / л l-глутамин увеличивал скорость хронической 24-часовой секреции инсулина этой клональной линией β-клеток на 30% по сравнению с 1 ммоль / л глутамина, что было связано с повышенной регуляцией 148 генов по меньшей мере в 1,8 раза и подавление 18 генов (M. Corless, A. Kiely, NH McClenaghan, PR Flatt, PN, неопубликованные данные). Примечательно, что клетки BRIN-BD11 (как и все трансформированные клеточные линии) требовали воздействия l-глутамина в минимальной концентрации 1 ммоль / л, чтобы избежать значительной потери жизнеспособности во время хронического периода культивирования.

    Мы дополнительно наблюдали, что 24-часовое воздействие l-глутамина сильно увеличивало экспрессию мРНК как каталитической, так и регуляторной субъединицы кальциневрина в клетках BRIN-BD11. Кальциневрин, или протеинфосфатаза 2B, представляет собой кальций-связывающий белок, который, как было показано, вносит вклад в механизм индуцированного соматостатином ингибирования экзоцитоза в β-клетках поджелудочной железы мышей (37). Кроме того, теперь понятно, что фактор транскрипции белка связывания элемента ответа цАМФ (CREB) регулирует специфические гены выживания в β-клетке.Транслокация CREB в ядро ​​регулируется специфическим Ca 2+ -зависимым дефосфорилированием преобразователей регулируемого CREB (TORC) кальциневрином (38). Мы также определили значительную глутамин-зависимую активацию PDX-1 и ацетил-КоА-карбоксилазы на уровне мРНК. Повышенное связывание транскрипции PDX-1 было подтверждено анализом сдвига электрофоретической подвижности, а повышенная экспрессия белка ацетил-КоА-карбоксилазы была продемонстрирована вестерн-блоттингом (M. Corless, A. Kiely, N.H. McClenaghan, P.R. Flatt, P.N., неопубликованные данные). Таким образом, глутамин может потребоваться для оптимальной дифференцировки in vivo и in vitro стволовых клеток поджелудочной железы в направлении фенотипа β-клеток и оптимального синтеза липидов.

    Таким образом, в то время как l-аланин и l-глутамин могут резко регулировать секрецию инсулина (как подробно описано ниже), они также играют роль в регулировании экспрессии генов β-клеток, что влияет на способность β-клеток к хронически реагируют на доступность питательных веществ, метаболизм, гормональные стимулы секреции инсулина и регуляторы функциональной целостности.

    РОЛЬ АМИНОКИСЛОТ В НАДН-МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ ШАТТЛАХ И СТИМУЛЯЦИИ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО ОБМЕНА

    В β-клетках поджелудочной железы активность шаттлов НАДН играет важную роль в метаболизме глюкозы. Это является следствием низкой активности лактатдегидрогеназы, приводящей к зависимости β-клеток от шаттлов NADH для регенерации цитозольного NAD + . Транспорт производных гликолиза восстанавливающих эквивалентов из цитозоля в митохондриальный матрикс также приводит к взаимодействию гликолиза с энергетическим метаболизмом митохондрий.Аминокислоты, такие как аспартат и глутамат, играют ключевую роль в таких шаттлах. После переноса в митохондрии электроны, полученные из гликолиза, переносятся в цепь переноса электронов, которая создает электрохимический градиент протонов, управляющий синтезом АТФ. Формирование устойчивого протонного градиента ограничивает производство митохондриальных факторов сцепления.

    В β-клетках НАДН может транспортироваться в митохондриальный матрикс с помощью глицерин-фосфатного или малат-аспартатного челнока (39).Ингибирование малат-аспартатного челнока аминооксицетатом (который действует на реакции трансаминирования и ингибирует цитозольное повторное окисление NADH) ослабляет секреторный ответ на питательные вещества, демонстрируя, таким образом, доминирование этого последнего челнока в β-клетке. Одним из ключевых компонентов шаттла малат-аспартат NADH является митохондриальный переносчик аспартат-глутамат с его двумя Ca 2+ -чувствительными изоформами, цитрином и Aralar1, которые экспрессируются в возбуждающих тканях. Однако Aralar1 является единственной изоформой переносчика аспартата-глутамата, экспрессируемой в β-клетках.Функция этого транспортера в малат-аспартатном челноке проиллюстрирована на рис. 2. Опосредованная аденовирусом сверхэкспрессия Aralar1 в β-клетках INS-1E и островках поджелудочной железы крыс усиливала вызванную глюкозой генерацию NAD (P) H, активность цепи переноса электронов. , образование митохондриального АТФ (40). Было продемонстрировано, что Aralar1 оказывает влияние на секрецию инсулина до цикла TCA (40). Действительно, способность транспортера аспартат-глутамат, по-видимому, ограничивает активность челнока NADH и последующий метаболизм митохондрий.В настоящее время наша лаборатория изучает роль переносчика Aralar1 в метаболизме аминокислот β-клеток и секреции инсулина. Мы продемонстрировали, что в β-клетках INS-1E с избыточной экспрессией Aralar1 добавление l-аланина приводит к увеличению продукции NAD (P) H, активности цепи переноса электронов и секреции инсулина (KB, P. Maechler, PN, неопубликованные данные) .

    МЕХАНИЗМЫ АМИНОКИСЛОТНОЙ СТИМУЛЯЦИИ СЕКРЕЦИИ ИНСУЛИНА

    l-глутамин.

    Глютамин может выделяться рядом клеток и тканей (например, скелетными мышцами и печенью), но синтез и высвобождение глутамина следует рассматривать в контексте потребления глутамина другими клетками и тканями.Действительно, концентрация глутамина в крови является отражением баланса между синтезом, высвобождением и потреблением соответствующими типами клеток. Внезапное изменение этого баланса (например, быстрое расширение и быстрое потребление клетками иммунной системы) должно быть уравновешено усиленным синтезом и высвобождением, например, скелетными мышцами.

    Внутриклеточная концентрация глутамина колеблется от 2 до 20 ммоль / л (в зависимости от типа клеток), тогда как его внеклеточная концентрация составляет в среднем 0.7 ммоль / л (35). Глутамин играет важную роль, стимулируя и поддерживая функцию различных органов и клеток, таких как почки, кишечник, печень, сердце, нейроны, лимфоциты, макрофаги, нейтрофилы, β-клетки поджелудочной железы и белые адипоциты (35). На самом базовом уровне глутамин служит важным топливом для этих клеток и тканей. Высокая скорость поглощения глутамина характерна для быстро делящихся клеток, таких как энтероциты, фибробласты и лимфоциты (35), где глутамин является важным предшественником пептидов и белков, а также аминосахаров, пуринов и пиримидинов, таким образом участвуя в синтезе нуклеотидов и нуклеиновых кислот (35).Метаболизм глутамина дополнительно обеспечивает прекурсоры для синтеза ключевых молекул, таких как глутатион (35). В недавнем исследовании мы сообщили, что и островки крысы, и клетки BRIN-BD11 потребляли l-глутамин с высокой скоростью (4). Островки могут иметь высокую скорость оборота белка даже в базовых условиях, что потребует l-глутамина для синтеза пурина и пиримидина, последующего производства мРНК и, кроме того, синтеза белка. Несмотря на то, что l-глутамин быстро поглощается и метаболизируется островками, он сам по себе не стимулирует секрецию инсулина и не усиливает секрецию инсулина, индуцированную глюкозой (14).Однако он увеличивал индуцированную l-лейцином секрецию инсулина (5). Это действие связывают с активацией глутаматдегидрогеназы (GDH) l-лейцином, что приводит к усиленному проникновению углерода, производного от l-глутамина, в цикл TCA и последующему окислению. Известно, что глюкоза ингибирует глутаминолиз в β-клетках (41), предположительно за счет GTP-зависимого аллостерического ингибирования GDH, что приводит к накоплению l-глутамата и, следовательно, к зависимому от продукта ингибированию глутаминазы, и в результате блокирует лейцин-стимулированный инсулин. секреция (см. рис.3 для подробностей).

    Сообщалось, что l-глутамин превращается в γ-аминомасляную кислоту (ГАМК) в островках (42). Недавнее исследование предложило преобразование глутамина в ГАМК как средство для объяснения парадокса, что один только l-глутамин не стимулирует высвобождение инсулина (43). В последнем исследовании сообщалось, что l-глутамин метаболизируется преимущественно в ГАМК и l-аспартат в островках и что в присутствии l-лейцина наблюдается усиление метаболизма как l-глутамата, так и ГАМК через шунт ГАМК (глутаматдекарбоксилаза, ГАМК). аминотрансфераза и сукцинат-полуальдегиддегидрогеназа).Производство 14 CO 2 из 1- [U- 14 C] глутамина было связано в основном с образованием ГАМК (через глутаматдекарбоксилазу), и предполагалось, что в результате происходит накопление l-аспартата. трансаминирования оксалоацетата, где оксалоацетат продуцируется комбинацией пути шунтирования ГАМК и цикла ТСА. В соответствии с этой схемой не происходит окисления l-глутамина через цикл TCA, и авторы предполагают, что это может объяснить плохую способность индуцировать секрецию инсулина.

    Используя 13 C-меченный глутамин и спектроскопию ядерного магнитного резонанса, мы показали, что основными продуктами метаболизма l- [1,2 13 C] глутамина являются l- [1,2 13 C] глутамат и l-аспартат, меченный в положениях C1 и C4 в β-клетках BRIN-BD11 (39). l-аспартат образуется после входа l-глутамата в цикл TCA. Кроме того, l-глутамат, продуцируемый из глутамина, вступает в цикл γ-глутамила и приводит к увеличению производства глутатиона (36).Доказательств образования ГАМК в условиях наших экспериментов, основанных на ядерном магнитном резонансе, не было. Добавление глюкозы вызывало увеличение концентрации глутамата, но не увеличивало потребление глутамина, что согласуется с предыдущими сообщениями о том, что глюкоза может ингибировать глутаминолиз (36). Используя анализ 13 C-изотопомера анаплеротического потока в клетках INS-1, Cline et al. (44) продемонстрировали, что добавление глутамина увеличивает поток через глутаматдегидрогеназу, но это не коррелирует с секрецией инсулина.

    Недавно была предложена сигнальная роль глутамина в секреции инсулина (45). Используя островки нормальных мышей, авторы использовали потенциальный ингибитор глутаминсинтетазы, метионин сульфоксимин, для исследования роли внутриклеточного глютамина в секреции инсулина. Они сообщили, что в присутствии этого ингибитора инсулин, высвобождающийся в ответ на повышение уровня глюкозы, отменяется и что это ингибирование может быть отменено добавлением l-глутамина или его неметаболизируемого аналога, 6-диазо-5-оксо-l- норлейцин.Однако следует проявлять осторожность при интерпретации результатов этого исследования, поскольку метионинсульфоксимин не является специфическим ингибитором глутаминсинтетазы (46) и действительно ингибирует ряд ферментов, использующих глутамат, включая γ-глутамилцистеинсинтетазу, тем самым блокируя потенциальный метаболизм глюкозы. производное глутамата через γ-глутамиловый цикл. Хотя эта проблема была частично решена путем использования бутионинсульфоксимина (BSO), ингибитора γ-глутамилцистеинсинтетазы, механизмы, участвующие в «передаче сигналов» на основе глутамина, еще предстоит идентифицировать.

    l-глутамат.

    1-глутамат — это аминокислота, наиболее обсуждаемая в отношении стимуляции секреции инсулина и возможных молекулярных механизмов ее действия на стимуляцию секреции. Было высказано предположение, что внутриклеточная генерация l-глутамата участвует в индуцированном питательными веществами взаимодействии стимула и секреции в качестве дополнительного фактора в пути усиления стимулированной глюкозой секреции инсулина (47). Сообщалось, что во время стимуляции глюкозой общий уровень клеточного глутамата увеличивается в островках человека, мыши и крысы, а также в клональных β-клетках (3,47–50), тогда как в других исследованиях изменений не обнаружено (51,52 ).Открытие того, что активация митохондрий в проницаемых β-клетках напрямую стимулирует экзоцитоз инсулина (25), послужило первым шагом к идентификации глутамата как предполагаемого внутриклеточного мессенджера (47,53). Было высказано предположение, что глутамат может транспортироваться в секреторные гранулы, тем самым способствуя Ca 2+ -зависимому экзоцитозу (47,53). Такая модель была подтверждена демонстрацией того, что клональные β-клетки экспрессируют везикулярные транспортеры глутамата и что характеристики транспорта глутамата аналогичны нейрональным транспортерам (54).Другие доказательства в поддержку гипотезы l-глутамата получены из работы с β-клетками, сверхэкспрессирующими l-глутаматдекарбоксилазу (GAD): сверхэкспрессия GAD снижает содержание l-глутамата в INS-1E и островковых β-клетках и снижает секреторные ответы на высокий уровень глюкозы. (48).

    В последние годы роль l-глутамата в секреции инсулина сильно оспаривается (49,52). Увеличение внутриклеточной концентрации l-глутамата при добавлении глюкозы (16,7 ммоль / л) в островки крысы не наблюдалось в ключевом исследовании (52).Инкубация с l-глутамином (10 ммоль / л) увеличивала концентрацию l-глутамата в 10 раз, но не стимулировала высвобождение инсулина, что заставило авторов усомниться в предполагаемой роли l-глутамата. В отдельном исследовании было продемонстрировано, что при инкубации с глюкозой в деполяризованных островках мыши и крысы происходило значительное увеличение концентрации l-глутамата (49). Однако последние авторы выступили против гипотезы глутамата на основе экспериментов с l-глутамином: l-глутамин вызывал увеличение содержания l-глутамата, не влияя на секрецию инсулина.Кроме того, в этом исследовании активация GDH с помощью BCH снижает уровень l-глутамата, но увеличивает секрецию инсулина. Однако добавление l-глутамина в качестве предшественника l-глутамата может привести к насыщающим концентрациям l-глутамата без активации K ATP -зависимого пути и, таким образом, может не привести к увеличению секреции инсулина (50).

    l-аланин.

    l-аланин потребляется с высокой скоростью как в клетках BRIN-BD11, так и в островках крысы (~ 2 и 8 мкмоль / мг белка / 20 мин для клеток и островков BD11, соответственно [4]).Добавление 10 ммоль / л l-аланина к 16,7 ммоль / л глюкозы значительно увеличивало потребление глюкозы в клетках BRIN-BD11 (3), предполагая критическую роль l-аланина в функции β-клеток.

    Ранние исследования показали, что l-аланин поглощается и окисляется ob / ob островками мыши (55). Недавно было показано, что l-аланин оказывает инсулинотропное действие как на линии β-клеток, так и на островки крыс (4,14). Добавление 10 ммоль / л l-аланина в инкубационную среду, содержащую 1.1 ммоль / л d-глюкозы увеличивал секрецию инсулина в 3 и 1,6 раза для клеток и островков BRIN-BD11 соответственно (4). Было высказано предположение, что в клетках RINm5F инсулинотропное действие l-аланина было связано с совместным транспортом с Na + , что привело к деполяризации мембраны, что привело к генерации спайковых потенциалов Ca 2+ и увеличению внутриклеточный Ca 2+ (56). Другие исследования с использованием линии β-клеток поджелудочной железы BRIN-BD11 показали, что l-аланин влияет на индуцированную глюкозой секрецию инсулина за счет электрогенного транспорта Na + (57).Совсем недавно с помощью ядерного магнитного резонанса 13 C было показано, что l-аланин подвергается значительному метаболизму в клетках BRIN-BD11 (3), что приводит к продукции глутамата, аспартата и лактата. Кроме того, было показано, что при использовании олигомицина из респираторного яда метаболизм и окисление аланина важны для его способности стимулировать секрецию инсулина (58).

    В отличие от нашей собственной работы, другие сообщили, что добавление l-аланина не стимулировало секрецию инсулина островковыми клетками крысы.Однако в присутствии 1-лейцина или 2-кетоизокапроата аланин стимулировал секрецию инсулина (59). Кроме того, l-аланин индуцировал увеличение поглощения Ca 2+ и окислялся β-клеткой. Был сделан вывод, что l-аланин может стимулировать секрецию инсулина при определенных условиях доступности питательных веществ и что способ индукции секреции инсулина может быть комбинацией повышенного производства АТФ и совместного транспорта Na + (59).

    l-лейцин.

    Предлагаемые механизмы, с помощью которых l-лейцин стимулирует высвобождение инсулина из β-клеток поджелудочной железы, включают 1 ) усиление митохондриального метаболизма за счет активации GDH и 2 ) повышение продукции АТФ (и последующую K ATP зависимую от каналов деполяризацию мембраны ) путем трансаминирования лейцина в α-кетоизокапроат и последующего вступления в цикл TCA через ацетил-КоА (5,60,61; рис.3). В присутствии высокого уровня глюкозы секреция инсулина, индуцированная лейцином, подавляется (62), поскольку высокий уровень глюкозы подавляет поток через глутаминазу и GDH. В последнее время интерес к метаболизму l-лейцина возобновился в результате наблюдения гиперинсулинизма у пациентов с мутациями в регуляторном сайте GDH (63,64). У больных наблюдается повышенная реакция β-клеток на лейцин и развивается гипогликемия после белковой пищи. Ключевые мутации в ингибирующем аллостерическом сайте GDH (связывание GTP) приводят к потере отрицательной аллостерической регуляции.Хотя одним из предложенных механизмов, посредством которого лейцин индуцирует секрецию инсулина, является превращение лейцина в α-кетоизокапроат, недавний отчет показал, что лейцин и α-кетоизокапроат стимулируют высвобождение инсулина с помощью различных механизмов (65). α-Кетоизокапроат был предложен для стимуляции высвобождения инсулина за счет комбинации механизмов, включая его собственный катаболизм и трансаминирование до лейцина с образованием 2-оксоглутарата (α-кетоглутарата). Однако другие показали, что α-кетокислоты могут напрямую ингибировать активность канала K ATP и, следовательно, стимулировать секрецию инсулина (66).

    Продолжительное культивирование с лейцином привело к увеличению АТФ, цитозольного Ca 2+ и индуцированной глюкозой секреции инсулина в островках крысы (67). Кроме того, хронические периоды культивирования с активацией лейцином АТФ-синтазы и глюкокиназы приводят к предположению, что эта комбинированная повышающая регуляция сенсибилизирует β-клетки к индуцированной глюкозой секреции инсулина (67).

    Лейцин вместе с другими членами аминокислот с разветвленной цепью активирует сигнальный путь mTOR в β-клетках, как описано ранее.Было высказано предположение, что митохондриальные сигналы, генерируемые метаболизмом лейцина, важны для активации митогенного сигнального пути mTOR в чувствительных к инсулину тканях (27).

    l-аргинин.

    Было высказано предположение, что стимуляция высвобождения инсулина l-аргинином включает транспорт катионной аминокислоты в β-клетку, что приводит к деполяризации мембраны (1,68,69). Недавнее подробное исследование согласилось с этим аргументом (70). Было показано, что l-аргинин вызывает повышение внутриклеточной концентрации Ca 2+ в результате его электрогенного транспорта в β-клетку через переносчик аминокислот mCAT2A.Деполяризация плазматической мембраны затем приведет к активации потенциалозависимых кальциевых каналов, увеличению цитозольного Ca 2+ и последующей стимуляции секреции инсулина. Клиническая оценка введенного l-аргинина выявила лишь ограниченные положительные эффекты, возможно, из-за быстрого удаления аминокислоты в эпителиальных клетках кишечника, где она может быстро превращаться в орнитин и цитруллин, а затем экспортироваться в почки (71). или печень, где он может быть преобразован в пролин на экспорт (71).

    С другой стороны, метаболизм l-аргинина в β-клетках может вызывать образование мочевины за счет активности аргиназы или образование оксида азота за счет синтазы оксида азота. Индуцируемая синтаза оксида азота может усиливаться в присутствии провоспалительных цитокинов (72) или действительно определенных жирных кислот (73), и в этих условиях потребление l-аргинина и метаболизм могут оказывать негативное влияние на функцию β-клеток. Хронически повышенный уровень оксида азота снижает секрецию инсулина, возможно, за счет нарушения функции митохондрий и генерации ключевых факторов сопряжения стимул-секреция.Влияние активности аргиназы и выработки мочевины в настоящее время неизвестно. В качестве альтернативы l-аргинин может быть преобразован в l-глутамат и, таким образом, может влиять на секрецию инсулина, как описано выше (50). Однако до сих пор нет исследований, подробно изучающих метаболизм l-аргинина в β-клетках; таким образом, потенциал образования l-глутамата еще предстоит определить.

    Гомоцистеин.

    Повышенные уровни гомоцистеина в плазме были зарегистрированы у субъектов с гиперинсулинемическим ожирением и у субъектов с диабетом 2 типа с ранее существовавшим заболеванием коронарных сосудов (74).В отличие от всех рассмотренных выше аминокислот, гомоцистеин отрицательно влияет на секрецию инсулина β-клетками поджелудочной железы. Недавнее исследование показало, что гомоцистеин ингибирует секцию инсулина из линии клеток BRIN-BD11 (75). В частности, гомоцистеин вызывал значительное и дозозависимое ингибирование секреции инсулина с начальным эффектом при 50 мкмоль / л. Исследования ядерной магнитно-резонансной спектроскопии показали, что гомоцистеин вызывает значительное снижение мечения конечных продуктов, зависимых от цикла TCA, полученных из глюкозы, что впоследствии может влиять на запуск и усиление секреции инсулина.Действие гомоцистеина не ограничивалось глюкозой, но также нарушало секрецию инсулина, стимулированную аминокислотами: острая инкубация с гомоцистеином приводила к зависимому от концентрации ингибированию секреции инсулина, индуцированной аланином, аргинином и α-кетоизокапроновой кислотой. Дальнейшие исследования механизма опосредованного гомоцистеином снижения секреции инсулина должны пролить свет на возможную роль гипергомоцистеинемии в развитии диабета 2 типа.

    ЗАКЛЮЧЕНИЕ

    Метаболизм аминокислот важен для нормальной функции β-клеток поджелудочной железы, как подчеркивается в этом обзоре.Безусловно, ключевые аминокислоты, такие как аланин и глутамин, могут регулировать функцию β-клеток и секрецию инсулина. Механизмы, с помощью которых эти аминокислоты обеспечивают свои регуляторные эффекты, сложны и включают митохондриальный метаболизм. Метаболизм l-глутамина важен для выработки l-глутамата, который может действовать как важный фактор сопряжения стимула и секреции в присутствии глюкозы. Превращение d-глюкозы в l-глутамат может происходить в определенных условиях ограничения глутамина через 2-оксоглутарат в реакции трансаминирования.Скорость метаболизма l-глутамина особенно высока в β-клетках из-за оптимизации функции митохондрий. Таким образом, l-глутамин используется β-клеткой не только для окисления, но и для производства глутатиона. Мы предполагаем, что в условиях, когда стимулируется активация или сверхэкспрессия активности GDH, метаболизм l-глутамина будет способствовать повышению отношения АТФ / АДФ, таким образом инактивируя канал K ATP и деполяризуя плазматическую мембрану, что приводит к внутриклеточной Ca 2+ повышение и секреция инсулина.Глутамат может играть ключевую роль в стимуляции секреции инсулина либо напрямую, либо через метаболизм, либо через свою роль в усилении челночной активности малат-аспартат. Другие аминокислоты, такие как лейцин или аргинин, могут играть роль в усилении секреции инсулина за счет аллостерической активации метаболизма или деполяризации мембраны, или комбинации этих двух возможностей. Хронические эффекты изменений концентрации аминокислот in vivo и in vitro на функцию и целостность β-клеток еще не исследованы подробно, но первоначальные эксперименты указывают на важную роль аланина и глутамина в регуляции метаболизма липидов β-клеток и передачи сигналов. трансдукция.Понимание механизмов, с помощью которых аминокислоты регулируют секрецию инсулина in vivo, может открыть новые места для нацеливания лекарств для терапии диабета 2 типа в будущем.

    РИС. 1.

    Модель регуляции секреции инсулина в β-клетках, стимулированных глюкозой и аминокислотами. Глюкоза уравновешивается через плазматическую мембрану и метаболизируется посредством гликолиза с образованием пирувата (Pyr), который затем метаболизируется в цикле TCA. Метаболизм митохондрий также активируется такими аминокислотами, как аланин, глутамин или глутамат.Цикл TCA генерирует восстанавливающие эквиваленты, которые передаются в цепь переноса электронов, что приводит к образованию АТФ. Повышение уровня АТФ приводит к закрытию каналов К АТФ и деполяризует клеточную мембрану. Это открывает потенциал-зависимые каналы Ca 2+ , увеличивая внутриклеточную концентрацию Ca 2+ ([Ca 2+ ] i ), что запускает экзоцитоз инсулина. Дополнительные метаболические сигналы могут генерироваться промежуточными продуктами цикла TCA, которые «усиливают» начальную Ca 2+ -зависимую стимуляцию экзоцитоза инсулина.

    РИС. 2.

    Шаттл малат-аспартат. Малат-аспартатный челнок является основным механизмом перемещения восстанавливающих эквивалентов в форме НАДН из цитоплазмы в митохондрии. Цитоплазматическая малатдегидрогеназа восстанавливает оксалацетат до малата, окисляя НАДН до НАД + . Затем малат попадает в митохондрии, где обратная реакция осуществляется митохондриальной малатдегидрогеназой. Перемещение митохондриального оксалоацетата в цитоплазму для поддержания этого цикла достигается трансаминированием до аспартата, при этом аминогруппа передается глутаматом.Образующийся 2-оксоглутарат (α-кетоглутарат) покидает митохондрию в цитоплазму.

    РИС. 3.

    Схема, описывающая метаболизм выбранных аминокислот и связанное с ним производство факторов связывания метаболического стимула и секреции, участвующих в высвобождении инсулина. Путь метаболизма глутамина через глутаминазу, GDH и вступление в цикл TCA (глутаминолиз) проиллюстрирован вместе с важными точками взаимодействия аминокислот с метаболизмом глутамина и глюкозы. αKG, α-кетоглутарат; АЛТ, аланинаминотрансфераза; AST, аспартатаминотрансфераза; AT, аминотрансфераза; BCKDH, дегидрогеназа α-кетокислоты с разветвленной цепью; ПК, пируваткарбоксилаза; ПДГ, пируватдегидрогеназа; KIC, α-кетоизокапроновая кислота.

    Благодарности

    Мы благодарим Совет по исследованиям в области здравоохранения Ирландии, Enterprise Ireland и Wellcome Trust за финансирование нашей работы. Мы благодарим профессора Пьера Мехлера из Женевского университета, Швейцария, за предоставление Aralar1, технические консультации и обучение.

    Сноски

    • Эта статья основана на презентации на симпозиуме. Симпозиум и публикация этой статьи стали возможными благодаря неограниченному образовательному гранту Сервье.

      Расходы на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страницы. Поэтому данная статья должна быть помечена как «реклама» в соответствии с 18 U.S.C. Раздел 1734 исключительно для указания этого факта.

      • Принято 11 мая 2006 г.
      • Получено 21 марта 2006 г.
    • ДИАБЕТ

    ССЫЛКИ

    1. Charles S, Henquin эффекты различных аминокислот 45 Ca 2+ перемещается в островки поджелудочной железы крыс.Biochem J214 : 899 –907,1983

    2. Смит П.А., Сакура Х., Коулз Б., Гаммерсон Н., Прокс П., Эшкрофт Ф.М.: Электрогенный транспорт аргинина опосредует связывание стимула и секреции в бета-клетках поджелудочной железы мышей. J Physiol499 : 625 –635,1997

    3. Brennan L, Shine A, Hewage C, Malthouse JP, Brindle KM, McClenaghan NH, Flatt PR, Newsholme P: демонстрация существенного окислительного метаболизма L-аланина и L-аланин-усиленный метаболизм глюкозы в клональной линии бета-клеток поджелудочной железы: метаболизм L-аланина важен для регуляции секреции инсулина.Сахарный диабет51 : 1714 –1721,2002

    4. Dixon G, Nolan J, McClenaghan NH, Flatt PR, Newsholme P: сравнительное исследование потребления аминокислот островковыми клетками крысы и клональной линией бета-клеток BRIN-BD11: функциональные значение L-аланина. J Эндокринол 179 : 447 –454,2003

    5. Sener A, Malaisse WJ: L-лейцин и его неметаболизированный аналог активируют глутаматдегидрогеназу островков поджелудочной железы. Природа288 : 187 –189,1980

    6. Blau N, Duran M, Blaskovics M, Gibson K: In Руководство для врача по лабораторной диагностике метаболических заболеваний.2-е изд. Нью-Йорк, Springer-Verlag, 2003 г. , стр.11 –26

    7. Кимбалл С.Р., Фаррелл П.А., Джефферсон Л.С.: Роль инсулина в трансляционном контроле синтеза белка в скелетных мышцах с помощью аминокислот или упражнений. J Appl Physiol93 : 1168 –1180,2002

    8. Чанг Т.В., Голдберг А.Л.: метаболические судьбы аминокислот и образование глутамина в скелетных мышцах. J Biol Chem235 : 3685 –3693,1978

    9. Reimann F, Williams L, da Silva Xavier G, Rutter GA, Gribble FM: Глютамин сильно стимулирует секрецию глюкагоноподобного пептида-1 из клеток GLUTag.Диабетология47 : 1592 –1601,2004

    10. Gameiro A, Reimann F, Habib AM, O’Malley D, Williams L, Simpson AK, Gribble FM: нейротрансмиттеры глицин и ГАМК стимулируют высвобождение глюкагоноподобного пептида-1 из GLUTag клеточная линия. J Physiol569 : 761 –772,2005

    11. van Loon LJ, Kruijshoop M, Menheere PP, Wagenmakers AJ, Saris WH, Keizer HA: Прием аминокислот значительно усиливает секрецию инсулина у пациентов с длительным диабетом 2 типа.Уход за диабетом26 : 625 –630,2003

    12. Bolea S, Pertusa JA, Martin F, Sanchez-Andres JV, Soria B: Регулирование электрической активности бета-клеток поджелудочной железы и высвобождение инсулина физиологическими концентрациями аминокислот. Пфлюгерс Arch533 : 699 –704,1997

    13. Fajans SS, Floyd JC Jr, Knopf RF, Conn FW: Влияние аминокислот и белков на секрецию инсулина у человека. Последние Prog Horm Res23 : 617 –662,1967

    14. McClenaghan NH, Barnett CR, O’Harte FPM, Flatt PR: Механизмы индуцированной аминокислотами секреции инсулина из линии β-клеток поджелудочной железы BRIN-BD11, чувствительной к глюкозе.J Эндокринол15 : 349 –357,1996

    15. Malaisse-Lagae F, Sener A, Garcia-Morales P, Valverde I, Malaisse WJ: Связь стимул-секреция индуцированного аминокислотами высвобождения инсулина: влияние неметаболизированного аналога лейцина на метаболизм глутамина в островках поджелудочной железы. J Biol Chem257 : 3754 –3758,1982

    16. Maechler P: Митохондрии как проводники метаболических сигналов экзоцитоза инсулина в бета-клетках поджелудочной железы. Cell Mol Life Sci59 : 1803 –1818,2002

    17. Rutter GA: Связь между питательными веществами и секрецией в бета-клетках островков поджелудочной железы: последние достижения.Мол Аспект Мед22 : 247 –284,2001

    18. Deeney JT, Prentki M, Corkey BE: метаболический контроль функции бета-клеток. Semin Cell Dev Biol11 : 267 –275,2000

    19. Haber EP, Procópio J, Carvalho CRO, Carpinelli AR, Newsholme P, Curi R: Новые сведения о модуляции жирными кислотами функции бета-клеток поджелудочной железы. Int Rev Cytol248 : 1 –41,2006

    20. Gaussin V, Hue L, Stalmans W., Bollen M. Активация ацетил-КоА-карбоксилазы печени глутаматом и Mg2 + опосредуется протеинфосфатазой-2A.Биохим J316 : 217 –224,1996

    21. Ковлуру A, Chen HQ, Modrick LM, Stefanelli C: Активация ацетил-КоА-карбоксилазы глутамат- и магний-чувствительной протеинфосфатазой в бета-клетках островков. Диабет50 : 1580 –1587,2001

    22. Xiang X, Saha AK, Wen R, Ruderman NB, Luo Z: активаторы протеинкиназы, активированные AMP, могут подавлять рост клеток рака простаты с помощью множества механизмов. Биохимия Биофиз Рес Коммуна 321 : 161 –167,2004

    23. Дюшен М.Р.: Вклад митохондрий в физиологию животных: от гомеостатического сенсора до передачи сигналов кальция и гибели клеток.J Physiol516 : 1 –17,1999

    24. Kennedy HJ, Pouli AE, Ainscow EK, Jouaville LS, Rizzuto R, Rutter GA: Глюкоза генерирует субплазматические микродомены АТФ в бета-клетках одиночных островков: потенциальная роль стратегически расположенных митохондрий . J Biol Chem274 : 13281 –13291,1999

    25. Maechler P, Kennedy ED, Pozzan T, Wollheim CB: активация митохондрий напрямую запускает экзоцитоз инсулина в проницаемых бета-клетках поджелудочной железы.EMBO J16 : 3833 –3841,1997

    26. McDaniel ML, Marshall CA, Pappan KL, Kwon G: Метаболическая и аутокринная регуляция рапамицина-мишени млекопитающих бета-клетками поджелудочной железы. Сахарный диабет51 : 2877 –2885,2002

    27. Kwon G, Marshall CA, Pappan KL, Remedi MS, McDaniel ML: сигнальные элементы, участвующие в метаболической регуляции mTOR с помощью питательных веществ, инкретинов и факторов роста в островках. Диабет53 (Приложение 3) : S225 –S232,2004

    28. Briaud I, Lingohr MK, Dickson LM, Wrede CE, Rhodes CJ: Дифференциальные механизмы активации Erk-1/2 и p70 (S6K) глюкозой в бета-клетках поджелудочной железы.Диабет52 : 974 –983,2003

    29. da Silva Xavier G, Leclerc I, Varadi A, Tsuboi T., Moule SK, Rutter GA: Роль AMP-активированной протеинкиназы в стимулированной глюкозой секреции инсулина и экспрессии гена препроинсулина. Биохим J371 : 761 –774,2003

    30. Leclerc I, Rutter GA: AMP-активированная протеинкиназа: новый датчик глюкозы бета-клетками? Регулирование аминокислотами и ионами кальция. Диабет53 (Приложение 3) : S67 –S74,2004

    31. Averous J, Bruhat A, Mordier S. Fafournoux P: Последние достижения в понимании аминокислотной регуляции экспрессии генов.J Nutr133 : 2040-е годы –2045S, 2003

    32. Haussinger D: Роль клеточной гидратации в регуляции клеточной функции. Биохим J313 : 697 –710,1996

    33. Cunningham GA, McClenaghan NH, Flatt PR, Newsholme P: L-аланин индуцирует изменения в экспрессии метаболических и сигнальных генов в клональной линии бета-клеток поджелудочной железы крысы и защищает от провоспалительных процессов. цитокин-индуцированный апоптоз. Clin Sci (Лондон) 109 : 447 –455,2005

    34. Ньюсхолм П., Бреннан Л., Руби Б., Мехлер П.: Новое понимание метаболизма аминокислот, функции бета-клеток и диабета.Clin Sci (Лондон) 108 : 185 –194,2005

    35. Curi R, Lagranha CJ, Doi SQ, Sellitti F, Procopio J, Pithon-Curi TC, Corless M, Newsholme P: Молекулярные механизмы действия глутамина. J Cell Physiol204 : 392 –401,2005

    36. Brennan L, Corless M, Hewage C, Malthouse JPG, McClenaghan NH, Flatt PR, Newsholme P: 13 Анализ ЯМР C показывает связь между метаболизмом L-глутамина и D-глюкозой. метаболизм и активность гамма-глутамилового цикла в клональной линии бета-клеток поджелудочной железы.Диабетология46 : 1512 –1521,2003

    37. Renstrom E, Ding WG, Bokvist K, Rorsman P: Индуцированное нейротрансмиттером ингибирование экзоцитоза в секретирующих инсулин бета-клетках путем активации кальциневрина. Нейрон17 : 513 –522,1996

    38. Schuit F, Halban P, Rhodes C: Что такое бета-клетка и как мы можем ее улучшить? Диабетология48 : R93 –R101,2005

    39. Eto K, Tsubamoto Y, Terauchi Y, Sugiyama T, Kishimoto T., Takahashi N, Yamauchi N, Kubota N, Murayama S, Aizawa S, Akanuma Y, Aizawa S, Kasai S, Yazaki Y, Kadowaki T: Роль системы шаттла NADH в индуцированной глюкозой активации митохондриального метаболизма и секреции инсулина.Наука283 : 981 –985,1999

    40. Rubi B, del Arco A, Bartley C, Satrustegui J, Maechler P: член шаттла малат-аспартат NADH Aralar1 определяет метаболическую судьбу глюкозы, митохондриальную активность и секрецию инсулина в бета-клетках. J Biol Chem279 : 55659 –55666,2004

    41. Gao ZY, Li G, Najafi H, Wolf BA, Matschinsky FM: Глюкозная регуляция глутаминолиза и ее роль в секреции инсулина. Диабет48 : 1535 –1542,1999

    42. Smismans A, Schuit F, Pipeleers D: Регулирование нутриентами высвобождения гамма-аминомасляной кислоты из островковых бета-клеток.Диабетология40 : 1411 –1415,1997

    43. Fernandez-Pascual S, Mukala-Nsengu-Tshibangu A, Martin Del Rio R, Tamarit-Rodriguez J: преобразование в ГАМК (гамма-аминомасляная кислота) может снизить емкость L-глутамина. как средство, усиливающее секрецию инсулина. Биохим J379 : 721 –729,2004

    44. Cline GW, LePine RL, Papas KK, Kibbey RG, Shulman GI: 13 Анализ изотопомера C-ЯМР анаплеротических путей в клетках INS-1. J Biol Chem279 : 44370 –44375,2004

    45. Li C, Buettger C, Kwagh J, Matter A, Daikhin Y, Nissim IB, Collins HW, Yudkoff M, Stanley CA, Matschinsky FM: сигнальная роль глутамина в секреции инсулина.J Biol Chem279 : 13393 –13401,2004

    46. Meister A: Обзор метаболизма глутамина. В Глютамин: метаболизм, энзимология и регуляция. Моура Дж., Паласиос Р., ред. Нью-Йорк, Academic Press, 1980 , стр.1 –41

    47. Maechler P, Wollheim CB: Митохондриальный глутамат действует как посредник в индуцированном глюкозой экзоцитозе инсулина. Природа402 : 685 –689,1999

    48. Rubi B, Ishihara H, Hegardt FG, Wollheim CB, Maechler P: GAD65-опосредованное декарбоксилирование глутамата снижает стимулируемую глюкозой секрецию инсулина бета-клетками поджелудочной железы.J Biol Chem276 : 36391 –36396,2001

    49. Bertrand G, Ishiyama N, Nenquin M, Ravier MA, Henquin JC: Повышение содержания глутамата и усиление секреции инсулина в островках поджелудочной железы, стимулированных глюкозой, не связаны между собой. J Biol Chem277 : 32883 –32891,2002

    50. Broca C, Brennan L, Petit P, Newsholme P, Maechler P: Митохондриальный глутамат во взаимодействии между аминокислотами с разветвленной цепью и индуцированной глюкозой секрецией инсулина.FEBS Lett545 : 167 –172,2003

    51. Danielsson A, Hellman B, Idahl LA: Уровни альфа-кетоглутарата и глутамата в стимулированных бета-клетках поджелудочной железы. Horm Metab Res2 : 28 –31,1970

    52. MacDonald MJ, Fahien LA: Глутамат не является посредником в секреции инсулина. J Biol Chem275 : 34025 –34027,2000

    53. Хой М., Махлер П., Ефанов А.М., Волльхейм CB, Берггрен П.О., Громада Дж .: Повышение клеточного уровня глутамата стимулирует экзоцитоз в бета-клетках поджелудочной железы.FEBS Lett531 : 199 –203,2002

    54. Бай Л., Сюй Х., Коллинз Дж. Ф., Гишан Ф. К.: Молекулярный и функциональный анализ нового нейронального переносчика везикулярного глутамата. J Biol Chem276 : 36764 –36769,2001

    55. Hellman B, Sehlin J, Taljedal I: Поглощение аланина, аргинина и лейцина бета-клетками поджелудочной железы млекопитающих. Эндокринология89 : 1432 –1439,1971

    56. Данн М.Дж., Юл Д.И., Галлахер Д.В., Петерсен О.Н.: Влияние аланина на инсулин-секретирующие клетки: патч-кламп и измерения внутриклеточного Ca2 + в отдельных клетках.Биохимия Biophys Acta1055 : 157 –164,1990

    57. McClenaghan NH, Barnett CR, Flatt PR: Котранспорт Na + метаболизируемыми и неметаболизируемыми аминокислотами стимулирует регулируемый глюкозой инсулино-секреторный ответ. Биохимия Биофиз Рес Коммуна 249 : 299 –303,1998

    58. Henquin JC, Meissner HP: цАМФ по-разному влияет на реакцию β-клеток поджелудочной железы мыши на различные аминокислоты. J Physiol381 : 77 –93,1986

    59. Sener A, Malaisse WJ: Связь стимул-секреция индуцированного аминокислотами высвобождения инсулина: инсулинотропное действие L-аланина.Биохим Биофиз Акта 1573 : 100 –104,2002

    60. Gylfe E: Сравнение эффектов лейцинов, неметаболизируемых аналогов лейцина и других средств секреции инсулина на активность глутаматдегидрогеназы. Акта Диабетол Лат13 : 20 –24,1976

    61. Пантен У., Кригштейн Э, Позер В., Шонборн Дж., Хассельблатт А: Влияние L-лейцина и альфа-кетоизокапроновой кислоты на секрецию инсулина и метаболизм изолированных островков поджелудочной железы. FEBS Lett20 : 225 –228,1972

    62. MacDonald MJ, McKenzie DI, Kaysen JH, Walker TM, Moran SM, Fahien LA, Towle HC: глюкоза регулирует индуцированное лейцином высвобождение инсулина и экспрессию кетоацидодегидрогеназы E1 альфа с разветвленной цепью. субъединичный ген в островках поджелудочной железы.J Biol Chem266 : 1335 –1340,1991

    63. Hsu BY, Kelly A, Thornton PS, Greenberg CR, Dilling LA, Stanley CA: Чувствительная к белку и гипогликемия натощак у детей с синдромом гиперинсулинизма / гипераммониемии. J Педиатр138 : 383 –389,2001

    64. Stanley CA, Lieu YK, Hsu BY, Burlina AB, Greenberg CR, Hopwood NJ, Perlman K, Rich BH, Zammarchi E, Poncz M: Гиперинсулинизм и гипераммониемия у младенцев с регуляторными мутациями ген глутаматдегидрогеназы.N Engl J Med338 : 1352 –1357,1998

    65. Gao Z, Young RA, Li G, Najafi H, Buettger C, Sukumvanich SS, Wong RK, Wolf BA, Matschinsky FM: Отличительные особенности определения лейцина и альфа-кетоизокапроата в поджелудочной железе -клетки. Эндокринология144 : 1949 –1957,2003

    66. Heissig H, Urban KA, Hastedt K, Zunkler BJ, Panten U: Механизм высвобождения инсулина α-кетоизокапроатом и родственными анионами α-кетокислот. Мол Фармакол68 : 1097 –1105,2005

    67. Ян Дж., Вонг Р.К., Парк М., Ву Дж., Кук Дж. Р., Йорк Д.А., Дэн С., Маркманн Дж., Наджи А., Вольф Б.А., Гао З: Лейциновая регуляция глюкокиназы и АТФ синтаза сенсибилизирует индуцированную глюкозой секрецию инсулина бета-клетками поджелудочной железы.Диабет55 : 193 –201,2006

    68. Henquin JC, Meissner HP: Влияние аминокислот на мембранный потенциал и потоки 86Rb + в бета-клетках поджелудочной железы. Am J Physiol240 : E245 –E252,1981

    69. Herchuelz A, Lebrun P, Boschero AC, Malaisse WJ: Механизм стимулированного аргинином притока Са2 + в В-клетку поджелудочной железы. Am J Physiol246 : E38 –E43,1984

    70. Sener A, Best LC, Yates AP, Kadiata MM, Olivares E, Louchami K, Jijakli H, Ladriere L, Malaisse WJ: Связь стимул-секреция индуцированного аргинином высвобождения инсулина: сравнение между катионной аминокислотой и ее метиловым эфиром.Эндокринная 13 : 329 –340,2000

    71. Brosnan JT: Межорганный перенос аминокислот и его регуляция. J Nutr133 : 2068S –2072S, 2003

    72. Ortis F, Cardozo AK, Crispim D, Storling J, Mandrup-Poulsen T, Eizirik DL: Цитокин-индуцированная экспрессия проапоптотического гена в инсулин-продуцирующих клетках связана с быстрой, устойчивой и неосцилляторная активация NFκB. Мол Эндокринол20 : 1867 –1879,2006

    73. Dixon G, Nolan J, McClenaghan NH, Flatt PR, Newsholme P: арахидоновая кислота, пальмитиновая кислота и глюкоза важны для модуляции клональной секреции инсулина бета-клетками поджелудочной железы, роста и функционирования честность.Clin Sci106 : 191 –199,2004

    74. Sanchez-Margalet V, Valle M, Ruz FJ, Gascon F, Mateo J, Goberna R: Повышенные уровни общего гомоцистеина в плазме у субъектов с гиперинсулинемическим ожирением. Дж Нутр Биохим13 : 75 –79,2002

    75. Паттерсон С., Флэтт П.Р., Бреннан Л., Ньюсхолм П., МакКленаган Н.Х.: Вредное действие фактора риска метаболического синдрома, гомоцистеина, на метаболизм β-клеток поджелудочной железы и секрецию инсулина. J Эндокринол 189 : 301 –310,2006

    Границы | Инъекция декарбоксилазы глутаминовой кислоты в лимфатические узлы: функция бета-клеток и иммунные ответы у недавно начавшихся пациентов с диабетом 1 типа

    Введение

    Подкожное введение декарбоксилазы глутаминовой кислоты (GAD) 65 , приготовленное с сохранением остатков гидроксида алюминия (GAD-квасцы) секреция у детей и подростков с недавно начавшимся диабетом 1 типа (СД1) (1), но такое лечение не показало эффективности в последующих исследованиях фазы II (2) и фазы III (3).Однако метаанализ показал, что лечение, скорее всего, имеет положительный эффект (4). Неоднородность СД1 делает маловероятным, что один агент или тип лечения будут эффективны для всех пациентов. Следовательно, нам нужно больше знаний, чтобы адаптировать стратегии лечения и выбрать подходящих участников для интервенционных исследований СД1. Небольшие пилотные исследования могут быть полезны для получения информации перед проведением крупных испытаний (5, 6).

    В попытке сделать презентацию антигена GAD 65 более эффективной, GAD-квасцы были введены в лимфатические узлы шести молодым людям с T1D в открытом клиническом исследовании.Витамин D per os был добавлен в качестве поддержки (7). Лечение было безопасным, и сохранение С-пептида через 6 месяцев оказалось многообещающим (8). Таким образом, инклюзия была увеличена, в том числе и детей. Насколько нам известно, это первое клиническое испытание, когда аутоантиген вводится непосредственно в лимфатические узлы. Выводы пилотного исследования, проводимого впервые с участием людей, следует интерпретировать с осторожностью. Здесь мы даем предварительный отчет о клиническом эффекте в отношении иммунного ответа через 15 месяцев.

    Материалы и методы

    Дизайн исследования и участники

    Антиген GAD в лимфатических узлах (DIAGNODE-1) — это одноцентровое открытое пилотное клиническое исследование.Были обследованы пациенты в возрасте от 12 до 24 лет с диагнозом СД1 в соответствии с критериями Американской диабетической ассоциации и продолжительностью менее 180 дней. Двенадцать детей и молодых людей (4 женщины, 8 мужчин; 12 · 6–23 · 1 лет) (дополнительный рисунок 1) соответствовали критериям, если C-пептид натощак был ≥ 0,12 нмоль / л (0,36 нг / мл). и GAD 65 уровни антител (GADA)> 63 · 2 U (предел обнаружения на уровне 95 -го процентиля), но <50 000 U. Полные критерии приемлемости подробно описаны в протоколе исследования.Документы протокола и согласия были одобрены соответствующими независимыми комитетами по этике. Все пациенты и лица, ухаживающие за детьми, дали свое устное и письменное информированное согласие. Исследование было одобрено Комитетом по этике исследований Университета Линчёпинга, Швеция (Dnr 2014 / 153-31), и Агентством медицинских продуктов, Упсала, Швеция.

    Полный набор анализов (намерение лечиться) для исследования DIAGNODE-1 был определен как популяция пациентов, получивших хотя бы одну инъекцию GAD-квасцов (Diamyd ® ), принявших участие в базовом визите и по крайней мере, завершил один контрольный визит.Контрольная группа была выбрана из исследования TN08 (2), оценивающего Diamyd ® и плацебо, с пациентами в возрастном диапазоне 12-24 лет, получавшими плацебо, завершившими исходный уровень и, по крайней мере, одним контрольным визитом (дополнительная таблица 1).

    Процедуры

    Каждому пациенту была сделана первичная инъекция по 4 мкг GAD-квасцов (Diamyd Medical, Стокгольм) в паховый лимфатический узел с помощью ультразвукового метода, а затем две повторные инъекции с интервалом в один месяц.Они также получали витамин D (кальциферол) в пероральном растворе (2000 Ед / день) в течение 4 месяцев, начиная с 1 месяца до первой инъекции GAD-квасцов. Все пациенты получали интенсивное лечение диабета в соответствии со шведскими рекомендациями. Их оценивали на исходном уровне, через 6 месяцев и 15 месяцев с помощью клинического осмотра, образцов крови и теста на переносимость смешанного питания (MMTT) (9). Поскольку это было пилотное испытание, не было единой указанной первичной конечной точки, но были предварительно определены следующие параметры:

    ● Изменение С-пептида и С-пептида натощак (значение 90 мин и среднее значение AUC 0-120 мин ) во время MMTT от исходного уровня до 6 и 15 месяцев.

    ● Изменение уровня гликированного гемоглобина (HbA1c) по сравнению с исходным уровнем.

    ● Изменение дозы экзогенного инсулина (на кг массы тела за 24 часа) по сравнению с исходным уровнем.

    ● Иммуномодулирующий эффект лечения с особым акцентом на GAD-индуцированные Т-клеточные ответы, секрецию цитокинов и распределение подклассов GADA.

    Лабораторные испытания

    Лабораторные анализы были выполнены в Университете Линчёпинга, Швеция. Образцы крови и сыворотки были собраны на исходном уровне и через 1, 2, 3, 6 и 15 месяцев.Образцы отбирали в утренние часы, и мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) выделяли в течение 24 часов с использованием Leuosisp (Greiner Bio One) в соответствии с инструкциями производителя.

    С-пептид в сыворотке определяли с использованием твердофазного двухстороннего иммуноферментного анализа (Меркодиа, Упсала), и результаты были подтверждены с включением контрольного антигена диабета человека (низкий / высокий) (Меркодиа, Упсала, Швеция). Различия между анализами и внутри анализов составили 7% и 4% соответственно.

    Сывороточные антитела и подклассы IgG

    Титры сывороточных аутоантител к GAD (GADA) оценивали в двух экземплярах с помощью анализа радиоактивного связывания с использованием 35 S-меченного рекомбинантного человеческого GAD 65 (rhGAD 65 ), как ранее описано (10).

    GADA подклассов IgG 1, 2, 3 и 4 измеряли с помощью анализов радиоактивного связывания (11) с использованием меченных биотином мышиных моноклональных антител против человека, специфичных к подклассу IgG, связанных на высокоэффективных гранулах стрептавидин-сефарозы (GE Healthcare Life Sciences, Фрайбург, Германия) (12). Результаты выражали в виде дельта импульсов в минуту (количество импульсов в минуту, специфичных для подкласса IgG — импульсов в минуту против IgM крысы) и конвертировали в произвольные единицы (AU), пропорциональные дельте импульсов в минуту, специфичной для подкласса GADA IgG, местной стандартной сыворотки.

    Анализ пролиферации лимфоцитов

    Пролиферативные ответы анализировали в PBMC в присутствии 5 мкг / мл rhGAD 65 (Diamyd Medical, Стокгольм, Швеция), шариков CD3 / CD28 (Gibco, Life Technologies AS, Осло, Норвегия), или только в среде.Индекс стимуляции (SI) рассчитывали как среднее значение трех повторов в присутствии стимула, деленное на среднее значение трех повторов с одной средой.

    Анализ секреции цитокинов

    PBMC культивировали в течение 7 дней с 5 мкг / мл rhGAD 65 (Diamyd Medical, Стокгольм, Швеция) или в среде (AIM-V с β-меркаптоэтанолом) при 37 ° C в 5% CO. 2 , как описано ранее (13). Цитокины ИЛ-2, ИЛ-5, ИЛ-10, ИЛ-13, ИЛ-17, фактор некроза опухоли (TNF-α) и интерферон (IFN-γ) измеряли в клеточных супернатантах с использованием Bio-Plex Pro Cytokine Panel. (Bio-Rad, Геркулес, Калифорния, США).Данные собирали с использованием Luminex 200 ™ (Luminex xMAP ™ Corporation, Остин, Техас, США). Индуцированную антигеном секрецию рассчитывали путем вычитания спонтанной секреции (т.е. секреции из PBMC, культивированных только в среде) из секреции после стимуляции GAD 65 .

    Проточная цитометрия

    После промывки в PBS, содержащем 0,1% BSA, PBMC окрашивали анти-CD3, конъюгированными с Alexa-700 (BD Biosciences Cat # 557943, RRID: AB_396952), анти-CD4, конъюгированными с Pacific Blue (BD Biosciences Cat # 558116, RRID: AB_397037), конъюгированные с аллофикоцианином (APC) -H7 анти-CD8 (BD Biosciences Cat # 560179, RRID: AB_1645481), PerCP-Cy5 · 5-конъюгированные анти-CD45RA (BD Biosciences, Cat # 5634 RRID: AB_2738199), конъюгированный с фикоэритрином (PE) анти-CCR7 (BioLegend Cat # 353203, RRID: AB_10

    1), FITC-конъюгированный анти-CD127 (Thermo Fisher Scientific Cat # 11-1278-42, RRID: AB_12) и RRID: AB_12. -Cy7-конъюгированные анти-CD25 (Thermo Fisher Scientific Cat # A15857, RRID: AB_2534627).Затем клетки фиксировали и повышали проницаемость с использованием набора буферов для окрашивания FOXP3 (Thermo Fisher Scientific Cat # 00-5523-00) в соответствии с инструкциями производителя. Затем клетки окрашивали APC-конъюгированным анти-FOXP3 (Thermo Fisher Scientific Cat # 17-4776-41, RRID: AB_1603281) и собирали на FACS Aria III (BD Biosciences) с использованием программного обеспечения FACS Diva v8 (Becton Dickinson). Данные были проанализированы с использованием Kaluza v1 · 3 (Beckman Coulter).

    Статистический анализ

    Парный t-критерий применялся для расчета разницы в дозах С-пептида и стимулированного С-пептида, гликозилированного гемоглобина и инсулина внутри группы.Для оценки значимых различий между группами использовался t-критерий Велча. Поскольку иммунологические данные не соответствовали нормальному распределению, был применен тест Вилкоксона для анализа различий внутри групп. Для расчета значимых различий между группами использовался критерий Манна-Уитни. Для корреляций применялся ранговый коэффициент Спирмена. Уровень вероятности <0,05 считался статистически значимым. Расчеты были выполнены с использованием GraphPad Prism 8 · 0 · 1 для Windows (GraphPad Software, Ла-Хойя, Калифорния, США).

    Результаты

    Клинический ответ через 15 месяцев

    Лечение было легким и переносимым, без побочных эффектов, связанных с лечением, за исключением легкой временной реакции в месте инъекции у нескольких пациентов. С-пептид натощак оставался стабильным через 15 месяцев. Стимулированный С-пептид, измеренный как площадь под кривой (AUC), не показал изменений через 6 месяцев (средняя AUC 98%), но снизился через 15 месяцев по сравнению с исходным уровнем (до 81%). Доза инсулина не изменилась по сравнению с исходным уровнем до 15 месяцев, в то время как HbA1c снизился (рис. 1A).Доза C-пептида, HbA1c и инсулина натощак и стимуляция сравнивалась с данными пациентов, получавших плацебо подкожно, в другом исследовании GAD-alum (2). Некоторые точки для образцов различались между исследованиями, поэтому данные через 15 месяцев для группы лимфатических узлов сравнивали с результатами через 12 и 18 месяцев из контрольной группы. Мы наблюдали меньшее снижение потребления С-пептида натощак и стимулирования, а также более низкую дозу инсулина и HbA1c через 15 месяцев у пациентов с DIAGNODE-1 по сравнению с 12 и 18 месяцами в контрольной группе (Рисунок 1B).Индивидуальные данные показаны в дополнительной таблице 2.

    Рисунок 1 Клинический ответ от исходного уровня (день 1) до 15 месяцев. (A) Среднее значение С-пептида натощак и стимулированного С-пептида (нмоль / л), HbA1c (ммоль / моль) и доза инсулина (Ед / кг массы тела / 24 ч) у пациентов, получавших инъекции GAD-квасцов в лимфатические сосуды. узел (n = 12) с течением времени. (B) Пациентов, получавших инъекции GAD-квасцов в лимфатический узел (n = 12, синие кружки), сравнивали с группой пациентов того же возраста, которые получали плацебо в другом исследовании, где GAD-квасцы вводились подкожно (n = 26, оранжевые кружки).Средние процентные доли дозы стимулированного С-пептида, HbA1c и инсулина натощак сравнивали между группами через 3 и 6 месяцев, а данные за 15 месяцев из группы лимфатических узлов сравнивали с результатами через 12 и 18 месяцев из группы плацебо. группа. (C) Среднее значение IDAAC у пациентов, получавших инъекции GAD-квасцов в лимфатический узел (n = 12, синие кружки) и плацебо (n = 26, оранжевые кружки) (слева). Процент пациентов с частичной ремиссией, определяемой как IDAAC <9 (справа). (D) Средние процентные значения C-пептида натощак и стимулированного C-пептида (AUC) и дозы инсулина у пациентов, разделенных на пациентов с хорошим ответом (GR, n = 9, потеря AUC <30%, темно-синие квадраты) и пациентов с плохим ответом (PR, n = 3, самый низкий квартиль, потеря ≥ 30% AUC, голубые квадраты) в соответствии с сохранением С-пептида через 15 месяцев.Планки погрешностей указывают 95% доверительный интервал. Различия между моментами времени определяли с помощью парного t-теста. Для расчета различий между группами применялся t-критерий Велча.

    Определение частичной ремиссии как IDAAC <9 (14) показало, что 7/12 (58%) пациентов с DIAGNODE-1 имели IDAAC <9 на исходном уровне; 11/12 (91%) в 15 месяцев. Напротив, частичная ремиссия снизилась в контрольной группе с течением времени с 18/26 (69%) на исходном уровне до 10/24 (41%) и 5/20 (25%) через 12 и 18 месяцев соответственно (рис. 1C).

    Пациенты были затем разделены в соответствии с сохранностью их С-пептида через 15 месяцев на хороших респондеров (GR, n = 9, отсутствие потери C-пептида натощак и потеря AUC C-пептида <30%) и плохих респондеров (PR, n = 3, уменьшение C-пептида натощак и потеря AUC C-пептида ≥ 30%) (дополнительная таблица 2). Индивидуумы GR имели лучшее сохранение стимулированного C-пептида (рис. 1D, дополнительная таблица 2), а их C-пептид натощак оставался стабильным на протяжении всего исследования и был выше, чем в PR через 15 месяцев (рис. 1D).Потребность в инсулине через 15 месяцев была на 19% ниже в группе GR, чем на исходном уровне, в то время как потребность в инсулине увеличилась на 79% у пациентов с PR (рис. 1D).

    Иммунный ответ через 15 месяцев

    Через 15 месяцев наблюдалось 52-кратное изменение уровней GADA по сравнению с исходными титрами (рис. 2A). Анализ продольных изменений подклассов GADA IgG 1-4 показал, что уровни IgG1 и IgG3 увеличились после первой инъекции и еще больше усилились после второй инъекции без изменений после третьей дозы, в то время как IgG2 и IgG4 увеличились после второй инъекции, и были усилены третьей дозой (рис. 2В).

    Рисунок 2 Иммунный ответ от исходного уровня (день 1) до 15 месяцев у пациентов (n = 12), которым вводили GAD-квасцы в лимфатический узел. (A) Средние значения и кратное изменение титров GADA (Ед / мл). (B) Медианные уровни подклассов IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 GADA показаны в виде произвольных единиц (AU). Планки погрешностей указывают межквартильный диапазон. (C) Относительное распределение подкласса GADA IgG на исходном уровне (день 1), через 3, 6 и 15 месяцев. Частоты каждого подкласса были рассчитаны относительно объединенной суммы AU четырех подклассов в каждой выборке. (D) Секреция и пролиферация цитокинов, индуцированная GAD 65 при стимуляции in vitro PMBC. Уровни цитокинов IL-2, IL-5, IL-10, IL-13, IL-17, IFN-γ и TNF-α, обнаруженные Luminex в супернатантах PBMC после 7 дней культивирования в среде отдельно или в присутствии GAD 65 (5 мкг / мл). Уровни секреции цитокинов, индуцированной GAD 65 , даны после вычитания спонтанной секреции у каждого индивидуума и выражены в пг / мл. Пролиферативные ответы на GAD 65 в PBMC, культивированных в течение 3 дней с GAD 65 (5 мкг / мл), CD3 / CD28 шариками или средой, после чего клетки обрабатывали [ 3 H] тимидином и собирали.Пролиферация выражается в виде индекса стимуляции (SI) и рассчитывается как среднее значение трех повторов в присутствии стимула, деленное на среднее значение трех повторов с одной средой. Горизонтальные линии представляют собой медианное значение. Различия внутри одной группы рассчитывались с использованием парного критерия Вилкоксона.

    Распределение подклассов IgG, рассчитанное как частота каждого подкласса по отношению к объединенной сумме AU всех подклассов в каждом образце, показало снижение доли IgG1 и заметное увеличение IgG2, IgG3 и IgG4 через 15 месяцев ( Рисунок 2C), что соответствует предыдущим результатам через 6 месяцев (12).

    Две первые инъекции GAD-квасцов индуцировали секрецию IL-17 и TNF-α. Третья доза дополнительно увеличила уровень IL-2, IL-5, IL-13, IFN-γ, в то время как IL-10 был впервые обнаружен через 15 месяцев и значительно увеличился по сравнению с исходными уровнями (рис. 2D). Индуцированная GAD 65 пролиферация была значительно усилена второй инъекцией, но третья доза снизила пролиферацию Т-клеток, которая не определялась почти у всех пациентов через 15 месяцев (рис. 2D).

    Процент T-клеток CD4 + и CD8 + , индуцированных GAD 65 , не изменялся в ходе исследования.Добавление маркеров активации CD25 и CD127 показало, что стимуляция GAD 65- в основном индуцировала активированные Т-клетки CD8 + в исходных образцах (рис. 3A), и что доля этих клеток значительно снизилась через 15 месяцев (рис. 3A). Дифференцировку Т-клеток определяли в соответствии с уровнем экспрессии CD45RA и CCR7 как наивном (T N , CD45RA + CCR7 + ), центральной памяти (T CM , CD45RA CCR7 + ) и клетки эффекторной памяти (T EM , CD45RA CCR7 и CD45RA + CCR7 ).Более высокая доля T EM , чем T CM , как на CD4 + , так и на CD8 + Т-клетках, наблюдалась на исходном уровне (соотношение EM / CM 1 · 4 и 24 · 5, соответственно, Рисунок 3B). Мы обнаружили снижение фракции T CM от исходного уровня до 15 месяцев параллельно с увеличением T EM (соотношение EM / CM 3 · 26 и 32 · 5) (рис. 3B).

    Фигура 3 Эффект внутрилимфатической инъекции GAD-квасцов (n = 12) на Т-клетки и клетки с регуляторным фенотипом. (A) Средний процент активированных (CD25 + CD127 + ) CD4 + (синие треугольники) и CD8 + (оранжевые кружки) Т-клеток после стимуляции GAD 65 (5 мкг / мл ). (B) Стратегия стробирования для наивных (T N , CD45RA + CCR7 + , серые кружки), центральная память (T CM , CD45RA CCR7 + , оранжевые квадраты) и клетки эффекторной памяти (T EM , CD45RA CCR7 и CD45RA + CCR7 , синие треугольники) и средний процент в пределах CD4 + (вверх) и CD8 + (вниз) Т-клетки. (C) Типичный точечный график, показывающий экспрессию FOXP3 и CD25 на Т-клетках CD4 + и средний процент регуляторных Т-клеток в Т-клетках CD4 + . (D) Стратегия гейтирования и средний процент для не супрессивных (nsTreg, CD45RA FOXP3 низкий , синие кружки), покоя (rTreg, CD45RA + FOXP3 низкий , серые квадраты) и активированного ( aTreg, CD45RA FOXP3 high , оранжевые треугольники) регуляторные Т-клетки.Столбцы указывают межквартильный размах. Различия между временными точками внутри одной и той же группы рассчитывались с использованием парного критерия Вилкоксона.

    Процент клеток с фенотипом Treg (CD4 + FOXP3 + CD25 высокий CD127 низкий / — ) в нестимулированных PBMC был немного изменен, но не увеличился значительно (от 5% до 6%, рисунок 3С). Дальнейший анализ Treg, основанный на экспрессии FOXP3 и CD45RA, не выявил изменений в активированном пуле эффекторов (FOXP3 высокий CD45RA ).Тем не менее, наблюдалось прогрессивное приращение не супрессивных клеток (FOXP3 низкий, CD45RA ) и снижение фракции покоя (FOXP3 низкий + CD45RA + ), но не статистически значимое (Рисунок 3D) . Стимуляция образцов GAD 65 не выявила изменений ни в одной из субпопуляций Treg.

    Биомаркеры клинического результата

    Стратификация пациентов по GR и PR показала, что исходные уровни GAD 65 -индуцированных IL-2, IL-10, IFN-γ и TNF-α были выше у пациентов с PR (рис. 4А).GAD 65 -стимуляция также индуцировала CD4 + Т-клетки с более высоким соотношением T EM / T CM у PR (1 73), чем у GR (0 68) пациентов. Кроме того, активация CD4 + и CD8 + Т-клеток казалась более выраженной в образцах PR (средний% активированных клеток, CD4 + : 0,17 против 0,46 и CD8 + : 1 · 33 против 2 · 37) (Рисунок 4A).

    Рисунок 4 Иммунные ответы в зависимости от клинического исхода. Пациенты были разделены на хороших респондеров (GR, n = 9, потеря AUC <30%, синие столбцы или квадраты) и плохих респондеров (PR, n = 3, самый низкий квартиль, потеря ≥ 30% AUC, голубые столбцы или квадраты) в соответствии с их сохранностью С-пептида через 15 месяцев. (A) Медиана исходных уровней GAD 65 -индуцированных цитокинов IL-2, IL-10, IFN-γ и TNF-α, обнаруженных с помощью Luminex в супернатантах PBMC после 7 дней культивирования в присутствии среды или GAD 65 (5 мкг / мл). Уровни секреции цитокинов, индуцированной GAD 65 , даны после вычитания спонтанной секреции у каждого индивидуума (пг / мл). Процент центральной памяти CD4 + (T CM , CD45RA CCR7 + ) и эффекторной памяти (T EM , CD45RA CCR7 и CD45RA + — CCR7 ) Т-клетки, соотношение T EM / T CM и GAD 65 -индуцированные активированные CD8 + Т-клетки.Столбцы указывают межквартильный размах. (B) Медианные значения титров GADA и относительное распределение подклассов GADA IgG. Частоты каждого подкласса были рассчитаны относительно объединенной суммы AU четырех подклассов в каждой выборке. (C) Медианы уровней GAD 65 -индуцированного цитокина IL-10 и пролиферации PBMC. (D) Средний процент Treg в состоянии покоя (rTreg), активированного Treg (aTreg) и не подавляющего Treg (nsTreg) в общем Treg. Статистические различия между группами рассчитывались с использованием критерия Манна-Уитни, различия между временными точками внутри одной и той же группы рассчитывались с помощью парного критерия Вилкоксона.

    После лечения распределение подклассов GADA характеризовалось заметным снижением уровня IgG1 у пациентов с GR, в то время как IgG1 доминировал над долей подклассов IgG у пациентов с PR (рис. 4B). Более высокие уровни индуцированного GAD 65 IL-10 наблюдались у пациентов с GR, в то время как IL-10 не определялся через 15 месяцев у пациентов с PR (рис. 4C). Изменения иммунного ответа через 15 месяцев также показали значительное увеличение не супрессивных FOXP3 low CD45RA Tregs в образцах PR (рис. 4D).

    Обсуждение

    Наше исследование предполагает, что введение GAD-квасцов непосредственно в лимфатические узлы пациентов с СД1 в сочетании с пероральным витамином D может привести к лучшему сохранению С-пептида, чем у пациентов с СД1 того же возраста (2, 15). Предполагается, что витамин D улучшает эффективность за счет своего воздействия на иммунную систему, и дизайн этого исследования не позволяет отличить эффект GAD-квасцов от эффекта витамина D. Однако в других исследованиях с тем же лечением витамином D , мы видели лишь некоторую поддержку использования витамина D, но не видим явного влияния на сохранение бета-клеток (16).Идея об основном эффекте, обусловленном GAD-квасцами, подтверждается результатами, показывающими, что все основные изменения после лечения являются антиген-специфическими, в то время как неспецифические иммуномодулирующие эффекты не наблюдались. Также было описано, что только витамин D в дозе, введенной в рамках исследования, не оказывает столь выраженного воздействия на иммунную систему (7)

    В отличие от некоторых типов иммунных вмешательств, это лечение было легким и переносимым для пациентов с никаких побочных эффектов, связанных с лечением, за исключением легкой преходящей реакции в месте инъекции у нескольких пациентов.Снижение пролиферации и повышение уровня IL-10 предполагают индукцию антиген-специфических регуляторных ответов и толерантности как часть иммунологического эффекта. Наши данные указывают на различное качество иммунного ответа на GAD 65 у пациентов с меньшей пользой как до, так и после лечения. Иммунный ответ, индуцированный инъекциями GAD-квасцов в лимфатические узлы, по-видимому, во многих аспектах отличается от иммунного ответа при подкожном введении более высоких доз (10, 13, 17). Отзыв ответа на GAD 65 через 15 месяцев показал снижение активации Т-клеток CD8 + , а также уменьшение фракции T CM и увеличение T EM клеток как в CD4 + , так и в CD8. + Т-клетки.Хотя иммунологическая память проявляется обеими фракциями, T CM имеет ограниченную эффекторную функцию, в то время как T EM может быстро продуцировать эффекторные цитокины при антигенной стимуляции (18). Очевидная преобладающая доля клеток CD4 + T EM на исходном уровне была обусловлена ​​более высокой фракцией T EM у пациентов с плохим ответом. Это было интересное наблюдение, поскольку CD4 + T CM являются преобладающими клетками памяти в компартменте крови (18).Повышенная секреция цитокинов, индуцированная GAD 65 , также была обнаружена в исходных образцах от пациентов с плохим ответом. Созданные антиген-специфические Т-клетки памяти должны конкурировать с уже существующими клетками за доступ к факторам выживания (19). Таким образом, возможно, что частота предсуществующих специфических эффекторных Т-клеток и провоспалительная среда при введении аутоантигенов определяют природу Т-клеток памяти, генерируемых лечением. Если это так, наши данные подтверждают идею о том, что избирательное истощение эффекторных клеток специфической памяти, предшествующее введению аутоантигена, может повысить эффективность.

    Несколько цитокинов были индуцированы как часть иммунного ответа на GAD 65 . Среди них ИЛ-5 и ИЛ-13, которые вместе с ИЛ-4 являются основными эффекторными цитокинами Th-2, которые, как известно, стимулируют переключение изотипов антител в В-клетках и дифференцировку Т-хелперных клеток, защищают ткани от продолжающегося повреждение и обладает мощным противовоспалительным действием, как in vitro, , так и in vivo (20–22). Примечательно, что быстрое усиление GADA коррелировало с IL-5 и характеризовалось сдвигом в распределении подклассов со снижением IgG1 после третьей инъекции GAD-квасцов.Секреция IL-5 начала увеличиваться через 3 месяца, когда уровни IgG1 начали снижаться, в то время как уровни других подклассов продолжали расти. Можно утверждать, что секреция IFN-γ и TNF-α Th2-ассоциированных цитокинов может быть нежелательной. Однако цитокины могут оказывать различное действие в зависимости от их концентрации и микроокружения (23-25). Роль TNF-α в регуляции ответов Th3-типа в качестве критического компонента опосредованного IL-13 защитного эффекта (26) приписывается его Th3-промотирующей активности и зависит от цитокиновой среды (21).Таким образом, при определенных обстоятельствах цитокины могут проявлять Th2- или Th3-промотирующую активность.

    Одним из предполагаемых эффектов антигенной иммунной терапии является индукция антиген-специфичных Treg. Незначительное увеличение Tregs, наблюдаемое через 15 месяцев, наблюдалось, когда Treg определялись экспрессией FOXP3, CD25 high и отсутствием CD127, обычно используемым для определения Treg (27). Однако дальнейшее изучение пула Treg показало, что очевидное увеличение Treg объясняется увеличением процента не супрессивных клеток, в то время как популяция активированных более супрессивных Treg осталась неизменной.Не исключено, что скудное количество GAD 65 -специфических клеток препятствовало их идентификации.

    Модификации после терапии включали потерю GAD65-индуцированной пролиферации параллельно с увеличением титров GADA. Это наблюдение согласуется с предыдущим исследованием, в котором повышенные титры антител и более низкая пролиферация против инсулина были показаны в профилактическом исследовании с использованием интраназального введения инсулина лицам из группы риска, что предполагает индукцию толерантности (28).Снижение пролиферации вместе с повышенными уровнями IL-10 и снижением GAD65-индуцированной активации CD8 + Т-клеток может указывать на то, что индукция толерантности была частью иммунологического эффекта. Таким образом, наши данные предполагают индукцию антиген-специфических регуляторных ответов и толерантности как часть иммунологического эффекта введения аутоантигена в лимфатические узлы.

    Растущий консенсус в отношении гетерогенности СД1 заставляет задуматься о том, что, как и при многих других аутоиммунных заболеваниях, многие пациенты, участвующие в клинических испытаниях, получают пользу от лечения, а другие — нет (1, 29–31).Действительно, результаты испытаний, считающихся неэффективными при СД1, аналогичны результатам, наблюдаемым при других заболеваниях, что позволяет предположить, что лечение работает так же эффективно при СД1 (32). В это первое пилотное испытание с участием людей не было допущено большое количество пациентов. Следовательно, ему не хватает мощности, чтобы показать статистически значимые результаты. Нам известно, что естественное течение СД1 означает, что некоторые пациенты могут иметь остаточную функцию бета-клеток в течение довольно длительного времени даже без какого-либо вмешательства (33) и получить довольно длительную частичную ремиссию, определяемую как IDAAC <9 (34).Это может быть даже продлено для пациентов, которые участвуют в клинических испытаниях, если у них есть дополнительная мотивация для активного лечения своего заболевания. Тем не менее, сравнение результатов с данными, полученными у пациентов с плацебо из другого исследования, показало, что у них, по-видимому, наблюдалось более быстрое снижение уровня С-пептида и менее хорошее клиническое течение, чем у пациентов в нашем исследовании. Нам известно, что контрольная группа является исторической, но участвует в довольно недавнем рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании с использованием GAD-квасцов в группе, активно лечившейся, с пациентами, использующими аналогичную современную терапию и аналогичное последующее наблюдение.Тем не менее, выводы должны быть осторожными.

    Пытаясь найти биомаркеры клинического ответа, мы разделили пациентов на так называемых пациентов с хорошим ответом (9 пациентов) и пациентов с плохим ответом (3 пациента) на основе критериев ответа, использованных в других исследованиях (29). Мы обнаружили интересную разницу в иммунном ответе между людьми с хорошим и плохим ответом, но нам известно об очень небольшом количестве пациентов. Хотя наши результаты следует интерпретировать с осторожностью, мы сообщаем о них, чтобы стимулировать другие исследования для подтверждения или отклонения.

    Внутриузловое введение аутоантигена было легко осуществимо и переносимо пациентами. Хотя это открытое пилотное исследование не было разработано для измерения эффективности, похоже, что снижение уровня секретируемого С-пептида замедлилось, а суточная потребность в инсулине и HbA1c снизилась у пациентов. Здесь мы также показываем, что ранее существовавшие антиген-специфические иммунные ответы могут быть важны для результата, поднимая вопрос, следует ли использовать дополнительные иммунологические параметры, кроме положительности к аутоантителам, для отбора пациентов.Субъекты, считающиеся хорошими респондерами, показали иммунологические изменения при стимуляции ex vivo , включая продукцию IL-10, отсутствие пролиферации, снижение активации клеток CD8 + и переключение подклассов GADA. Наши результаты требуют подтверждения в мощном рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании (которое продолжается). Может быть интересно использовать внутриузловое введение других аутоантигенов или даже вместе с другими иммунотерапевтическими агентами как при СД1, так и при других аутоиммунных заболеваниях.

    Заявление о доступности данных

    Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

    Заявление об этике

    Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Комитетом по этике исследований Университета Линчёпинга, Швеция (Dnr 2014 / 153-31). Письменное информированное согласие на участие в этом исследовании было предоставлено законным опекуном / ближайшими родственниками участников.

    Вклад авторов

    FD, BT и HB провели эксперименты и проанализировали данные.FD и HB внесли свой вклад в подготовку рукописи. RC задумал исследование, разработал набор данных и анализ данных, а также написал первый черновик рукописи. У JL была идея, он разработал DIAGNODE, задумал исследование и просмотрел рукопись. JW набирал пациентов и следил за ними. PA провела анализ подклассов GADA. JL и RC являются гарантами этой работы и, как таковые, имеют полный доступ ко всем данным в исследовании и несут ответственность за целостность данных и точность анализа данных.Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

    Финансирование

    Эта работа была поддержана Barndiabetesfonden (Шведский фонд детского диабета), Шведским фондом исследований диабета и неограниченным грантом Diamyd Medical. Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе, анализе, интерпретации данных, написании этой статьи или решении представить ее для публикации.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Авторы благодарят всех участников, которые согласились участвовать в исследовании, и авторов ссылки 2, которые предоставили нам данные из их группы плацебо в качестве контроля для определенных параметров. Авторы очень благодарны доктору медицины Йоахиму Давидссону (отделение радиологии, университетская больница Линчёпинга, Швеция) за его умелое выполнение инъекций лимфатических узлов с помощью иглы; медсестрам-исследователям Софии Сьёберг (Эндокринная клиника, Университетская больница Линчёпинга, Швеция) и Анетте Нильссон (Детская больница наследной принцессы Виктории, Линчёпинг, Швеция) за уход за пациентами.Ингела Йоханссон и Госия Смолинская (Отделение педиатрии, Отделение биомедицинских и клинических наук, Факультет медицины и медицинских наук, Университет Линчёпинга, Швеция) и Клаудиа Мацке (Институт исследований диабета, Центр Гельмгольца Мюнхена, и Технический университет Мюнхена, Школа of Medicine, Forschergruppe Diabetes, Мюнхен, Германия) благодарим за умелую лабораторную работу. Авторы хотели бы обратиться за технической поддержкой со стороны основного подразделения проточной цитометрии факультета медицины и медицинских наук из Линчёпинга, Швеция.Ни один из этих людей не получил компенсации за свою роль в исследовании.

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2020.564921/full#supplementary-material

    Сокращения

    GADA, глутаминовая кислота аутоантитела к декарбоксилазе; GAD-квасцы, декарбоксилаза глутаминовой кислоты в гидроксиде алюминия; IDAAC, HbA1c с скорректированной дозой инсулина; LN — лимфатический узел; PBMC, мононуклеарные клетки периферической крови; П / к, подкожно; Th-клетка, Т-хелперная клетка; СД1, сахарный диабет 1 типа.

    Ссылки

    1. Людвигссон Дж., Фаресо М., Хьорт М., Аксельссон С., Черами М., Пиль М. и др. Лечение ГТР и секреция инсулина при недавно начавшемся диабете 1 типа. N Engl J Med (2008) 359: 1909–20. doi: 10.1056 / NEJMoa0804328

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    2. Верретт Д.К., Банди Б., Беккер Д.Д., ДиМеллио Л.А., Гительман С.Е., Голанд Р. и др. Антигенная терапия вакциной декарбоксилазы глутаминовой кислоты (GAD) у пациентов с недавно начавшимся диабетом 1 типа: рандомизированное двойное слепое исследование. Ланцет (2011) 378: 319–27. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (11) 60895-7

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    3. Людвигссон Дж., Криски Д., Касас Р., Баттелино Т., Кастаньо Л., Гриннинг Дж. И др. Терапия антигеном GAD65 при недавно диагностированном сахарном диабете 1 типа. N Engl J Med (2012) 366: 433–42. doi: 10.1056 / NEJMoa1107096

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4. Beam CA, MacCallum C, Herold KC, Wherrett DK, Palmer J, Ludvigsson J.Вакцина GAD снижает потерю инсулина при недавно диагностированном диабете 1 типа: результаты байесовского метаанализа. Диабетология (2017) 60: 43–9. doi: 10.1007 / s00125-016-4122-1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    5. Аткинсон М.А., Роэп Б.О., Посгай А., Уилер Д.С.С., Пикман М. Проблема модуляции аутоиммунитета β-клеток при диабете 1 типа. Ланцет, диабет, эндокринол (2019) 7: 52–64. DOI: 10.1016 / S2213-8587 (18) 30112-8

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    6.Роэп Б.О., Уиллер DCS, Пикман М. Иммуномодулирующая терапия на основе антигенов для диабета 1 типа: эра точной медицины. Ланцет, диабет, эндокринол (2019) 7: 65–74. DOI: 10.1016 / S2213-8587 (18) 30109-8

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9. Гринбаум К.Дж., Мандруп-Поулсен Т., Макги П.Ф., Баттелино Т., Хаастерт Б., Людвигссон Дж. И др. Тест на переносимость смешанной пищи по сравнению с тестом на стимуляцию глюкагоном для оценки функции бета-клеток в терапевтических испытаниях при диабете 1 типа. Уход за диабетом (2008) 31: 1966–71. doi: 10.2337 / dc07-2451

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    10. Cheramy M, Skoglund C, Johansson I, Ludvigsson J, Hampe CS, Casas R. Лечение GAD-квасцов у пациентов с диабетом 1 типа и последующее влияние на распределение подклассов GADA IgG, активность фермента GAD65 и гуморальный ответ . Clin Immunol (2010) 137: 31–40. doi: 10.1016 / j.clim.2010.06.001

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11.Бонифачо Э., Скирполи М., Кредель К., Фухтенбуш М., Циглер АГ. В ранних ответах аутоантител при предиабете преобладают IgG1, что предполагает антиген-специфическую регуляцию. J Immunol (1999) 163: 525–32.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    12. Тавира Б., Барсенилла Х., Уолберг Дж., Ахенбах П., Людвигссон Дж., Касас Р. Введение внутрилимфатической глутаминовой кислоты декарбоксилазы-квасцы индуцировало Th3-подобную иммуномодуляцию у пациентов-респондентов: пилотные клинические испытания при диабете 1 типа . J Diabetes Res (2018) 2018: 93

    . doi: 10.1155 / 2018/93

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    13. Аксельссон С., Черами М., Акерман Л., Пиль М., Людвигссон Дж., Касас Р. Клеточные и гуморальные иммунные ответы у пациентов с диабетом 1 типа, участвующих в исследовании III фазы вмешательства GAD-квасцов. Уход за диабетом (2013) 36: 3418–24. doi: 10.2337 / dc12-2251

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    14.Макс Андерсен MLC, Hougaard P, Pörksen S, Nielsen LB, Fredheim S, Svensson J, et al. Определение частичной ремиссии: валидация на основе HbA1c с скорректированной дозой инсулина (IDAA1C) у 129 датских детей с впервые возникшим диабетом 1 типа. Детский диабет (2014) 15: 469–76. doi: 10.1111 / pedi.12208

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. Герольд К.С., Гительман С.Е., Машарани Ю., Хагопиан В., Бисикирска Б., Дональдсон Д. и др. Однократный курс моноклонального антитела против CD3 hOKT3gamma1 (Ala-Ala) приводит к улучшению ответов С-пептида и клинических параметров в течение по меньшей мере 2 лет после начала диабета 1 типа. Диабет (2005) 54: 1763–9. DOI: 10.2337 / диабет.54.6.1763

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    16. Людвигссон Дж., Рутрей I, Эллуру С., Лендерсон П., Ларссон Х.Э., Ратсман Б. и др. Комбинированное лечение декарбоксилазой-квасцами витамина D, ибупрофена и глутаминовой кислоты при недавно начавшемся диабете I типа: уроки рандомизированного пилотного исследования DIABGAD. Future Sci OA (2020) 6 (7): FSO604. doi: 10.2144 / fsoa-2020-0078

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17.Axelsson S, Hjorth M, Ludvigsson J, Casas R. Снижение GAD (65) -специфического фенотипа Th2 / Tc1 у детей с диабетом 1 типа, получавших GAD-квасцы. Diabetes Med (2012) 29: 1272–8. doi: 10.1111 / j.1464-5491.2012.03710.x

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Саллусто Ф., Гегинат Дж., Ланзавеккья А. Центральная память и субпопуляции эффекторных Т-клеток: функция, генерация и поддержание. Annu Rev Immunol (2004) 22: 745–63. DOI: 10.1146 / annurev.immunol.22.012703.104702

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Fenimore J, Young HA. Регуляция экспрессии IFN-γ. Adv Exp Med Biol (2016) 941: 1–19. doi: 10.1007 / 978-94-024-0921-5_1

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25. Флейшон Л., Топильски И., Шосеев Д., Хершковиз Р., Файерман Э., Лево Ю. и др. На переднем крае: противовоспалительные свойства низкого уровня IFN-гамма. J Immunol (2002) 168: 3707–11. DOI: 10.4049 / jimmunol.168.8.3707

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26. Артис Д., Хамфрис Н.Э., Бэнкрофт А.Дж., Ротвелл, штат Нью-Джерси, Поттен С.С., Гренсис Р.К. Фактор некроза опухоли альфа является критическим компонентом опосредованных интерлейкином 13 защитных реакций Т-хелперных клеток 2 типа во время заражения гельминтами. J Exp Med (1999) 190: 953–62. doi: 10.1084 / jem.190.7.953

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Лю В., Патнам А.Л., Сюй-Ю З., Сзот Г.Л., Ли М.Р., Чжу С. и др.Экспрессия CD127 обратно коррелирует с FoxP3 и подавляющей функцией CD4 + T reg-клеток человека. J Exp Med (2006) 203: 1701–11. doi: 10.1084 / jem.20060772

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Harrison LC, Honeyman MC, Steele CE, Stone NL, Sarugeri E, Bonifacio E, et al. Функция бета-клеток поджелудочной железы и иммунные ответы на инсулин после интраназального введения инсулина людям с риском диабета 1 типа. Уход за диабетом (2004) 27 (10): 2348–55.doi: 10.2337 / diacare.27.10.2348

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    29. Герольд К.С., Гительман С.Е., Элерс М.Р., Готтлиб П.А., Гринбаум С.Дж., Хагопиан В. и др. Лечение теплизумабом (анти-CD3 mAb) сохраняет ответы на С-пептид у пациентов с впервые возникшим диабетом типа 1 в рандомизированном контролируемом исследовании: метаболические и иммунологические характеристики на исходном уровне определяют подгруппу респондеров. Диабет (2013) 62: 3766–74. doi: 10.2337 / db13-0345

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30.Халлер М.Дж., Гительман С.Е., Готтлиб П.А., Михельс А.В., Перри Д.Дж., Шульц А.Р. и др. Комбинированная терапия антитимоцитарным глобулином и G-CSF приводит к устойчивым иммуномодулирующим и метаболическим эффектам в подгруппе респондеров с установленным диабетом 1 типа. Диабет (2016) 65: 3765–75. doi: 10.2337 / db16-0823

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31. Герольд К.С., Песковиц М.Д., Макги П., Краузе-Штайнрауф Х., Испания Л.М., Бурсье К. и др. Повышенный пролиферативный ответ Т-лимфоцитов на островковые антигены выявляет клинических респондентов на терапию моноклональными антителами к CD20 (ритуксимаб) при диабете 1 типа. Дж. Иммунол (2011) 187: 1998–2005. doi: 10.4049 / jimmunol.1100539

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    32. Бингли П.Дж., Уерретт Д.К., Шульц А., Рафкин Л.Е., Аткинсон М.А., Гринбаум С.Дж. Сеть испытаний диабета 1 типа: многогранный подход к применению модифицирующей болезнь терапии для клинического применения при диабете 1 типа. Уход за диабетом (2018) 41: 653–61. doi: 10.2337 / dc17-0806

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34.Nagl K, Hermann JM, Plamper M, Schröder C, Dost A, Kordonouri O, et al. Факторы, способствующие частичной ремиссии при диабете 1 типа: анализ на основе скорректированного по дозе инсулина HbA1c у 3657 детей и подростков из Германии и Австрии. Детский диабет (2017) 18: 428–34. doi: 10.1111 / pedi.12413

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Amino h3O Reviews (Yoga Burn) Реальная добавка для похудания?

    Денвер, Колорадо, 23 апреля 2021 г. (GLOBE NEWSWIRE) —

    Amino h3O — это пищевая добавка, продаваемая в Интернете компаниями Yoga Burn и Zoe Bray-Cotton.

    Утверждается, что добавка поддерживает способность вашего тела худеть. Ежедневно принимая Yoga Burn Amino h3O, вы можете дополнить эффекты своей программы похудания, потеряв больше веса, чем обычно.

    Амино h3O реально работает? Как работает Amino h3O? Узнайте все, что вам нужно знать о добавке Yoga Burn Amino h3O сегодня, в нашем обзоре.

    Что такое амино h3O?


    Amino h3O — это добавка для похудения, которая продается исключительно через Интернет через YogaBurnChallenge.com.

    Созданный Зои Брей-Коттон и командой Yoga Burn, Amino h3O якобы может повысить эффективность ваших тренировок, помогая вам похудеть.

    Amino h3O не содержит калорий, углеводов, сахара, глютена и вегетарианец. Вы принимаете его ежедневно, чтобы улучшить результаты тренировок. Это может дать вам больше энергии, не полагаясь на стимуляторы, такие как кофеин.

    Любой может принимать Amino h3O в дополнение к потере веса. Тем не менее, добавка специально предназначена для людей, которые хотят повысить эффективность своих тренировок Yoga Burn, включая Yoga Burn Total Body Challenge и другие программы йоги.

    Вот как официальный сайт Amino h3O объясняет преимущества добавки:

    «Amino h3O был разработан для поддержки спокойного, устойчивого и надежного потока энергии, сосредоточенности и ясности ума без кофеинового сбоя или нежелательного дрожания, которое сопровождает кофе и «энергетики». Это особенно важно для женщин, которые хотят сосредоточиться при занятиях йогой ».

    Просто смешайте одну мерную ложку Amino h3O с водой, коктейлем или напитком по вашему выбору, а затем принимайте добавку ежедневно, чтобы достичь ваших целей по снижению веса.

    Как работает Amino h3O?

    Каждая добавка для похудения утверждает, что повышает энергию и эффективность похудания с использованием натуральных ингредиентов. Что отличает Amino h3O от других формул для похудения? Почему он превосходит обычные добавки с аминокислотами или BCAA?


    Основная часть формулы Amino h3O состоит из четырех аминокислот, включая L-лейцин, L-изолейцин, L-валин и L-глутамин.

    Лейцин, изолейцин и валин представляют собой аминокислоты с разветвленной цепью (BCAA).Это три незаменимые аминокислоты, которые обычно входят в состав аминокислотной добавки. Например, Amino h3O использует концентрацию трех аминокислот 2: 1: 1.

    Многие люди ежедневно принимают добавки с аминокислотами или BCAA для ускорения роста мышц. Ваше тело использует аминокислоты для создания белка, а белок является строительным материалом для мышц. Аминокислоты являются предшественниками белка в вашем теле. Вашему организму нужны аминокислоты для создания белка. Аминокислоты необходимы вашему организму и для других важных функций.

    Помимо помощи в росте мышц, Amino h3O и другие добавки с разветвленной цепью помогают выполнять упражнения. Например, они могут повысить вашу выносливость, помогая тренироваться в течение более длительного периода времени.

    Некоторые добавки BCAA также помогают похудеть, усиливая эффект сжигания жира после тренировки. Они могут помочь вам добиться большего во время тренировки, что приведет к еще большей потере веса и сжиганию калорий.

    Amino h3O от Yoga Burn содержит смесь аминокислот, которые помогут вам достичь ваших целей по снижению веса, включая три BCAA и L-глютамин.

    Что делает Amino h3O?

    Зои Брэй-Коттон и команда Yoga Burn утверждают, что вы можете принимать Amino h3O «каждый день и в любое время дня», чтобы наслаждаться результатами.

    Тем не менее, они специально рекомендуют принимать добавку до, во время и после тренировки для достижения наилучших результатов — аналогично тому, как вы бы принимали любую добавку BCAA.

    Индивидуальные результаты различаются. Тем не менее, Amino h3O продается как способ дополнить результаты похудания, улучшить сжигание жира, ускорить восстановление мышц после тренировки и получить другие преимущества.

    Некоторые из преимуществ, рекламируемых на официальной странице продукта Yoga Burn Amino h3O, включают:

    • Сократить голод
    • Улучшить потерю жира
    • Улучшить мышечную массу
    • Улучшить силу и восстановление
    • Избегать вздутия живота или употребления лишних калорий

    Наслаждайтесь чистым, стабильным и надежным потоком энергии в течение всего дня без сбоев и дрожи.

    Amino h3O объединяет все эти преимущества в «освежающую и вкусную формулу».В формуле используются сукралоза и натуральные ароматизаторы, чтобы придать смеси сладость и аромат. Просто смешайте его с водой и пейте ежедневно, чтобы получить рекламируемые преимущества.

    Зои Брей-Коттон уверена, что формула работает на всех:

    «Я говорю о том, что я считаю наиболее совершенным и полным дополнением к вашему здоровому образу жизни и вашей физической активности, которое может помочь вам добиться желаемых результатов. желать быстрее, проще и приятнее, чем вы когда-либо думали.”

    Из-за всех этих преимуществ Зои Брей-Коттон рекомендует добавку всем, кто следит за программой Yoga Burn, включая Yoga Burn Total Body Challenge.

    Как работают BCAA?

    Аминокислоты с разветвленной цепью (BCAA) состоят из трех незаменимых аминокислот, включая лейцин, изолейцин и валин. Amino h3O содержит эти три BCAA в концентрации 2: 1: 1.

    Эти три аминокислоты называются аминокислотами с разветвленной цепью, аминокислотами, потому что это единственные три аминокислоты, у которых цепь разветвлена ​​в одну сторону.

    Благодаря этой цепочке BCAA играют решающую роль в формировании мышц. Они составляют большую часть аминокислот в вашем организме.

    Лейцин, изолейцин и валин считаются незаменимыми аминокислотами. Незаменимая аминокислота — это аминокислота, которую ваше тело не может производить самостоятельно. Вы должны получать их из своего рациона.

    Ваше тело использует BCAA в качестве строительных блоков для белка и мышц. Вот почему многие бодибилдеры или те, кто регулярно занимается спортом, принимают добавки BCAA до, во время или после тренировки.

    Некоторые исследования показывают, что BCAA также играют роль в регулировании уровня сахара в крови, утомляемости, выработке энергии и многом другом.

    Вот как Зои Брэй-Коттон объясняет преимущества Amino h3O на официальном сайте:

    «Amino h3O был разработан исключительно для таких активных женщин, как мы. И это идеальное решение, помогающее защитить, сохранить и улучшить наши сухие мышцы, силу и изгибы, а также помочь увеличить сжигание жира, энергию, выносливость, восстановление, гидратацию и умственную концентрацию.”

    В целом, BCAA имеют решающее значение для общего здоровья и хорошего самочувствия, и они особенно важны, если вы регулярно занимаетесь спортом.

    Как работают электролиты?

    Amino h3O не только содержит BCAA: он также содержит электролиты, включая магний, натрий и калий.

    Электролиты — это минералы, содержащиеся в некоторых энергетических напитках, спортивных напитках и пищевых добавках. Они необходимы для увлажнения. Вашему организму для функционирования необходимы электролиты.Если в вашей крови низкий уровень электролитов, питьевая вода сама по себе не поможет вам гидратировать.

    Вы выделяете электролиты с потом во время физической активности. По мере тренировки вы теряете электролиты. Это может вызвать у вас чувство усталости. Из-за этого мышцы могут болеть. Это может задержать выздоровление.

    Вот почему многие спортсмены принимают добавки с электролитами или спортивные напитки. Они содержат электролиты, необходимые вашему организму для восстановления после тренировки.

    Амино h3O содержит калий, натрий и магний (от 3% до 4% от рекомендуемой дневной нормы), которые на сегодняшний день являются тремя наиболее известными электролитами в спортивных напитках.Эти электролиты могут пополнить естественные запасы вашего тела. В сочетании с BCAA в Amino h3O они могут зарядить вас энергией, увлажнить вас и обеспечить максимальную эффективность тренировки.

    Amino h3O Ingredients

    Создатели Amino h3O заранее раскрывают полный список ингредиентов и дозировок, что упрощает сравнение Amino h3O с другими добавками с BCAA и электролитами, продаваемыми сегодня в Интернете.


    В целом, Amino h3O содержит ингредиенты, аналогичные обычным BCAA или добавкам с электролитами.Он также имеет сильную дозировку: 12,37 г на порцию, вы получаете 9,5 г BCAA в каждой мерной ложке, включая 7 г BCAA и 2,5 г L-глутамина. Все они считаются хорошими размерами порций, и они аналогичны дозам, наблюдаемым в добавках BCAA для бодибилдинга, добавках для восстановления после тренировки и других формулах, продаваемых сегодня в Интернете.

    Вот все ингредиенты в одной мерной ложке (12,37 г) Amino h3O:

    • 90 мг витамина C (100% DV)
    • 20 мг кальция (2% DV)
    • 16 мг магния (4 % DV)
    • 60 мг натрия (3% DV)
    • 180 мг калия (4% DV)
    • 7 г смеси BCAA 2: 1: 1 с L-лейцином, L-изолейцином и L-валином
    • 2.5 г L-глутамина
    • Другие ингредиенты, включая лимонную кислоту, натуральные ароматизаторы, диоксид кремния, сукралозу, FD&C красный № 40 и желтый № 5

    В целом, Amino h3O содержит простой список ингредиентов, аналогичный тому, что вы видите в любом другие добавки BCAA. Поскольку Amino h3O содержит 0 г сахара, вместо него в качестве подсластителя используется сукралоза. Формула также приобретает свой уникальный цвет за счет красных и желтых красителей.

    Как принимать Amino h3O

    Создатели Amino h3O рекомендуют принимать по одной мерной ложке формулы каждое утро с водой:

    • Смешайте каждую порцию (одну мерную ложку без горки) с 8–14 жидкими унциями воды, с поправкой на личные вкусовые предпочтения
    • Хорошо встряхните и употребите в течение 30-60 минут после смешивания
    • Принимайте Amino h3O до, во время и после тренировки или между приемами пищи в дни, когда не занимайтесь спортом

    Вы также можете смешать Amino h3O с коктейлем или напиток по вашему выбору.Однако, поскольку формула сама по себе обладает сильным ароматом, лучше всего смешать ее с водой.


    Вы можете смешать Amino h3O с водой или шейкером, а затем взять его с собой в спортзал. Люди обычно принимают добавки BCAA до, во время и после тренировки. Держа Amino h3O рядом с собой на протяжении всей тренировки, вы можете сохранять заряд энергии на протяжении всей тренировки, давая своему телу необходимые ингредиенты после тренировки.


    (ОГРОМНАЯ ЭКОНОМИЯ СЕГОДНЯ) Щелкните здесь, чтобы получить добавку Yoga Burn Amino h30 по самой низкой цене прямо сейчас

    Научные доказательства для Amino h3O

    Существует множество научных доказательств, подтверждающих использование BCAA и L-глутамина для похудания, энергии и восстановления после тренировки.Вашему организму нужны эти ингредиенты, и по этой причине многие люди принимают добавки BCAA ежедневно.

    В целом, Amino h3O содержит ингредиенты, аналогичные любым BCAA или аминокислотным добавкам, что позволяет легко оценить научные данные, стоящие за ним.

    В этом исследовании 2011 года исследователи обнаружили связь между потреблением аминокислот с разветвленной цепью (BCAA) и потерей веса . Исследователи обнаружили, что люди, которые принимали высокие уровни BCAA в день, реже страдали избыточным весом или ожирением.Чтобы прийти к такому выводу, исследователи проанализировали 4429 мужчин и женщин в возрасте от 40 до 59 лет. Люди, которые имели высокое ежедневное потребление BCAA, как правило, были в лучшей форме, чем люди, которые имели низкое ежедневное потребление BCAA.

    Другие исследования подтвердили влияние BCAA на потерю веса. В этом исследовании 2018 года исследователи ежедневно давали женщинам 6 г BCAA или плацебо, а затем просили их придерживаться низкокалорийной диеты. У женщин дефицит калорий составлял 500 калорий в день в течение четырех недель. В конце исследования исследователи обнаружили, что BCAA не оказали существенного влияния на потерю веса.Тем не менее, исследователи обнаружили улучшения в составе тела в группе BCAA, включая соотношение талии и бедер и стройные ноги, среди других преимуществ.

    Множественные исследования подтвердили использование добавок BCAA для снижения веса , энергии и восстановления после тренировки . В этом исследовании 2018 года исследователи обнаружили, что добавки BCAA помогли уменьшить болезненность мышц после упражнений, помогли с восстановлением и улучшили выполнение упражнений, среди других преимуществ.

    Amino h3O не только содержит BCAA: он также содержит аминокислоту под названием глутамин .L-глутамин — самая распространенная и универсальная аминокислота в организме. Это важно для иммунной функции, кровообращения, обмена веществ и многого другого. Некоторые исследования показывают, что прием добавки с глютамином может помочь во всем: от наращивания мышечной массы до эффективности иммунной системы, метаболизма и потери веса.

    Амино h3O также содержит электролитов . У людей с электролитным дисбалансом могут развиться метаболические нарушения, если они не устранят этот электролитный дисбаланс с течением времени. Слишком много электролитов или слишком мало электролитов может даже отправить вас в отделение неотложной помощи.Как объясняет Stanford Medicine, добавки с электролитами не предотвращают болезни у спортсменов и не обеспечивают 100% защиту от высоких температур. Однако они могут поддерживать производительность различными способами.

    В целом, Amino h3O содержит ингредиенты, аналогичные любым аминокислотам или добавкам BCAA, но в натуральной и сильнодействующей форме. Формула содержит ингредиенты, которые, помимо других преимуществ, могут способствовать снижению веса, энергии и восстановлению после тренировки.

    Amino h3O Pricing

    Amino h3O стоит 69 долларов за флакон, хотя цена снижается до 59 или 49 долларов за флакон при заказе от 3 до 5 единиц.

    Вот как расценки на официальном сайте YogaBurnChallenge.com:

    • 1 бутылка: $ 69 + 9,95 $ Доставка
    • 3 бутылки: 177 $ + 9,95 $ Доставка
    • 6 бутылок:

    Большинство добавок BCAA стоят от 20 до 40 долларов за бутылку и содержат ингредиенты, аналогичные Amino h3O. При цене 69 долларов за бутылку Amino h3O является одной из самых дорогих добавок BCAA, доступных сегодня.


    Политика возврата Amino h3O

    Amino h3O имеет 60-дневную гарантию возврата денег.Вы можете запросить полный возврат средств за покупку в течение 60 дней, не задавая никаких вопросов.

    Если вы не удовлетворены Amino h3O по какой-либо причине или если вы не испытали каких-либо заметных преимуществ после приема добавки, вы имеете право на полный возврат средств в течение 60 дней с даты первоначальной покупки.

    Адрес возврата: 6000 Pardee Road, Taylor, MI 48180, USA

    О Yoga Burn

    Amino h3O продается в Интернете на Yoga Burn, веб-сайте, посвященном фитнесу и образу жизни, разработанному и созданному Зои Брей-Коттон и Digital Health Solutions, Inc.

    Yoga Burn предлагает в Интернете пищевые добавки, руководства по йоге, программы по снижению веса и другие продукты. Зоя использует свой десятилетний опыт преподавания йоги для создания товаров для фитнеса и здоровья.

    Сегодня Yoga Burn помог людям во всем мире открыть для себя новые стратегии йоги для похудания. Компания наиболее известна своей программой Yoga Burn Total Body Challenge, комплексной программой тренировок, которая учит вас, как похудеть с помощью йоги, а также добавкой Yoga Burn Renew.

    Вы можете связаться с Yoga Burn и командой Digital Health Solutions по следующему адресу:

    • Электронная почта: support @ yogaburnchallenge.com
    • Телефон: 1 (866) 730-7334
    • Адрес для возврата: 6000 Pardee Road, Taylor, MI 48180, USA
    • Почтовый адрес: Digital Health Solutions Inc., Braemar Court, Deighton Road, St. Michael BB 14017 Барбадос

    Final Word

    Amino h3O — это дорогостоящая добавка с разветвленной цепью BCAA, которая продается в качестве средства для похудания, повышения энергии на весь день и решения для восстановления после тренировки.

    Принимая Amino h3O ежедневно, вы можете дать своему организму аминокислоты и электролиты, необходимые для поддержания активности и энергии в течение дня.Добавка содержит три аминокислот с разветвленной цепью и L-глютамин в высокой дозе, что дает вашему организму ингредиенты, необходимые для восстановления и энергии.

    Хотя Amino h3O содержит сильные дозы всех рекламируемых ингредиентов, он стоит по более высокой цене, но часто бывает так, что вы получаете то, за что платите, и, если вы хотите результатов, Yoga Burn Amino h30 BCAA Зои Брей-Коттон добавка — это то, что нужно сегодня. У некоторых могут возникнуть проблемы с использованием красителей, сукралозы и других ингредиентов (в наши дни они относительно распространены в пищевых добавках), они на 100% не содержат кофеина и стимуляторов.Если при использовании добавки BCAA Yoga Burn возникают какие-либо негативные побочные эффекты или вы чувствуете желание спросить больше перед заказом, обязательно сначала обратитесь в службу поддержки.

    Чтобы узнать больше об Amino h3O или купить добавку сегодня, посетите YogaBurnChallenge.com.

    Официальный веб-сайт: https://yogaburnchallenge.com/amino-aff/

    Контактная информация: Amino h3O

    Электронная почта: [email protected]

    Телефон: 1 (866) 730- 7334

    О компании MarketingByKevin.com

    Этот обзор продукта опубликован Marketing By Kevin. Обзоры Marketing By Kevin исследуются и формулируются группой опытных защитников естественного здоровья, которые годами посвятили себя поиску продуктов для здоровья и оздоровительных программ самого высокого качества. Следует отметить, что любая покупка на этом ресурсе осуществляется на ваш страх и риск. Рекомендуется проконсультироваться с квалифицированным профессиональным практикующим врачом, прежде чем делать заказ сегодня, если есть какие-либо дополнительные вопросы или проблемы.На любой заказ, оформленный по ссылкам в этом выпуске, распространяются все положения и условия предложения официального сайта. Вышеуказанная исследуемая информация не несет никакой прямой или косвенной ответственности за ее точность.

    Раскрытие информации для аффилированных лиц:

    Ссылки, содержащиеся в этом обзоре продукта, могут привести к получению небольшой комиссии для Marketing By Kevin, если вы решите приобрести рекомендованный продукт без дополнительных затрат для вас. Это направлено на поддержку нашей исследовательской и редакционной группы, и, пожалуйста, знайте, что мы рекомендуем только высококачественные продукты.

    Заявление об отказе от ответственности:

    Пожалуйста, поймите, что любые советы или рекомендации, представленные здесь, даже отдаленно не заменяют разумный медицинский совет от лицензированного поставщика медицинских услуг. Обязательно проконсультируйтесь с профессиональным врачом, прежде чем принимать какое-либо решение о покупке, если вы принимаете лекарства или у вас возникли проблемы после подробностей обзора, представленных выше.